2020—2021年兒童諾如病毒相關性胃腸炎的分子流行病學分析

沈燕，鈕文思，馮麗平 ，龔恬安，沈雪鋒

1.蘇州市第九人民醫院兒內科，江蘇蘇州 215200；2.蘇州市吳江區兒童醫院兒內科，江蘇蘇州 215200

誘發兒童病毒性腹瀉的一項重要病原體就是諾如病毒，其也是引起各個年齡段群體患上食源性疾病與胃腸炎的重要原因。諾如病毒相關性胃腸炎的突出表征是出現嘔吐、腹瀉，同時合并以下情況：全身發熱、腹痛、惡心、厭食、乏力、驚厥等。大部分患者的感染等級不高，不過還是會有重癥病例，尤其是5歲以下的兒童、超過65歲的老年人，以及免疫力差人群等。諾如病毒是杯狀病毒科中諾如病毒屬，其變異性極高，而研究分析兒童諾如病毒相關性胃腸炎的病原學特點、基因型變化，有利于有效防控諾如病毒感染[1-2]。本文選取2020年1月—2021年12月在蘇州市第九人民醫院接受治療的1 546例急性胃腸炎患兒作為本研究對象，探討此階段的兒童諾如病毒相關性胃腸炎的分子流行病學特點，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取于本院接受治療的1 546例急性胃腸炎患兒作為研究對象，患兒家屬了解本研究的目的，一致表示自愿參與。本研究經本院醫學倫理委員會許可。

1.2 納入與排除標準

納入標準：所有患兒都符合急性腸胃炎診斷標準：①大便次數變多，每天排便頻率在3次或以上；②糞便性狀發生改變，出現水樣便、稀便；③大便常規檢查結果顯示，白細胞和紅細胞計數均≤10個/高倍鏡視野；④病程在2周以內。

排除標準：重要臟器功能異常者；臨床資料不全者。

1.3 方法

1.3.1 處置標本，提取病毒RNA 收集1 546份糞便標本，男926份，女620份。提取0.2 mL大便標本，或提取如一顆豌豆大的大便樣本，添加0.8 mLPBS緩沖溶液至樣本中，完全混合后調配為20%的混懸液，實施離心操作，提取上清液。使用病毒核酸提取試劑盒，提取病毒RNA，嚴格依據試劑盒說明書進行操作。

1.3.2 VP1區序列擴增、測序 通過RNA逆轉錄試劑盒逆轉錄合成cDNA，挑選TaKaRa Premix Taq試劑盒，對諾如病毒VP1區序列進行擴增操作。①反應系統。上下游引物（10 μmol/L）各為1 μL， cDNA為2.5 μL，10×Taq buffer為2.5 μL，dNTP Mix（2.5 mol/L）為 2.0 μL，MgCl 2（25 mmol/L）為 2.5 μL，Taq DNA Polymerase（5 U/μL）為 0.15 μL，ddH2O 為 13.35 μL。②反應條件。于94℃溫度下，進行5 min預變性操作；于94℃溫度中進行變性操作30 s，于55℃溫度下，進行退火操作30 s，于72℃溫度下，進行延伸操作1 min，重復35次；之后再72℃溫度下，進行延伸操作7 min，達到4℃的溫度時，停止操作。提交1.5%瓊脂糖凝膠電泳陽性的PCR產物至相關機構測序。

1.3.3 分析序列 通過DNAstar軟件編輯已經測定的序列，應用PubMed在線BLAST功能展開比對，使用在線分型工具檢索諾如病毒的基因型。通過MEGA 5.05軟件開展多序列比對操作，運用以下方法構架親緣進化樹：Neighbor-joining法、Kimura2-parameter模型，再使用Bootstrap檢測進化樹準確性，反復檢驗1 000次。

1.4 統計方法

采用SPSS 23.0統計學軟件處理數據，符合正態分布的計量資料以（）表示，進行t檢驗；計數資料以[n(%)]表示，進行χ2檢驗，P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 檢測諾如病毒結果

本次研究共收集1 546份，檢出諾如病毒陽性比率為11.51%（178/1 546）；2020年陽性檢出比率為12.09%（97/802），2021年檢出陽性比率為10.89%（81/744）。不同年份檢出諾如病毒陽性的情況比較，差異無統計學意義（χ2=0.552，P=0.457）。在檢出的諾如病毒中，175例為GII型，占比98.31%（175/178），3例為GI型，占比1.69%（3/178）。

2.2 患者性別狀況

178例諾如病毒陽性患兒中，男性患兒占比13.82%（128/926），女性患兒占比7.58%（47/620），男性檢出比率較女性要高，差異有統計學意義（χ2=14.415，P<0.05）。

2.3 患者年齡狀況

參與本研究的患兒年齡包括：<6月齡、6月齡~、12月齡~、18月齡~、24月齡~、≥36月齡。不同年齡段諾如病毒陽性比率依次為3.59%（11/306）、13.41%（72/537）、17.55%（56/319）、14.84%（23/155）、7.34%（7/95）、6.72%（9/134），對比不同年齡段諾如病毒陽性比率，差異有統計學意義（P<0.05）。年齡<2歲的患兒得兒童諾如病毒相關性胃腸炎比率最高，達到94.94%（169/178）。年齡在12~18月齡的患兒中，諾如病毒陽性比率最高，達到17.55%，在全部諾如病毒陽性患兒中，占比31.28%（56/178）。見表1。

表1 2020—2021年患兒年齡狀況

2.4 感染時間狀況

分析2020—2021年不同月份發生兒童諾如病毒相關性胃腸炎的情況，可以得出：疾病高發時段為8~10月份，不同年份稍微有點不同。2020年檢測出諾如病毒高發時段是8月份、9月份，檢出比率分別為35.79%、34.57%。2021年檢出諾如病毒高發時段是9月份、10月份，檢出比率分為32.26%、35.63%。見表2。

表2 2020—2021年不同月份出現兒童諾如病毒相關性胃腸炎狀況

2.5 基因型狀況

比對核酸序列發現，從178份陽性標本內檢測出8類基因型，其中主要是GⅡ. 4型，占比71.35%（127/178），同時114份是GⅡ. 4 Sydney 2012，占比64.04%（114/178）；緊隨其后是GⅡ. 3，占比16.29%（29/178），然后分別為GⅡ. 2，占比6.74%（12/178）；GⅡ. 6占比2.25%（4/178）；GⅡ.17占比1.12%（2/178）；GI.3占比 1.12%（2/178）；GⅠ.2占比0.56（1/178），GI.5占比0.56%（1/178）。1月、 3~5月份，主要流行株為GⅡ. 3，其他各月份流行株包括GⅡ. 6、GⅡ. 17、GⅠ. 2、GⅠ. 3、GⅠ. 5。2020年、2021年各檢測出1例GI。

3 討論

諾如病毒（norovirus,NoV）是導致兒童病毒性腹瀉的重要病原體，相關調查顯示，每年NoV會導致全球超過6億人患上胃腸炎，并致近20萬人死亡[3-4]。此疾病的突出征狀是出現嘔吐、腹瀉，攜帶自限性，而以下群體患上此疾病則會有極為嚴重后果產生，即：5歲以下的兒童、超過65歲的老年人，以及免疫力低下人群。

在NoV的流行過程中，重組株占比不斷攀升，同時產生的新型重組株會誘發大面積暴發疾病[5]。

相關研究發現，不同地區檢測出諾如病毒陽性概率有所不同，分析其原因在于：以下因素會一定程度上影響檢測出諾如病毒陽性的準確率，即：經濟、氣候、環境、飲食生活習慣、健康意識、易感體質等[6-7]。相關文獻指出，濕度的改變為輪狀病毒的持續性創造條件，加大經由被污染表面擴散病毒的概率，進而可推定濕度會諾如病毒的持續性帶去一定影響[8]。另有研究發現，極端天氣變化也會增加出現病毒性胃腸炎的概率，比如：厄爾尼諾南方濤動，被認定為引起病毒性胃腸炎的重要原因[9-10]?，F在分析諾如病毒，環境因素有無影響諾如病毒感染，如：濕度、溫度、下雨、大風、洪水等，則要同步追蹤諾如病毒和氣候條件，并要深入研究才能有效判定。就易感染諾如病毒的群體而言，是因為其機體中腸道上皮表面存有組織血型抗原，及分泌者的巖藻糖轉移酶2基因突變，進而破壞相應酶的活性，腸道上皮細胞無法表達血型抗原，最終無法抵御諾如病毒而被感染，相較于分泌者而言，非分泌者感染諾如病毒概率更低[11-12]。

本研究結果表明，諾如病毒高發階段是8~10月份，同過往監測情況基本相同。在我國中部地區，諾如病毒的高發期是10~12月份，在北方地區，諾如病毒的高發期是2月份。諾如病毒全世界季節模式表明，其高發期是冬季，這就表明諾如病毒的傳播同溫度存著聯系，另有研究指出，降雨量和季節性屬于正相關性[13-14]。在我國，不同地區諾如病毒的高發期有所不同，而這同氣溫、降雨量等因素有一定聯系。此區別可以作為日后不同區域確定接種疫苗時間的重要參考。

本研究結果表明，低于2歲的兒童易患兒童諾如病毒相關性胃腸炎。感染諾如病毒的最小年齡為是低于6月齡，占比3.59%。出現這一結果，主要是因為：此年齡段小兒從母體中得到保護性的抗體，再加患兒活動區域窄，不太容易接觸到感染源[15]。本研究中，檢測出諾如病毒陽性的男性患兒多于女性患兒，男性兒童患諾如病毒相關性胃腸炎的概率顯著較高，這主要是男性患兒缺少足夠的衛生意識，活動區域大，更有機會接觸病毒而發生感染。

綜上所述，諾如病毒的流行病學會被諸多因素所干擾，如體質、環境、氣候、生活習慣等。而追蹤分析兒童諾如病毒相關性胃腸炎的流行病學特點，可提供具有借鑒價值的數據，以利于更好防控兒童諾如病毒相關性胃腸炎。