信號轉導和轉錄激活因子3和長鏈非編碼RNA腫瘤易感候選基因11在子癇前期胎盤中的表達及與胎盤螺旋動脈重鑄的關系

付雪蓮，臧密密，苗艷，孫志敏，李格琳

作者單位：滄州市人民醫院產科，河北 滄州 061000

子癇前期（preeclampsia，PE）是女性妊娠期特有的一種疾病，多發生于妊娠中晚期，可表現為蛋白尿、高血壓，嚴重影響母嬰結局［1-2］。既往研究顯示，胎盤螺旋動脈重鑄不足是誘發PE 的主要因素［3］。因此，尋找與胎盤螺旋動脈重鑄有關的指標，對及時干預，改善病人生存結局尤其重要。研究發現，在胎盤發育進程中，長鏈非編碼RNA（long non-coding RNA，lncRNA）對螺旋動脈重鑄、滋養層細胞分化、血管形成起重要調控作用［4-5］。lncRNA 腫瘤易感候選基因11（lncRNA cancer susceptibility candidate 11，lncRNA CASC11）屬于lncRNA 的一員，其可調控上皮間質轉化、細胞侵襲、遷移，與動脈粥樣硬化、癌癥進程相關［6-7］；信號轉導及轉錄活化因子3（signal transducer and activator of transcription 3，STAT3）是一種轉錄因子，其可通過影響滋養層細胞增殖分化進而參與PE 發生發展［8］；且Han 等［9］研究發現，STAT3 可激活lncRNA CASC11 進而影響肝細胞癌發展過程。但STAT3、lncRNA CASC11與PE 病人胎盤螺旋動脈重鑄的關系尚不明確。基于此，本研究通過測定STAT3 mRNA、lncRNA CASC11 在PE中的水平，分析二者與胎盤螺旋動脈重鑄的關系。

1 資料與方法

1.1 一般資料選取2019 年1 月至2022 年4 月于滄州市人民醫院行剖宮產分娩的PE 病人68 例為PE 組，孕婦年齡范圍為21～35 歲，分娩孕周范圍為36～41 周。并納入同期該院行剖宮產分娩的健康孕婦68 例為健康組，孕婦年齡范圍為21～35 歲，分娩孕周范圍為36～41周；孕婦因胎位異常、狹窄骨盆行剖宮產手術，自然受孕、單胎，妊娠順利，無蛋白尿，血壓＜140/90 mmHg，無糖尿病、心臟病或其他妊娠相關疾病。另收集健康組、PE 組孕婦分娩前1 d 舒張壓、收縮壓、孕前身體質量指數等資料。本研究經滄州市人民醫院倫理委員會批準（批號k2020-075）。PE 病人診斷標準：（1）符合《婦產科學》（第8版）［10］中PE 的判定標準；（2）自然受孕且單胎妊娠；（3）臨床資料完整，自愿參與本研究。排除標準：（1）有糖尿病、高血壓、心臟病病史者；（2）有腎臟病、甲狀腺功能亢進等病史者；（3）合并其他妊娠疾病者；（4）合并膽囊炎、凝血功能異常、嚴重肝損傷、腫瘤者；（5）有先天性遺傳性疾病者；（6）有胎盤早剝、胎兒畸形等其他產科并發癥者。

1.2 方法

1.2.1 樣本收集所有胎盤娩出15 min 內，于胎盤母體面中央位置剪取5 塊胎盤組織（1 cm×1 cm×1 cm 大小，避開鈣化、出血區域），生理鹽水漂洗3 次，其中一塊胎盤組織立即置于液氮罐中保存1 夜，轉移至-80 ℃冰箱；另外4 塊胎盤組織利用戊二醛脫水，-4 ℃冰箱中保存。

1.2.2 胎盤螺旋動脈管壁厚度、管腔面積檢測從-4 ℃冰箱取出同一胎盤的4塊組織（0.5 cm×0.5 cm×0.2 cm），梯度脫水，染色，利用掃描電子顯微鏡（青島浩正科儀智能技術有限公司，EmCrafts）隨機掃描螺旋動脈，每塊組織各取10條，檢測其管壁厚度、管腔面積。

1.2.3 實時熒光定量逆轉錄聚合酶鏈反應（qRT-PCR）檢測胎盤組織中STAT3 mRNA、lncRNA CASC11 表達水平將-80 ℃冰箱中的胎盤組織取出，利用TRIzol Reagent（Invitrogen 公司，15596-026）提取胎盤組織總RNA；使用RevertAid First Strand cDNA Synthesis Kit（OMEGA 公司，TQ2501-01）制備互補DNA（cDNA）；最終，采用SYBR Green Realtime PCR Master Mix（北京華越洋生物科技有限公司，CAL412）及qRT-PCR 儀（IT-IS 公司，MyGo Pro）擴增cDNA、確定循環閾值（Ct）。擴增參數：98.8 ℃預變性7 min；97.2 ℃變性30 s，70.5 ℃退火15 s，64.5 ℃延伸15 s，循環40 次。甘油醛-3-磷酸脫氫酶（GAPDH）作為STAT3、lncRNA CASC11 的內參基因（其引物序列見表1）。利用2-ΔΔCt法計算STAT3、lncRNA CASC11相對表達量。

表1 qRT-PCR檢測胎盤組織中STAT3、lncRNA CASC11、GAPDH引物序列

1.3 統計學方法SPSS 22.0 軟件分析數據。計量數據經Kolmogorov-Smimov 檢驗，均符合正態分布，行兩獨立樣本t檢驗，以描述；采用Pearson 相關性分析檢驗兩變量間的相關性。P＜0.05 為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 健康組與PE 組一般資料比較與健康組相比，PE 組病人舒張壓、收縮壓升高（P＜0.05），年齡、分娩孕周、身體質量指數差異無統計學意義（P＞0.05）。詳見表2。

表2 健康組與子癇前期（PE）組一般資料比較/

表2 健康組與子癇前期（PE）組一般資料比較/

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2.2 健康組與PE 組胎盤組織STAT3 mRNA、lncRNA CASC11 表達水平比較與健康組相比，PE組病人胎盤組織中STAT3 mRNA（0.40±0.14 比1.04±0.35）、lncRNA CASC11（0.46±0.15 比1.01±0.34）表達水平降低（t=14.00、12.21，均P＜0.001）。

2.3 PE 病人胎盤組織中STAT3 mRNA 表達水平與lncRNA CASC11 的相關性Pearson 法分析顯示，PE 病人胎盤組織中STAT3 mRNA 表達水平與lncRNA CASC11呈正相關（r=0.57，P＜0.05）。

2.4 健康組與PE 組胎盤螺旋動脈管壁厚度、管腔面積比較與健康組相比，PE組病人胎盤螺旋動脈管壁厚度增加［（119.04±8.03）μm 比（101.78±6.95）μm，t=13.40，P＜0.001］，管腔面積減小［（140.62±17.59）μm比（193.30±24.16）μm，t=14.54，P＜0.001］。

2.5 PE 病人胎盤組織中STAT3 mRNA、lncRNA CASC11 表達水平與胎盤螺旋動脈管壁厚度、管腔面積的相關性Pearson 法分析顯示，PE 病人胎盤組織STAT3 mRNA、lncRNA CASC11 表達水平與胎盤螺旋動脈管壁厚度呈負相關（P＜0.05），與管腔面積呈正相關（P＜0.05）。詳見表3。

表3 PE病人胎盤組織STAT3 mRNA、lncRNA CASC11表達水平與胎盤螺旋動脈管壁厚度、管腔面積的相關性

3 討論

PE 是一種發生于妊娠中后期的多器官功能障礙性疾病，是造成孕產婦、胎兒死亡的重要因素［11-12］。研究表明，滋養細胞增殖、侵襲能力降低、滋養細胞過度凋亡，可造成胎盤螺旋動脈重鑄不足，導致胎盤再灌注損傷及母胎循環障礙，引發PE［3，8］。因此，探究與PE發病、胎盤螺旋動脈重鑄不足的相關因素，對臨床防治PE，改善母嬰結局有積極意義。

STAT3 被細胞外信號激活后進到細胞核內，其可通過與靶基因結合，進而調節血管內皮細胞增殖，參與細胞有絲分裂、侵襲，影響胚胎發育及血管生成，與高血壓、PE 等病理發展有關［13-14］。研究發現，STAT3 在PE 中呈低表達，其可能通過影響氧化應激損傷，抑制滋養細胞遷移、侵襲，促進滋養細胞凋亡進而影響PE 發生發展［15-16］；另外，張曉麗、趙曉勇［17］通過比較PE 產婦與正常產婦胎盤組織STAT3 mRNA 水平，發現與正常產婦相比，PE 產婦胎盤組織STAT3 mRNA 水平較低，STAT3可能是治療PE 的潛在靶點。qRT-PCR 具有用樣少、靈敏度高、可重復檢測的優點，能用于各種組織基因水平檢測。本研究利用qRT-PCR 法測定胎盤組織中STAT3 mRNA 的表達水平，結果顯示，PE 病人胎盤組織中STAT3 mRNA表達水平降低，與張曉麗、趙曉勇［17］研究結果相似，提示STAT3 mRNA 表達水平較低可能與PE發生發展相關，推測STAT3可能通過與靶基因結合，進而影響滋養細胞凋亡、侵襲及胎盤血管新生，從而在PE 中發揮抑制作用。lncRNA 是一類可穩定存在于胎盤組織中的非編碼RNA 分子，其可通過影響滋養細胞遷移、侵襲，進而在PE 中起調控作用，lncRNA 具有診斷PE、評估PE 妊娠結局的潛在價值［5，18］。研究發現，lncRNA LINC00922 在PE 中呈高表達，其可通過影響胎盤滋養層細胞增殖、侵襲能力，進而在PE 中發揮促進作用，lncRNA LINC00922 可能是PE 的診治靶點［19］；另外，lncRNA T 細胞白血病/淋巴瘤6 在PE 中表達上調，其可輔助評估PE 病人妊娠結局［20］。以上研究證實，PE 發生發展可能與lncRNA 表達失調密切相關。lncRNA CASC11 是lncRNA 的一員，位于8q24.21 染色體區域，目前，關于其研究多涉及前列腺癌［21］、神經母細胞瘤［22］等多種癌癥，其與PE 的關系尚不可知。另外，Han等［9］研究發現，STAT3作為一種轉錄因子，其可通過影響lncRNA CASC11 表達，從而影響肝細胞癌病理變化。故本研究探究了lncRNA CASC11 在PE 中的表達情況，結果顯示，PE 病人胎盤組織中lncRNA CASC11 表達水平較低，提示lncRNA CASC11 可能參與PE 發病過程，分析可能原因，lncRNA CASC11 作為lncRNA 的一員，其可能通過影響滋養細胞增殖、遷移、侵襲，進而促進PE 發生發展。

此外，本研究通過Pearson 相關性分析發現，PE病人胎盤組織中STAT3 mRNA 表達水平與lncRNA CASC11呈正相關，提示STAT3 mRNA可能與lncRNA CASC11共同影響PE病理過程。胎盤螺旋動脈重鑄不足，可使螺旋動脈管壁較厚、管腔狹窄。本研究中，PE病人胎盤螺旋動脈管壁較厚，管腔面積較小，且PE 病人胎盤組織STAT3 mRNA、lncRNA CASC11表達水平與胎盤螺旋動脈管壁厚度呈負相關，與管腔面積呈正相關，提示PE病人存在胎盤螺旋動脈重鑄不足現象，且STAT3 mRNA、lncRNA CASC11 與PE 病人胎盤螺旋動脈重鑄顯著相關，推測低表達STAT3 mRNA、lncRNA CASC11 可能通過影響滋養細胞氧化損傷，促進滋養細胞凋亡，抑制滋養細胞侵襲，進而影響胎盤螺旋動脈重鑄，影響PE 病變過程。

綜上所述，PE 病人胎盤組織中STAT3 mRNA、lncRNA CASC11 均表達下調，二者均與胎盤螺旋動脈重鑄密切相關，STAT3 mRNA、lncRNA CASC11 可能為臨床診治PE提供新靶標。但由于時間限制，缺少PE 病人的隨訪資料，后期將分析STAT3 mRNA、lncRNA CASC11表達水平與PE妊娠結局的關系。