術前趨化因子水平與宮頸癌患者術后復發轉移的關系

馬 丹 王莉莉 彭 蘋

宮頸癌是發生在子宮頸部位的惡性腫瘤,也是女性生殖道最常見的惡性腫瘤,具有較高的發病率,且發病逐漸呈現年輕化趨勢[1]。宮頸癌患者早期并無明顯的癥狀,隨著腫瘤細胞的擴散和浸潤,當患者出現明顯癥狀時癌癥已進展至中期甚至晚期,治療難度較大[2]。對于早期宮頸癌,子宮切除術一直是治療的標準方法,但即使是經過手術,術后也存在一定的復發風險從而影響患者的生存質量[3]。阮鵬等[4]研究發現,部分趨化因子及其受體不僅參與機體免疫反應,與腫瘤的生長、侵襲和轉移也有著密切的關系。腫瘤細胞可以分泌趨化因子,通過趨化因子受體與間質細胞共同作用完成侵襲過程,轉移至淋巴系統。為探討趨化因子與宮頸癌根治術后復發轉移的關系,本研究對擬行根治性子宮切除術+盆腔淋巴結清掃術的宮頸癌患者進行前瞻性研究,術前檢測趨化因子,分析它與宮頸癌術后復發轉移的關系,評估術前趨化因子表達預測術后復發轉移的價值,具體報告如下。

1 材料與方法

1.1 一般資料

采用前瞻性研究,選擇2019年1月至2021年12月醫院行根治性子宮切除+盆腔淋巴結清掃術的宮頸癌患者作為研究對象。納入標準:(1)符合《婦產科學(第9版)》[5]中子宮頸癌的診斷標準;(2)參照《實用腫瘤內科治療(第2版)》[6]中子宮頸癌的臨床分期標準,納入分期為ⅠB期和ⅡA期;(3)經影像學及病理學檢查確診;(4)病理類型為鱗狀細胞癌或者腺癌;(5)初發癌癥患者;(6)年齡>30歲;(7)符合手術指征,擬行根治性子宮切除術+盆腔淋巴結清掃術;(8)接受術后隨訪;(9)術前未接受過相關腫瘤治療;(10)手術均由同一組醫師團隊完成;(11)患者及家屬簽署研究知情同意書。排除標準:(1)有生育需求需保留子宮;(2)妊娠期或哺乳期;(3)合并其他惡性腫瘤;(4)合并免疫功能缺陷性疾病;(5)凝血功能異常;(6)合并其他宮頸疾病或婦科疾病;(7)病理結果中含有高危因素需補充單獨放療或同步放化療;(8)體質虛弱或伴有心肺、肝、腎等臟器疾病者。脫落標準:(1)出院后失訪或不按時復查;(2)因個人原因退出研究。

依據上述標準共納入102例宮頸癌患者進行研究,年齡37～58歲,平均年齡為(48.56±3.46)歲;臨床分期:ⅠB期56例,ⅡA期46例;病理類型:鱗癌64例,腺癌38例。

1.2 方法

1.2.1 趨化因子檢測 所有患者于術前1 d、術后1 d時進行指標檢測。①采集患者子宮頸部組織標本,用4%福爾馬林液進行固定,使用石蠟包埋后進行連續切片處理,采用S-P免疫組化二步法,DAB顯色、脫水、透明和封片,然后借助顯微鏡觀察趨化因子受體4(CXC chemokine receptor-4,CXCR4)和趨化因子受體7(CC chemokine receptor-7,CCR7)的表達。評分規則參照免疫組化染色陽性腫瘤細胞比例和染色強度,在染色陽性腫瘤細胞比例中:0分代表無陽性細胞、1分代表<10%、2分代表10%～50%、3分代表≥50%;在染色強度中,0分代表無著色、1分代表輕度著色、2分代表中度著色、3分代表重度著色。計算兩者總分,<3分表示為低表達,≥3分為高表達。②采集患者清晨空腹靜脈血5 ml,設置離心機離心率為3000 r/min,離心溫度為4 ℃,離心半徑為10 cm,持續離心時間為15 min,抽取上層血清。采用酶聯免疫吸附法測定血清CXCL13和CXCL16,試劑盒選自上海酶聯生物科技有限公司。

表1 宮頸癌患者術前及術后趨化因子水平比較

1.2.2 術后復發轉移判定 患者術后每3個月復查1次,隨訪內容包括:婦科檢查、陰道脫落細胞學檢查、胸部X線攝片、血常規以及子宮頸鱗狀細胞癌抗原、超聲、CT或磁共振等,以術后1年為隨訪觀察期限,統計宮頸癌患者術后1年內復發與轉移的情況。將術后1年內出現復發和轉移的患者納入發生組,其余患者納入未發生組。

1.3 觀察指標

①宮頸癌患者術后復發轉移情況;②不同復發轉移情況患者術前及術后趨化因子水平;③術前趨化因子水平與宮頸癌患者術后復發轉移的相關性;④術前趨化因子水平對宮頸癌患者術后復發轉移的預測價值。

1.4 統計學方法

2 結果

2.1 術后復發轉移情況

隨訪1年,宮頸癌患者術后出現復發轉移25例,占24.51%,納入發生組;其余患者納入未發生組。

2.2 趨化因子水平

術前及術后,發生組CXCR4與CCR7高表達占比高于未發生組,CXCL13與CXCL16水平高于未發生組,差異有統計學意義(P<0.05),見表1。

2.3 趨化因子與術后復發轉移的相關性

經卡方檢驗Phi系數分析,CXCR4和CCR7與宮頸癌患者術后復發轉移呈正相關關系(Phi>0,P<0.05);經點二列相關性分析,CXCL13和CXCL16與宮頸癌患者術后復發轉移呈正相關關系(γ>0,P<0.05),見表2。

表2 趨化因子與術后復發轉移的相關性

2.4 趨化因子對術后復發轉移的預測價值

將趨化因子作為檢驗變量,將宮頸癌患者術后復發轉移情況作為狀態變量(1=發生,0=未發生),繪制ROC曲線(圖1),結果顯示,術前CXCR4、CCR7、CXCL13、CXCL16預測宮頸癌患者術后復發轉移的AUC>0.7,聯合預測的AUC>0.8,聯合預測價值更高,見表3。

圖1 趨化因子預測術后復發轉移的ROC曲線

表3 趨化因子對術后復發轉移的預測價值

3 討論

根治性子宮切除術聯合盆腔淋巴結清掃術是宮頸癌基本術式之一,但由于宮頸癌復發率極高,即使經過根治性手術也存在復發幾率[7]。劉志超等[8]臨床報道,186例宮頸癌患者術后39例發生復發轉移,發生率為20.97%。本研究經前瞻性觀察發現,102例宮頸癌患者術后25例發生復發轉移,發生率為24.51%,證實了宮頸癌患者術后復發轉移具有較高發生風險。

本研究結果顯示,術前及術后,發生組CXCR4與CCR7高表達占比高于未發生組,且經過卡方檢驗Phi系數分析顯示,CXCR4和CCR7與宮頸癌患者術后復發轉移呈正相關關系,說明術前CXCR4與CCR7呈高表達,宮頸癌患者術后復發轉移的風險越大。CXCR4是趨化因子基質細胞衍生因子-1的特異受體,在機體大部分組織和器官上均有表達,具有七次穿膜結構,參與體內多種生理機制包括腫瘤遷移[9]。CXCR4在機體內具有促進淋巴結系統和造血系統成熟的功能和作用,而腫瘤細胞需要有新生血管提供養分以完成轉移[10]。因此宮頸癌細胞在轉移時需要CXCR4促進腫瘤新生血管的形成來為轉移提供養分,CXCR4高表達可為術后宮頸癌復發轉移提供基礎,增加術后復發轉移的發生風險。CCR7是CC類趨化因子受體的一種,與惡性淋巴結的特異性轉移密切相關,可與宮頸癌周圍組織的趨化因子結合導致患者體內發生局部鈣離子內流,進而使細胞形態發生改變促使宮頸癌細胞的侵襲能力增強,從而增加術后發生轉移和局部浸潤的風險。

本研究結果還顯示,術前及術后,發生組CXCL13與CXCL16水平高于未發生組,且經過相關性分析顯示,CXCL13和CXCL16與宮頸癌患者術后復發轉移呈正相關關系,說明術前CXCL13與CXCL16水平高,宮頸癌患者術后復發轉移的風險越大,這一研究結論與莊珩之等[11]研究結果一致。CXCL13與CXCL16均是由腫瘤細胞、巨噬細胞等分泌產生的趨化因子,可以通過結合腫瘤細胞表面相應受體趨化因子配體來發揮腫瘤細胞增殖以及轉移的調控功能。CXCL13通過結合CD8+T細胞表面的趨化因子受體發揮抑制腫瘤殺傷功能的作用,CXCL16通過結合腫瘤殺傷T細胞表明的趨化因子受體發揮抑制殺傷細胞效應功能的作用。當腫瘤細胞分泌產生CXCL13時會招募具有免疫抑制功能的濾泡性輔助T細胞進入腫瘤微環境從而通過抑制微環境中腫瘤殺傷T細胞的功能來發揮免疫抑制作用,增加腫瘤復發的風險。而腫瘤細胞還會分泌CXCL16,CXCL16可以通過自分泌途徑結合腫瘤表面的其他受體進而激活下游磷脂酰肌醇3激酶/AKT通路,以此達到促進惡性腫瘤增殖和轉移的目的。由此,當患者術前CXCL13與CXCL16水平較高時,宮頸癌細胞增殖和轉移的可能性較高,術后出現復發和轉移的風險也就越大。

此外,通過繪制ROC曲線發現,術前CXCR4、CCR7、CXCL13、CXCL16預測宮頸癌患者術后復發轉移的AUC均>0.7,聯合預測的AUC>0.8,說明上述指標單獨預測宮頸癌患者術后復發轉移具有一定的價值,且聯合預測價值更高。因為趨化因子也參與到機體免疫與炎癥反應過程因而會造成一定范圍內的波動致使檢測結果存在誤差,影響研究結果的準確性。所以,臨床可以綜合趨化因子水平進行聯合預測來提高預測的準確性以充分評估宮頸癌患者術后復發轉移的情況,對術后復發轉移風險較高的患者采取針對性的干預措施從而改善患者預后,提高生存率。

但值得注意的是,本研究也存在一定的局限性,首先是研究數據均來自同一家醫院,仍需要更多不用區域的病例資料驗證來完善本研究結果的準確性。同時,臨床通常以5年內宮頸癌患者的復發和轉移情況作為判斷患者預后情況,而本研究中只隨訪至術后1年考慮短期預后,對于遠期出現復發轉移的患者并未做過多隨訪和研究,因此后續還需要延長隨訪時間以便進一步分析術前趨化因子水平與宮頸癌患者術后復發轉移的關系。

綜上所述,宮頸癌患者術前CXCR4與CCR7呈高表達、CXCL13與CXCL16水平高,術后復發轉移的風險越大,臨床可以將趨化因子作為宮頸癌患者術后復發轉移的預測指標。