口腔黏膜微核細(xì)胞計(jì)數(shù)及血清、唾液中CYFRA21-1水平與口腔上皮癌變進(jìn)程的相關(guān)性研究

武寶峰 李 宏 孫吏聰

口腔鱗狀細(xì)胞癌是發(fā)生于口腔黏膜上皮的惡性腫瘤,早期口腔鱗癌多表現(xiàn)為潰瘍?cè)錾?后期逐漸增大變成菜花樣腫物或者火山口樣腫物,形成浸潤(rùn)塊,后期可以轉(zhuǎn)移,常見有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和肺轉(zhuǎn)移[1]。早期口腔鱗癌經(jīng)過及時(shí)治療,治愈率較高,如果出現(xiàn)進(jìn)展至后期發(fā)生轉(zhuǎn)移,則只能通過放化療輔助治療提高生存質(zhì)量,治愈率極低[2]。有研究認(rèn)為口腔黏膜微核細(xì)胞計(jì)數(shù)能夠反應(yīng)口腔上皮癌變時(shí)的染色體損傷情況,而CYFRA21-1則是廣泛應(yīng)用于各類癌癥診斷的標(biāo)志物[3-4]。本研究目的為探清兩者與口腔上皮癌變進(jìn)程的關(guān)系,為早期口腔鱗癌較前病變的診斷提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 一般資料

對(duì)2019年5月至2021年5月期間我院收治的口腔疾病患者102例進(jìn)行回歸性分析,包括舌白斑57例(白斑組),口腔鱗狀細(xì)胞癌45例(鱗癌組),另選同期檢查口腔黏膜正常人員44例(正常組),鱗狀細(xì)胞癌根據(jù)TNM分期分為早期(Ⅰ、Ⅱ期)組19例和中晚期(Ⅲ、Ⅳ期)組25例。納入標(biāo)準(zhǔn):①入組患者經(jīng)檢查均符合舌白斑或口腔鱗狀細(xì)胞癌的相關(guān)診斷標(biāo)準(zhǔn)[5-6];②年齡25～72歲;③無其他惡性腫瘤患者;④此前無放化療治療史。排除標(biāo)準(zhǔn):①白色角化病、扁平苔蘚患者;②孕婦患者。正常組人員均為無吸煙史及放化療史,未服用過免疫抑制劑,經(jīng)體檢無口腔類及其他疾病的完全健康者。白斑組患者男性34例,女性23例,年齡26～72(46.17±7.22)歲;鱗癌組男性29例,女性16例,年齡25～72(46.09±8.03)歲;正常組男性26例,女性18例,年齡27～71(47.16±7.37)歲,三組一般資料對(duì)比無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

1.2 方法

1.2.1 口腔黏膜微核細(xì)胞計(jì)數(shù) 使用消毒漱口液對(duì)患者口腔進(jìn)行清理后取刮片刮取各組人員口腔上皮黏膜并固定、染色、制片待檢測(cè)。 在400倍顯微鏡(型號(hào):BD-SW50,廠家: 廣東博視達(dá)光學(xué)儀器有限公司)下觀察涂片并計(jì)數(shù),單個(gè)涂片計(jì)數(shù) 500 個(gè)細(xì)胞,記錄帶有微核的細(xì)胞數(shù),并換算出微核細(xì)胞百分比數(shù)(%)。

1.2.2 血清、唾液CYFRA21-1檢測(cè) 采集所有入組人員體檢或住院時(shí)空腹上臂靜脈血3 ml,置于無菌抗凝管內(nèi),靜置10分鐘,3000轉(zhuǎn)/分鐘進(jìn)行30分鐘離心操作,收集血清標(biāo)本冷凍保存;入組人員于清晨使用消毒漱口液清理口腔后,收集唾液樣本3 ml于試管低溫環(huán)境下保存待檢測(cè);采用用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)對(duì)血清及唾液中的CYFRA21-1水平進(jìn)行檢測(cè),試劑盒購(gòu)自上海科艾博生物科技有限公司,操作步驟參照試劑盒說明書進(jìn)行。

1.3 觀察指標(biāo)

①三組人員的口腔黏膜微核細(xì)胞計(jì)數(shù)及血清、唾液CYFRA21-1對(duì)比;②鱗癌分組中兩組患者的口腔黏膜微核細(xì)胞計(jì)數(shù)及血清、唾液CYFRA21-1對(duì)比;③鱗癌患者病理特征的單因素分析;④鱗癌患者病理特征的多因素分析;⑤口腔黏膜微核細(xì)胞計(jì)數(shù)及血清、唾液CYFRA21-1對(duì)早期鱗癌和癌前病變的診斷價(jià)值。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 三組人員的口腔黏膜微核細(xì)胞計(jì)數(shù)及血清、唾液CYFRA21-1對(duì)比

三組的口腔黏膜微核細(xì)胞計(jì)數(shù)及血清、唾液CYFRA21-1表達(dá)水平為:鱗癌組>白斑組>正常組,三組對(duì)比差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);組間兩兩對(duì)比差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),見表1。

表1 三組人員的口腔黏膜微核細(xì)胞計(jì)數(shù)及血清、唾液CYFRA21-1對(duì)比

2.2 鱗癌分組中兩組患者的口腔黏膜微核細(xì)胞計(jì)數(shù)及血清、唾液CYFRA21-1對(duì)比

鱗癌患者中晚期組的口腔黏膜微核細(xì)胞計(jì)數(shù)及血清、唾液CYFRA21-1表達(dá)水平均高于早期組,兩組對(duì)比差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),見表2。

表2 鱗癌分組口腔黏膜微核細(xì)胞計(jì)數(shù)及血清、唾液CYFRA21-1對(duì)比

2.3 鱗癌患者病理特征的單因素分析及多因素分析

根據(jù)單因素及多因素分析顯示,分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況、口腔黏膜微核細(xì)胞計(jì)數(shù)、血清CYFRA21-1、唾液CYFRA21-1均為口腔鱗狀細(xì)胞癌的癌癥進(jìn)程獨(dú)立危險(xiǎn)因素(P<0.05)。見表3、表4。

表3 單因素分析

表4 鱗癌患者病理特征的多因素分析

2.4 口腔黏膜微核細(xì)胞計(jì)數(shù)及血清、唾液CYFRA21-1對(duì)早期鱗癌和癌前病變的診斷價(jià)值

口腔黏膜微核細(xì)胞計(jì)數(shù)、血清CYFRA21-1、唾液CYFRA21-1單項(xiàng)檢測(cè)的敏感度分別為84.0%、72.0%、64.0%,特異度分別為78.9%、68.4%、73.7%;聯(lián)合檢測(cè)的敏感度和特異度分別為88.0%、84.2%,聯(lián)合檢測(cè)的敏感度和特異度最高,對(duì)早期鱗癌和癌前病變的診斷效能最好,見表5、圖1。

圖1 ROC曲線圖

表5 口腔黏膜微核細(xì)胞計(jì)數(shù)及血清、唾液CYFRA21-1對(duì)早期鱗癌和癌前病變的診斷價(jià)值

3 討論

據(jù)有關(guān)數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì),國(guó)內(nèi)口腔癌患者數(shù)目占頭頸部腫瘤的5%～20%,是僅次于鼻咽癌的頭頸部第二大惡性腫瘤[7-8]。多數(shù)口腔癌患者由白斑、紅斑、扁平苔蘚等口腔黏膜癌前病變的長(zhǎng)期進(jìn)展所致,探索能夠幫助預(yù)測(cè)診斷早期口腔癌和癌前病變的方法對(duì)于提高預(yù)后情況有著重要意義[9]。微核細(xì)胞是真核類生物細(xì)胞中的一種異常結(jié)構(gòu),是由染色體斷裂的小片段形成,正在分裂的細(xì)胞中出現(xiàn)微核,是染色體結(jié)構(gòu)變異的結(jié)果[10]。口腔癌及癌前病變患者的口腔黏膜細(xì)胞在癌變過程中的分裂和增值會(huì)受到破壞并且損傷到染色體,造成微核細(xì)胞數(shù)量的增加,因此微核細(xì)胞計(jì)數(shù)與口腔黏膜細(xì)胞的癌變可能存在一定聯(lián)系,可以作為其診斷預(yù)測(cè)的研究方向[11]。CYFRA21-1則是常作為上皮細(xì)胞源性的腫瘤標(biāo)志物,在正常人的血清中較低,當(dāng)CYFRA21-1的表達(dá)出現(xiàn)異常升高則提示可能出現(xiàn)惡性腫瘤病變的情況,尤其在肺鱗癌中的陽性率較高,因此,也是肺部鱗狀細(xì)胞癌首選腫瘤標(biāo)志物[12]。其它還有宮頸癌、乳腺癌、膀胱癌也可能會(huì)出現(xiàn)CYFRA21-1偏高情況,而一些少數(shù)良性疾病也會(huì)出現(xiàn)指標(biāo)輕度升高變化,如呼吸道炎癥、消化道潰瘍等,但是并不能明確證明是惡性病變,通常需要結(jié)合其它指標(biāo)給予判斷[13]。

本研究對(duì)口腔癌、癌前病變患者、正常人員的口腔黏膜微核細(xì)胞計(jì)數(shù)以及血清、唾液中CYFRA21-1的含量進(jìn)行對(duì)比,結(jié)果顯示口腔癌患者的微核細(xì)胞計(jì)數(shù)以及血清、唾液中CYFRA21-1都要顯著高于癌前病變患者以及正常人員體內(nèi)的表達(dá),同時(shí)不同分期的鱗癌患者的對(duì)比結(jié)果也顯示中后期患者的微核細(xì)胞計(jì)數(shù)以及血清、唾液CYFRA21-1顯著高于早期患者,提示微核細(xì)胞計(jì)數(shù)以及血清、唾液CYFRA21-1均與口腔黏膜的癌變進(jìn)程密切相關(guān)。國(guó)內(nèi)對(duì)于微核細(xì)胞與口腔癌的研究鮮有報(bào)道,2000年周睿等[14]對(duì)口腔黏膜癌前病變脫落的微核細(xì)胞計(jì)數(shù)進(jìn)行了研究,結(jié)果顯示患有白斑等口腔癌前病變疾病患者的微核細(xì)胞計(jì)數(shù)顯著高于正常人,與本次研究結(jié)果相一致。細(xì)胞角蛋白是組成細(xì)胞的重要成分,癌癥患者體內(nèi)的腫瘤細(xì)胞內(nèi)蛋白酶會(huì)將細(xì)胞角蛋白分解為CYFRA21-1并進(jìn)入血液循環(huán)系統(tǒng)[15]。本次研究發(fā)現(xiàn)不論是口腔疾病患者還是正常人,唾液中的CYFRA21-1都要遠(yuǎn)高于其血液中的含量而唾液CYFRA21-1的檢測(cè)效能卻低于血清CYFRA21-1檢測(cè),推測(cè)可能是因?yàn)闃颖緮?shù)據(jù)較少的緣故。根據(jù)單因素及多因素統(tǒng)計(jì)分析得,分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況、口腔黏膜微核細(xì)胞計(jì)數(shù)、血清CYFRA21-1、唾液CYFRA21-1均為口腔鱗狀細(xì)胞癌癌癥進(jìn)程的獨(dú)立危險(xiǎn)因素,聯(lián)合檢測(cè)對(duì)早期鱗癌和癌前病變的敏感度和特異度高于口腔黏膜微核細(xì)胞計(jì)數(shù)、血清CYFRA21-1、唾液CYFRA21-1單項(xiàng)檢測(cè),提示三項(xiàng)聯(lián)合檢測(cè)的預(yù)測(cè)效能更高。

綜上,口腔黏膜微核細(xì)胞計(jì)數(shù)及血清、唾液CYFRA21-1與鱗癌等口腔疾病的進(jìn)程存在密切聯(lián)系,可以幫助預(yù)測(cè)診斷早期口腔鱗癌及癌前病變。