精子DNA碎片率與年齡、精液參數(shù)和生活習慣相關(guān)性分析

劉哲琪 孫潔*

單一的精液常規(guī)分析難以對男性精子質(zhì)量進行全面分析和評估。近些年男性生殖門診中就診人數(shù)日漸增長，不育的原因也越來越復雜。目前，受到生活方式、飲食習慣，環(huán)境及壓力等因素，導致發(fā)病率越來越高［1］。在特發(fā)性不育患者中有近20%的人群患有高水平的精子DNA 損傷，這成為了一個導致男性不育的重要因素［2］。傳統(tǒng)的精液常規(guī)檢查，已經(jīng)不能夠全面的反映精子功能的指標。在精子DNA 損傷程度方面，許多研究發(fā)現(xiàn)增加的DNA 碎片率（DFI）會對受孕率產(chǎn)生不利影響，精子中的DNA 損傷會影響后代的健康和幸福［3］。精子DFI 作為臨床上反映精子遺傳物質(zhì)完整性的重要指標，影響男性的生育功能［4］。近年來研究發(fā)現(xiàn)精子DFI 這項指標可以更好的評價男性生殖功能［5］。此外，男性精液質(zhì)量還會隨著年齡的增長而下降，這會導致精子DFI 損傷，其具體表現(xiàn)通常是精子量的減少、精子畸形概率和程度增加以及精子活力減弱等。精子DNA 是重要的遺傳信息載體，而精子染色質(zhì)結(jié)構(gòu)的完整性是精卵正常受精以及胚胎發(fā)育的關(guān)鍵保證［6-7］。本資料旨在分析男性精子DFI 與年齡、精液參數(shù)和生活習慣相關(guān)性。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2020 年6 月至2022 年6 月于本院就診的405 例男性作為觀察組，觀察組年齡22～55 歲，平均（32.23±4.94）歲，婚后性生活正常，未采取任何避孕措施，未孕＞1 年。納入標準：世界衛(wèi)生組織制定的《人類精液檢查與處理實驗室手冊》中的相關(guān)標準；本次研究已充分告知患者，并取得其同意與配合。

1.2 研究方法 （1）精液標本采集：患者在禁欲2～7 d后，通過手淫法采集其全部精液于干燥、潔凈、無菌的廣口采精杯中，立即送往實驗室，接受并放入37 ℃的恒溫水浴箱中。（2）精液分析：記錄精液液化時間，待精液完全液化后，觀察并記錄精液量、pH 值、粘稠度及顏色。再將精液標本進行充分混勻，使用移液器吸取4 μL 精液于精子檢測板上，采用SAS 賽司計算機輔助精子分析（CASA）系統(tǒng)檢測標本，其中對每份標本進行≥200 個的精子隨機采樣。

1.3 統(tǒng)計學方法 采用stata15 統(tǒng)計學軟件。首先進行指標的描述性統(tǒng)計分析，其次對各指標進行相關(guān)性分析，最后采用Logistic 回歸分析方法研究抽煙、蒸桑拿對精子DFI 的影響。

2 結(jié)果

2.1 各個指標的水平 見表1。

表1 各個指標的統(tǒng)計分析

2.2 各指標相關(guān)性分析 相關(guān)系數(shù)表反映了兩個變量間的相關(guān)關(guān)系。從表2 可見，年齡與多個變量相關(guān)，主要體現(xiàn)在年齡與精子DFI 正相關(guān)、與精子正常形態(tài)率負相關(guān)、與雌二醇負相關(guān)。年齡與精子的質(zhì)量指標相關(guān)性強。精子DFI 與精子正常形態(tài)、PR 負相關(guān)（碎片率越高，正常形態(tài)率越低、前向運動精子也越低）。精子正常形態(tài)與PR 正相關(guān)，與精子濃度正相關(guān)。雌二醇的含量與Zn 含量負相關(guān)。

表2 各指標相關(guān)性分析

2.3 生活習慣相關(guān)性分析 從表3 可見，在0.05 顯著性水平下不抽煙、不喝酒與精子DFI 相關(guān)，即不抽煙、不喝酒的群體碎片率相對較高，不抽煙、不喝酒與正常形態(tài)率、PR 前向精子正相關(guān)，即不抽煙、不喝酒的群體正常精子形態(tài)率相對較高，PR 運動精子率也較高。蒸桑拿與精子DFI 也具有相關(guān)關(guān)系，蒸桑拿的群體DFI 更高。此外，考慮到本研究中可能存在的其他可變因素，本研究仍需進一步的大樣本量對實驗結(jié)果進行驗證。

表3 生活習慣相關(guān)性分析

2.4 回歸模型變量設(shè)置 以精子碎片率為因變量進行基礎(chǔ)回歸，模型變量設(shè)置情況如表4 所示。

表4 回歸模型變量設(shè)置

2.5 回歸分析結(jié)果 模型一用精子DFI 進行基礎(chǔ)回歸發(fā)現(xiàn)，抽煙、蒸桑拿都會增加精子DFI 的程度，并且抽煙對精子DFI 的影響最大，同時年齡也是影響精子DFI 的最大因素，隨著年齡的上升，精子DFI 下降。模型二進一步將不抽煙、每日抽煙數(shù)量劃分為不抽煙、每日＜10、10～20、＞20 的連續(xù)變量，喝酒劃分為不喝酒、偶爾喝酒、經(jīng)常喝酒的連續(xù)變量，發(fā)現(xiàn)與模型一的結(jié)果一致，吸煙、蒸桑拿都會導致精子DFI 的提升。模型三中，剔除不抽煙群體，加入是否超過10 年煙齡這一變量進行分析，發(fā)現(xiàn)每日的抽煙數(shù)量依然會影響精子DFI，同時煙齡超過10 年的群體精子DFI 也更高。

見表5。

表5 回歸分析結(jié)果

3 討論

不育癥作為一項男性生育疾病，嚴重影響社會生育質(zhì)量。近年來流行病學領(lǐng)域?qū)υ摬“Y進行大量且深入的調(diào)查研究，發(fā)現(xiàn)男性精液質(zhì)量在近些年呈現(xiàn)出較為明顯的下降情況，而這一現(xiàn)象和當前適育人群的社會生活方式以及整體生態(tài)環(huán)境污染及惡化存在緊密的聯(lián)系。傳統(tǒng)的精液常規(guī)檢查，已經(jīng)不能夠全面的反映精子功能的指標。為減少不育問題給家庭及社會帶來的負面影響，需針對不育癥男性患者的精液進行全面且透徹的分析，以更直觀了解其生育功能，采用精子DFI 檢測來判斷精子功能好壞已經(jīng)受到越來越廣泛的關(guān)注。本文研究證實精子DFI 和男性年齡、生殖激素水平、生活習慣與精子DFI 有相關(guān)性。生活習慣或許是造成男性生育力下降的機制之一，但是考慮到當前實驗在選擇研究對象時可能存在未有效鑒別和剔除其他可變因素的情況，本研究尚需進行大樣本量驗證。作者期望通過本研究分析精液常規(guī)檢查指標和形態(tài)學與精子DNA 完整性的相關(guān)性以及活力、研究者年齡等因素對精子DNA 完整性的影響，指導臨床中醫(yī)藥的治療。