基于N和G蛋白的HeV抗體間接ELISA檢測方法的建立

朱盈名,王迎平,馮旭東,朱桓奕,楊曉偉,陳 翔,王 艷,趙光偉*

(1.西南大學動物醫(yī)學院,重慶 402460;2.上海海關,上海 200135;3.上海海關動植物與食品檢驗檢疫技術中心,上海 200135)

亨德拉病毒(Hendra virus,HeV)是副黏病毒科亨尼帕病毒屬的一種烈性人獸共患病病原,其培養(yǎng)需在生物安全等級為4級的實驗室中進行[1]。該病毒1994年在澳大利亞患有嚴重發(fā)熱性呼吸道疾病的馬場中被報道,發(fā)病馬表現(xiàn)發(fā)熱、精神沉郁、進食減少、心動過速、呼吸困難、面部水腫和共濟失調(diào)等癥狀,約75%的病例48～72 h內(nèi)死亡[2]。此后20年在澳大利亞沿海地區(qū)共有58起HeV感染事件,呈散發(fā)態(tài)勢[3]。目前我國尚未有HeV感染的報道,然而由于國際貿(mào)易、馬術比賽以及賽馬產(chǎn)業(yè)的蓬勃發(fā)展,馬匹出入境頻繁,存在境外輸入的風險,因此HeV是我國海關、口岸、出入境等機構必檢的病原之一。

HeV為單股負鏈RNA病毒,編碼6種結構蛋白,其中G蛋白為HeV的囊膜糖蛋白,通過Ephrin B2/3受體結合宿主細胞附著蛋白感染細胞[4],是感染中重要的錨定蛋白,目前國外已有基于G蛋白的商品化馬疫苗投入臨床,但接種率偏低,如澳大利亞馬群接種率僅為11%～17%[5];N蛋白為HeV的核衣殼蛋白,為主要抗原表位區(qū)域,可刺激機體產(chǎn)生中和抗體,是開發(fā)診斷試劑的優(yōu)選靶點,目前已有利用該蛋白做早期診斷研究的報道[6]。針對該病毒的檢驗檢疫國際通用的方法是采用RT-PCR或RT-qPCR技術檢測病毒核酸,我國口岸部門亦是如此,然而這種方法對動物的某些隱性感染以及疫苗接種史等均不能做出有效判斷,基于此,本試驗構建HeV重組N、G蛋白,建立間接ELISA(iELISA)診斷方法,為海關、出入境等技術部門作為HeV臨床血清學診斷提供技術儲備。……