弩藥液的刺激及過(guò)敏試驗(yàn)研究

鄧萬(wàn)娟 梁瀟 劉嬌 蔡敏芳 胡濤 羅萍 阮婧華 錢海兵

摘要：目的? 評(píng)價(jià)弩藥液的皮膚刺激性及皮膚過(guò)敏性，為弩藥液的應(yīng)用提供安全依據(jù)。方法? 皮膚刺激性試驗(yàn)：家兔4只，雌雄各半。采用自身對(duì)照，左側(cè)為對(duì)照部位（溫水），右側(cè)為給藥部位（弩藥液），連續(xù)給藥14 d，觀察涂抹藥局部有無(wú)紅斑、水腫等反應(yīng)，進(jìn)行皮膚刺激反應(yīng)及刺激強(qiáng)度評(píng)分，并取給藥部位皮膚進(jìn)行組織病理學(xué)檢查。皮膚過(guò)敏性試驗(yàn)：豚鼠30只，雌雄各半，分為對(duì)照組（溫水）、2-4二硝基氯苯陽(yáng)性組（致敏1.0% 0.2 ml/只、激發(fā)0.1% 0.2 ml/只）和給藥組（弩藥液適量），于第1、7、14天在豚鼠左側(cè)致敏，末次致敏結(jié)束后第14 d，右側(cè)進(jìn)行激發(fā)接觸，并于激發(fā)后1、24、48和72 h觀察過(guò)敏反應(yīng)情況，計(jì)算各組豚鼠反應(yīng)平均值和致敏率。結(jié)果? 弩藥液皮膚刺激試驗(yàn)中，皮膚反應(yīng)積分均值為0，皮膚刺激強(qiáng)度為無(wú)刺激性，病理檢查均未見(jiàn)組織病理學(xué)改變；在豚鼠皮膚過(guò)敏性試驗(yàn)中，弩藥液組及對(duì)照組豚鼠激發(fā)接觸72 h內(nèi)觀察，皮膚無(wú)紅斑及水腫現(xiàn)象出現(xiàn)，其反應(yīng)級(jí)別平均值為0，致敏率為0。結(jié)論? 在家兔皮膚刺激性試驗(yàn)和豚鼠皮膚過(guò)敏性試驗(yàn)中，弩藥液對(duì)家兔皮膚無(wú)刺激性，對(duì)豚鼠皮膚無(wú)過(guò)敏性。

關(guān)鍵詞：弩藥液；皮膚刺激性；皮膚過(guò)敏性

中圖分類號(hào)：R859.79? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? DOI：10.3969/j.issn.1006-1959.2024.04.016

文章編號(hào)：1006-1959（2024）04-0090-05

Experimental Study on Irritation and Allergy of Crossbow Medicine

DENG Wan-juan1，2，3，LIANG Xiao1，2，3，LIU Jiao1，2，3，CAI Min-fang1，2，3，HU Tao1，2，3，LUO Ping1，2，3，RUAN Jing-hua4，QIAN Hai-bing1，2，3

（1.Basic Medical College of Guizhou University of Traditional Chinese Medicine，Guiyang 550025，Guizhou，China;

2.Guizhou University of Traditional Chinese Medicine Guizhou Province Authentic Medicine Sexual Utility

Consistency Research Center，Guiyang 550025，Guizhou，China;

3.Guizhou Provincial Key Laboratory of Research on Properties and Effects of Traditional Chinese Medicine ， guiyang of guizhou 550025;

4.The First Affiliated Hospital of Guizhou University of Traditional Chinese Medicine，Guiyang 550001，Guizhou，China）

Abstract：Objective? To evaluate the skin irritation and skin allergy of crossbow medicine， and to provide a safety basis for the application of crossbow medicine.Methods? Skin irritation test： four rabbits， half male and half female. Using self-control， the left side was the control site （ warm water ）， and the right side was the administration site （crossbow medicine）. After 14 days of continuous administration， the local erythema and edema were observed， and the skin irritation reaction and stimulation intensity were scored. The skin of the administration site was taken for histopathological examination. Skin allergy test： thirty guinea pigs， half male and half female， were divided into control group （warm water）， 2-4-dinitrochlorobenzene positive group （sensitization 1.0% 0.2 ml/guinea pig， challenge 0.1% 0.2 ml/guinea pig） and administration group （appropriate amount of crossbow liquid）. Guinea pigs were sensitized on the left side on the 1st， 7th and 14th day， and challenged on the right side on the 14th day after the last sensitization. Allergic reactions were observed at 1 h， 24 h， 48 h and 72 h after challenge， and the average reaction and sensitization rate of guinea pigs in each group were calculated.Results? In the skin irritation test of crossbow medicine， the mean value of skin reaction score was 0， the intensity of skin irritation was non-irritation， and no histopathological changes were found in pathological examination. In the skin allergy test of guinea pigs， no erythema and edema were observed in the skin of guinea pigs in the crossbow medicine group and the control group within 72 h， and the average reaction level was 0， and the sensitization rate was 0.Conclusion? In the rabbit skin irritation test and guinea pig skin allergy test， the crossbow medicine has no irritation to rabbit skin and no allergy to guinea pig skin.

Key words：Crossbow medicine;Skin irritation;Skin allergy

苗藥弩藥液是由大血藤、飛龍掌血、透骨香、白屈菜、黑骨藤組成，具有活血化瘀，祛風(fēng)止痛的功能。常用于骨關(guān)節(jié)炎、類風(fēng)濕等引起的關(guān)節(jié)疼痛[1，2]，亦可用于癌性疼痛輔助治療。苗藥弩藥液在苗族地區(qū)廣泛使用，并在貴州中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院已進(jìn)行臨床應(yīng)用，具有一定療效。本研究按照國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理總局的《藥物刺激性、過(guò)敏性和溶血性研究技術(shù)指導(dǎo)原則》要求進(jìn)行了刺激性及全身主動(dòng)過(guò)敏反應(yīng)（ASA）試驗(yàn)，旨在為臨床應(yīng)用提供安全性實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。

1材料與方法

1.1儀器? 組織切片機(jī)（浙江省金華市科迪儀器設(shè)備有限公司，型號(hào)：RM2265）；電子天平（常熟市雙杰測(cè)試儀器廠，型號(hào)：JJ224B）；倒置顯微鏡（奧林巴斯公司，型號(hào)：BX53F）。

1.2藥品與主要試劑? 弩藥液（由貴州中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院制劑中心提供，批號(hào)：20211201）；2-4二硝基氯苯[西亞化學(xué)科技（山東）有限公司，批號(hào)：20220504]。

1.3實(shí)驗(yàn)動(dòng)物? 普通級(jí)新西蘭兔4只，體重1.5～2 kg，雌雄各半；豚鼠30只，體重300～400 g，雌雄各半；購(gòu)于重慶騰鑫生物技術(shù)有限公司，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物許可證號(hào)：SCXK（渝）2017-0010。實(shí)驗(yàn)性喂養(yǎng)7 d后開(kāi)始試驗(yàn)。

1.4方法

1.4.1皮膚刺激性試驗(yàn)[3-5]? 選用健康、成年、皮膚無(wú)破損的普通級(jí)新西蘭兔4只，雌雄各半，適應(yīng)性喂養(yǎng)7 d。試驗(yàn)前24 h將動(dòng)物背部脊背兩側(cè)去毛，不損傷表皮，面積約為3 cm×3 cm。蘸取弩藥液涂抹于左側(cè)去毛皮膚上，用塑料薄膜外包，再用無(wú)刺激性膠布、紗布固定，維持4 h后用溫水清洗，右側(cè)作為空白對(duì)照部位，涂抹溫水，1次/d，連續(xù)外敷14 d，并于1 h后觀察涂抹藥局部有無(wú)紅斑、水腫等反應(yīng)情況，按表1、表2進(jìn)行皮膚刺激反應(yīng)及刺激強(qiáng)度評(píng)分，皮膚刺激反應(yīng)平均值=（紅斑形成總分+水腫形成總分）/合計(jì)動(dòng)物數(shù)。第14天維持4 h溫水清洗觀察反應(yīng)情況后，空氣栓塞法處死家兔，剪去給藥部位皮膚及皮下組織，進(jìn)行固定、脫水、透明及浸蠟，常規(guī)石蠟包埋切片，HE染色后觀察其組織病理變化。

1.4.2皮膚過(guò)敏性試驗(yàn)[6-8]? 選用豚鼠30只，適應(yīng)性喂養(yǎng)7 d后，采用完全隨機(jī)設(shè)計(jì)分為3組，對(duì)照組（溫水）、陽(yáng)性組（2-4二硝基氯苯，致敏1.0% 0.2 ml/只、激發(fā)0.1% 0.2 ml/只）和給藥組（弩藥液適量），每組10只，雌雄各半。試驗(yàn)前24 h動(dòng)物背部脊背兩側(cè)去毛，不損傷表皮，面積約為4 cm×4 cm。蘸取弩藥液、溫水、1.0% 2-4二硝基氯苯涂抹于左側(cè)去毛皮膚上，用塑料薄膜外包，再用無(wú)刺激性膠布、紗布固定，維持6 h后用溫水清洗。于第1、7、14天致敏3次，末次致敏結(jié)束后第14天，蘸取弩藥液、溫水、0.1% 2-4二硝基氯苯涂抹于右側(cè)去毛皮膚上，進(jìn)行激發(fā)接觸，維持6 h后用溫水清洗，并于第1、24、48和72 h觀察豚鼠皮膚紅斑、水腫等其他過(guò)敏反應(yīng)情況。按上述表1、表2計(jì)算皮膚過(guò)敏反應(yīng)平均值及致敏率。皮膚過(guò)敏反應(yīng)平均值=（紅斑形成總分+水腫形成總分）/合計(jì)動(dòng)物數(shù)，致敏率=皮膚過(guò)敏反應(yīng)陽(yáng)性（不論程度輕重）動(dòng)物數(shù)/受試動(dòng)物總數(shù)，致敏率：0～10%，無(wú)致敏性；11%～30%，輕度致敏性；31%～60%，中度致敏性；61%～80%，高度致敏性；81%～100%，極度致敏性。反應(yīng)平均值=（紅斑形成總分 + 水腫形成總分）/合計(jì)動(dòng)物數(shù)。

1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)方法? 利用Excel軟件計(jì)算皮膚刺激反應(yīng)平均值、皮膚過(guò)敏反應(yīng)平均值及致敏率。

2結(jié)果

2.1皮膚刺激性試驗(yàn)? 弩藥液完整性皮膚連續(xù)14 d局部給藥，4只家兔給藥側(cè)及對(duì)照側(cè)均未出現(xiàn)紅斑、水腫等反應(yīng)情況，且皮膚刺激分值均為0，見(jiàn)圖1。

2.2弩藥液刺激性試驗(yàn)皮膚組織病理情況? 組織病理學(xué)檢查顯示，家兔的給藥側(cè)和對(duì)照側(cè)皮膚結(jié)構(gòu)正常清晰，均未見(jiàn)棘層及角質(zhì)層萎縮變薄，無(wú)表皮壞死或炎性細(xì)胞浸潤(rùn)等病理改變，見(jiàn)圖2。

2.3皮膚過(guò)敏性試驗(yàn)? 弩藥液組及對(duì)照組（溫水）豚鼠激發(fā)接觸72 h內(nèi)觀察，皮膚無(wú)紅斑及水腫現(xiàn)象出現(xiàn)，其反應(yīng)級(jí)別平均值為0，致敏率為0；陽(yáng)性對(duì)照組紅斑、水腫現(xiàn)象明顯表現(xiàn)為不同級(jí)別的致敏反應(yīng)指征、致敏率100%，見(jiàn)圖3、表3。

3討論

苗醫(yī)藥理論認(rèn)為，人體的生靈能（相當(dāng)于中醫(yī)的正氣）不足時(shí)，毒邪就會(huì)內(nèi)侵，所以苗醫(yī)“毒學(xué)說(shuō)”認(rèn)為“百病由毒而生，毒為百病之源”“無(wú)毒不致病，無(wú)亂不成疾”[9]，并且把祛除毒素作為防治疾病的重要手段，總結(jié)形成了“治毒九法”，即攻毒法、表毒法、趕毒法等，以應(yīng)對(duì)毒邪[10]。弩藥液便是用“以毒攻毒”的方式去治療疾病[11]。弩藥液由黑骨藤、大血藤、透骨香、白屈菜、飛龍掌血組成的棕色液體，具有活血化瘀、祛風(fēng)止痛的功效[12]。苗藥弩藥源自古代苗人射殺動(dòng)物涂于弓箭上的劇毒藥物，后經(jīng)過(guò)減毒[13]，多次改進(jìn)，目前已經(jīng)成為一個(gè)質(zhì)量穩(wěn)定可控、療效確切的外用醫(yī)院制劑，常將弩藥液直接涂抹于患處或與傳統(tǒng)弩針聯(lián)合應(yīng)用以及用弩藥桑枝棒[14]。

透皮給藥是弩藥液的療效作用精髓，通過(guò)苗醫(yī)理論中的“汗窟”和“毛窟”，將弩藥送入患處皮肉經(jīng)脈之間，從外治內(nèi)，從而達(dá)到“攻毒”的作用[15]。弩藥液中黑骨藤（性熱）為領(lǐng)頭藥，具有舒筋活血、祛風(fēng)除濕的功效；大血藤（性冷）、透骨香（性熱）等鋪底藥，具有加強(qiáng)領(lǐng)頭藥?kù)铒L(fēng)除濕的作用和活血止痛的功效，再加以米酒，引諸藥入血脈，兼以行氣止痛，散瘀止痛[16]。其中弩藥液的各味藥，包括黑骨藤[17]、大血藤[18，19]、透骨香[20]、白屈菜[21]、飛龍掌血[22]等現(xiàn)代藥理研究均已證實(shí)具有抗炎和鎮(zhèn)痛等藥理作用，所以弩藥液具有顯著的抗炎鎮(zhèn)痛作用。弩藥液在臨床上廣泛用于治療項(xiàng)痹、腰痹等疼痛類和風(fēng)類疾病[23]，且目前弩藥液利用噴霧器進(jìn)行外用，方便高效。

由于弩藥液中的黑骨藤、白屈菜、飛龍掌血等藥物具有毒性，所以弩藥液對(duì)皮膚的刺激性和過(guò)敏性仍是臨床中需重視的問(wèn)題。本研究用家兔和豚鼠對(duì)弩藥液進(jìn)行皮膚刺激性和過(guò)敏性試驗(yàn)，可為弩藥液臨床安全用藥提供一定的參考。皮膚刺激性試驗(yàn)中，與對(duì)照側(cè)對(duì)比發(fā)現(xiàn)，弩藥液給藥側(cè)皮膚刺激反應(yīng)平均值為0，且弩藥液給藥側(cè)皮膚未出現(xiàn)紅斑、水腫等異常表現(xiàn)。并且與對(duì)照側(cè)相比，弩藥液給藥側(cè)皮膚的病理檢查也未見(jiàn)組織病理學(xué)改變，因此認(rèn)為弩藥液對(duì)家兔完整皮膚無(wú)刺激性反應(yīng)。

皮膚過(guò)敏性試驗(yàn)中，豚鼠主動(dòng)皮膚過(guò)敏性試驗(yàn)3次致敏后，陽(yáng)性組受試藥物區(qū)域均出現(xiàn)輕度至中度紅斑、水腫，隨后出現(xiàn)皸裂結(jié)痂；在激發(fā)之前均恢復(fù)正常，弩藥液給藥組和對(duì)照組均未見(jiàn)紅斑、水腫等異常表現(xiàn)。激發(fā)階段，陽(yáng)性組動(dòng)物激發(fā)后1 h即刻出現(xiàn)過(guò)敏反應(yīng)，出現(xiàn)輕度至中度紅斑、水腫，72 h后恢復(fù)，致敏率為100%，皮膚過(guò)敏反應(yīng)平均值在1.7～1.9，弩藥液給藥組和對(duì)照組動(dòng)物給藥部位均未出現(xiàn)紅斑、水腫等異常表現(xiàn)以及哮喘、站立不穩(wěn)、休克等嚴(yán)重全身過(guò)敏反應(yīng)，致敏率為0，皮膚過(guò)敏反應(yīng)平均值為0。因此認(rèn)為弩藥液對(duì)豚鼠完整皮膚無(wú)過(guò)敏性反應(yīng)。

整個(gè)皮膚試驗(yàn)過(guò)程中，未出現(xiàn)試驗(yàn)動(dòng)物死亡的情況。弩藥液皮膚刺激性試驗(yàn)以及皮膚過(guò)敏性試驗(yàn)研究均符合相關(guān)國(guó)家規(guī)范和要求。本實(shí)驗(yàn)研究證明了弩藥液對(duì)皮膚的安全性，驗(yàn)證了弩藥液是一種無(wú)刺激、無(wú)致敏、安全性高的外用制劑，為進(jìn)一步深入研究和臨床應(yīng)用提供參考。

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收稿日期：2023-02-28；修回日期：2023-04-07

編輯/肖婷婷