淺談牛布氏桿菌病的診斷及防控措施

孫 祎

北票市五間房動物衛(wèi)生監(jiān)督所，遼寧北票 122100

牛布氏桿菌病是由布氏桿菌引起的人畜共患傳染病，可分為急性型或慢性型，慢性型病例為多數(shù)。牛、羊感染本病的概率較大，其次是豬。人和其他家畜也可感染本病。主要特征是母牛表現(xiàn)為流產(chǎn)，公牛表現(xiàn)為睪丸炎。

1 病原

布氏桿菌可分為羊、牛、豬、沙林鼠、綿羊、犬布氏桿菌。在我國發(fā)現(xiàn)的主要為羊、牛、豬布氏桿菌，而沙林鼠、綿羊、犬布氏桿菌在我國沒有得到證實。在形態(tài)上它們幾乎是一樣的，都是細(xì)小呈短桿狀或球桿狀，革蘭氏染色為陰性，幾乎靜止不動，不產(chǎn)生芽孢。布氏桿菌不耐熱，對溫度非常敏感，當(dāng)溫度達(dá)到70℃時，加熱10min可將其殺死，在腐敗病料中的布氏桿菌陽光直接照射1d，很快失去活力。布氏桿菌對多數(shù)消毒藥敏感，一般的消毒藥都可將其殺死，用2%石炭酸、來蘇爾、燒堿溶液消毒，可在1h內(nèi)將其殺死[1]。布氏桿菌對鏈霉素、慶大霉素、卡那霉素敏感，對青霉素不敏感。

布氏桿菌的抗原結(jié)構(gòu)復(fù)雜，它可分兩種，即屬內(nèi)抗原與屬外抗原。屬內(nèi)抗原包括A、M、R等表面抗原，A抗原和M抗原存在于光滑型布氏桿菌中，R抗原存在于大多數(shù)非光滑型布氏桿菌中。可用凝集試驗鑒別到種和生物型。布氏桿菌胞漿內(nèi)的可溶性抗原是布氏桿菌屬特異抗原，成分非常復(fù)雜。布氏桿菌的屬外抗原可與大腸桿菌、巴氏桿菌、假單胞菌、沙門氏菌等屬的細(xì)菌發(fā)生交叉凝集反應(yīng)。進(jìn)行血清學(xué)診斷時，可用巰基化合物處理血清，能明顯地甚至是完全消除交叉反應(yīng)。

侵入動物機(jī)體的細(xì)菌雖然被巨噬細(xì)胞吞噬，但卻避免了消化道內(nèi)的消化，且能在巨噬細(xì)胞內(nèi)增殖。感染初期本菌可廣泛分布于機(jī)體全身各部位，后期僅局限于乳房及其周圍淋巴結(jié)。妊娠動物感染時，與其他臟器相比本菌更易在胎盤和胎兒體內(nèi)增殖。布氏桿菌能特異地在胎盤子葉的巨細(xì)胞中增殖，由于細(xì)菌的增殖，子葉巨細(xì)胞的功能被破壞，而成為流產(chǎn)的誘因之一。本菌經(jīng)過子葉巨細(xì)胞進(jìn)一步感染胎兒，胎兒對母體而言是一種異物，為了抑制免疫排斥反應(yīng)并維持妊娠，母本內(nèi)產(chǎn)生以Th2為主的白細(xì)胞介素。布氏桿菌屬細(xì)菌感染后，宿主產(chǎn)生針對性的免疫應(yīng)答并誘導(dǎo)Th1反應(yīng)以阻止其在細(xì)胞內(nèi)的增殖，從而抑制病情的惡化。妊娠動物被感染后，同樣也會誘導(dǎo)以Th1為主的反應(yīng)，這可能是破壞了Th1/Th2的平衡從而引發(fā)流產(chǎn)[2]。

2 流行病學(xué)

本病流行范圍廣，分布世界各國，但主要集中在印度阿拉伯灣地區(qū)、南美洲、地中海地區(qū)。2007年以來我國連續(xù)開展了布氏桿菌病定點調(diào)查，調(diào)查結(jié)果表明，我國牛羊布氏桿菌病發(fā)病率最高的地區(qū)是內(nèi)蒙古、黑龍江、河北，其次是遼寧、吉林、山東、河南、新疆，呈現(xiàn)“北方高、南方低”的特點。牛羊個體、群體陽性率均高于控制標(biāo)準(zhǔn)。存在多種型布氏桿菌并存和跨種間感染現(xiàn)象。本病的易感動物主要是羊、牛、豬，除此之外還可感染水牛、野牛、羚羊、鹿、駱駝、野豬、貓、狐、狼以及一些嚙齒動物。動物的易感性隨性成熟年齡接近而增高。性別對易感性無明顯差別，但母牛相對公牛感染的概率比較大。布氏桿菌病可通過口腔、黏膜、皮膚、配種、接生等途徑感染。本病不僅動物之間相互傳染，而且?guī)Ь膭游镆部蓚魅窘o人，主要傳播途徑皮膚劃破后接觸過帶菌動物或者是給母畜接產(chǎn)。母畜流產(chǎn)后的胎兒、黏液、分泌物、胎盤、乳汁和公畜的精液中都帶有細(xì)菌，成為了傳染源。如果是帶菌的動物污染了飼料和飲水，同圈或同群飼養(yǎng)的動物就會被感染。如果母畜帶菌，那么流產(chǎn)后排出的分泌物污染了圈舍也會傳染給同群的家畜。布氏桿菌可隨病牛乳汁排出傳染給乳牛，在夏季蚊蟲比較多的季節(jié)吸血昆蟲也可傳播本病。與帶菌家畜或流產(chǎn)病畜直接接觸比較多的獸醫(yī)或飼養(yǎng)人員，給帶菌奶牛擠奶人員都有感染過本病的病例。因此，對布氏桿菌病的防控應(yīng)采取有效措施，對人和動物的健康具有重要意義。

3 臨床癥狀

潛伏期因個體差異而不同，最短的20～30d,長的可達(dá)180d，但流產(chǎn)指的是大多數(shù)病例，多數(shù)母牛流產(chǎn)都是在妊娠后180～240d。母牛流產(chǎn)前表現(xiàn)為時起時坐、食欲不振、精神萎靡，陰唇光亮紅腫，有紅褐色分泌物從陰道中流出，流產(chǎn)產(chǎn)出的胎兒多數(shù)為死胎，也有的是木乃伊胎，流產(chǎn)后常常出現(xiàn)胎衣不下，有的出現(xiàn)子宮炎。多數(shù)母牛流產(chǎn)后通過治療可正常懷孕和分娩，但是也有少數(shù)母牛流產(chǎn)后終生不孕。奶牛患本病還會出現(xiàn)乳房炎，會使奶牛的產(chǎn)奶降低，嚴(yán)重的會失去泌乳能力。除此之外，有的病例出現(xiàn)關(guān)節(jié)炎，表現(xiàn)為關(guān)節(jié)腫脹，觸摸腫脹處有疼痛感，多數(shù)關(guān)節(jié)炎患病部位為腕關(guān)節(jié)和膝關(guān)節(jié)，嚴(yán)重者關(guān)節(jié)變形、疼痛，走路一瘸一拐[3]。公牛患病后主要的臨床癥狀是睪丸炎，雙側(cè)睪丸一大一小，有的出現(xiàn)附睪炎。有的病例是化膿性壞死睪丸炎，睪丸明顯腫大。發(fā)生睪丸炎，附睪炎的初期表現(xiàn)為腫痛，后期變?yōu)闊o熱痛。采集公牛精液進(jìn)行檢測，精子活力降低，嚴(yán)重的失去活力，甚至失去性欲。

4 病理變化

病牛流產(chǎn)后胎衣發(fā)生水腫，絨毛膜下組織呈膠凍樣浸潤，顏色為淡黃色。有些部位有出血點，表面有膿液和纖維素滲出物。部分絨毛葉表面覆有纖維素，顏色為灰色或黃綠色，同時上面還有脂肪狀滲出物或膿液絮片。流產(chǎn)的胎兒皮下水腫，打開胸腹腔可見淡黃色積液，關(guān)節(jié)腔內(nèi)也出現(xiàn)積液。胎兒的肝臟、腎臟、全身淋巴結(jié)都有不同程度的腫脹，腎臟看上去呈葡萄樣，顏色為紫色。在子宮的內(nèi)部，子宮絨毛之間有黃色無味的粘稠樣滲出物，絨毛膜表面有壞死灶，覆有黃色壞死物。切開胎兒的胃，胃內(nèi)有黃色絮狀物，有的是白色黏液絮狀物，牛的四個胃中最嚴(yán)重的是皺胃。胃腸黏膜和膀胱黏膜下出現(xiàn)點狀出血或線狀出血，胎兒的臍帶紅腫、肥厚呈漿液性浸潤。皮下呈出血性漿液性浸潤。公牛的精囊內(nèi)有出血點和壞死灶，睪丸和附睪有壞死和化膿性病變。

5 診斷要點

5.1 初步診斷

根據(jù)流行特點，母牛流產(chǎn)，公牛睪丸炎和附睪炎主要臨床特征，再結(jié)合剖檢癥狀進(jìn)行初步診斷。

5.2 細(xì)菌學(xué)診斷

可采取流產(chǎn)胎兒胃內(nèi)容物、病變面積大的肝臟、脾臟、母牛流產(chǎn)排出的胎衣，絨毛膜水腫嚴(yán)重的部分，制作涂片用美藍(lán)染色法染色：①制作涂片后，讓其自然干燥，最后用火焰進(jìn)行固定；②固定后在涂片上滴加2%沙黃水溶液將圖片全部覆蓋，用酒精燈進(jìn)行加熱，直到出現(xiàn)小氣泡為止；③用水洗后用堿性美藍(lán)溶液染色30～60s；④染色后用水洗、干燥后在油鏡下觀察，觀察的結(jié)果為紅色，可確定為布氏桿菌。根據(jù)實際需要，可對布氏桿菌采取進(jìn)一步分離。分離的方法主要為病料直接分離培養(yǎng)和感染動物進(jìn)行間接分離。一般選擇豚鼠作為感染動物，感染后進(jìn)行分離。分離布氏桿菌多數(shù)選擇用老式方法，相比直接分離培養(yǎng)法，分離出的陽性率要高一些。

5.3 血清學(xué)診斷

布氏桿菌病的血清學(xué)診斷，可采用凝集反應(yīng)、補(bǔ)體結(jié)合反應(yīng)等，以上方法的優(yōu)點是特異性和敏感性高。在應(yīng)用時要根據(jù)實際情況選擇合適的方法。動物感染布氏桿菌病7d左右，血液中就會出現(xiàn)凝集素，凝集滴度便不斷增高，一般可操持1～2年甚至更長。凝集滴度顯著增高的時期一般是在動物流產(chǎn)后的7～15d。對需要進(jìn)行檢疫的群體采血并分離血清，進(jìn)行血清凝集反應(yīng)。

5.3.1 虎紅平板凝集試驗

將分離后的血清裝管編號，把編號后的血清每個血清抽取0.03mL滴入到帶有編號的平板上，然后在每個受檢血清旁滴入0.03mL的抗原，全部滴加完后，使受檢血清和抗原充分混合，混合后3～4min受檢血清肉眼能夠觀察到發(fā)生凝集反應(yīng)者判為陽性（+），受檢血清不發(fā)生凝集反應(yīng)呈均勻粉紅色，判為陰性（-）。

5.3.2 試管凝集試驗

對受檢動物進(jìn)行采血分離血清。如果是送檢血清3d內(nèi)不能送達(dá)的，要在血清中加入5%的石碳酸生理鹽水以防變質(zhì)，按照血清和石炭酸生理鹽水9:1的比例添加。送檢的血清防止受熱和冷凍，要采用4～8℃冷藏的方式進(jìn)行運(yùn)輸。以牛為例對受檢血清進(jìn)行稀釋，每份血清要使用4支凝集試管，按照操作規(guī)則和程序處理完畢后放入37～40℃溫箱中24h，取出仔細(xì)觀察并將結(jié)果記錄好。

每一次試驗都設(shè)有陽性、陰性血清與抗原對照。參照對比管，按照試管上層液體清亮度進(jìn)行判定。分層明顯上層液體完全透明，下層完全凝集下沉，可判定為++++；上層液體透明度為75%，下層幾乎完全凝集，可判定為+++；上層液體透明度為50%，下層明顯凝集，可判定為++；上層液體透明度為25%，既有凝集物又有沉淀，可判定為+；整管液體混濁程度均勻無沉淀，有凝集物無沉淀，可判定為陰性。

5.3.3 補(bǔ)體結(jié)合反應(yīng)

由于本方法敏感特異性高，應(yīng)用的非常多，范圍也比較廣。特別是第一次感染的病牛，補(bǔ)體結(jié)合反應(yīng)比凝集反應(yīng)判斷出來結(jié)果的速度快。在有些發(fā)病速度比較慢的病牛中，使用血清凝集法判定結(jié)果為陰性或可疑時，則補(bǔ)體結(jié)合反應(yīng)可準(zhǔn)確判定為陽性。所以補(bǔ)體結(jié)合反應(yīng)對確診牛羊布氏桿菌病有著重要的意義。

6 防控措施

6.1 本病要以預(yù)防為主，提倡自繁自養(yǎng)

根據(jù)實際需要確實需要引進(jìn)時，不要從流行本病多的地域引進(jìn)。如果條件允許直接從引進(jìn)地直接采血進(jìn)行布氏桿菌病監(jiān)測，如果引進(jìn)的數(shù)量少可做全群檢測，數(shù)量多要抽取全群30%以上樣本進(jìn)行檢測。檢測結(jié)果為陰性確認(rèn)健康后運(yùn)回本地進(jìn)行隔離飼養(yǎng)一個月。有獨(dú)立的空舍或?qū)ｉT隔離場是最好的選擇，在隔離飼養(yǎng)期間進(jìn)行一次布氏桿菌病的監(jiān)測，在隔離飼養(yǎng)結(jié)束時再進(jìn)行一次監(jiān)測，確定健康檢測結(jié)果為陰性可混群飼養(yǎng)。

6.2 定期監(jiān)測和免疫接種

如果是舍飼比較健康的牛群，進(jìn)行定期監(jiān)測，檢出病牛根據(jù)實際情況淘汰或隔離。如果是牧區(qū)，放牧的牛數(shù)量比較多，沒有隔離飼養(yǎng)的條件，采用免疫接種不檢疫的方法。根據(jù)實際需要選擇合適的疫苗，目前接種比較多的有馬爾他布氏桿菌5號弱毒疫苗和豬布氏桿菌2號弱毒疫苗，這兩種疫苗免疫效果比較好。奶牛不能接種疫苗，只能監(jiān)測，發(fā)現(xiàn)病牛立即淘汰。

6.3 進(jìn)行科學(xué)地飼養(yǎng)管理

牛舍中的糞便及污染物要及時清理，保持牛舍的清潔，如果是封閉牛舍要及時通風(fēng)換氣，牛舍內(nèi)外要定期徹底消毒，為牛群的健康生長提供一個優(yōu)良的環(huán)境。

6.4 保證牛群的飼料飲水清潔

如果是夏季放牧，要到有優(yōu)質(zhì)青草的放牧地進(jìn)行放牧。沒有青草的季節(jié)，要選擇優(yōu)質(zhì)的干草，干草或草塊要存放在干燥通風(fēng)好的地方防止受潮、發(fā)霉變質(zhì)。在飼喂青草和干草的同時還要飼喂精飼料，全價料要選擇大廠家生產(chǎn)的，自己配比要保證原料的質(zhì)量。

6.5 發(fā)現(xiàn)病牛及時采取防控措施

如果在牛群中發(fā)現(xiàn)疑似病牛，要第一時間隔離飼養(yǎng)，并對疑似病牛進(jìn)行采血檢測。在檢測結(jié)果沒出來之前，牛場內(nèi)要實行嚴(yán)格管理，牛和飼養(yǎng)人員保證原地不同，所有的牛和人不出場，奶牛擠出的奶也不能出場。進(jìn)出場的車輛、飼養(yǎng)用具、工作人員等要進(jìn)行嚴(yán)格全面地消毒。從源頭上控制傳染源，防止疫病傳播。因為牛布氏桿菌屬于人畜共患疾病，一旦某個區(qū)域大面積發(fā)病，還要對人進(jìn)行監(jiān)測。

6.6 無害化處理

經(jīng)化驗室檢測將疑似病牛確定陽性，立即將病牛從牛群中分離出來，組織人力進(jìn)行撲殺。撲殺時要嚴(yán)格按照無害化處理操作規(guī)程進(jìn)行，撲殺后的病牛尸體的掩埋要選擇在人員和動物很少走動或不經(jīng)過的地方，遠(yuǎn)離村莊、水源地、主要公路在1km以上。掩埋尸體的坑要在3m以上，將生石灰鋪在坑底，病牛尸體鋪在生石灰的上方，將每個尸體充分澆上柴油后焚燒，焚燒后再用生石灰填埋，上方再用土填埋，填埋后尸體距地面要1m以上。

6.7 做好疫病凈化工作

制定布氏桿菌病疫情監(jiān)測和疫病凈化方案，定期對牛群進(jìn)行采血監(jiān)測，監(jiān)測次數(shù)根據(jù)實際情況來確定，一般每個月進(jìn)行監(jiān)測一次，監(jiān)測出的病牛從牛群中隔離出來立即撲殺，檢測出病牛所在牛群的圈舍要立即進(jìn)行全面徹底消毒。按照每個月一次的頻率進(jìn)行監(jiān)測，直到飼養(yǎng)場中沒有病牛為止。

7 結(jié)語

牛布氏桿菌病是養(yǎng)牛業(yè)中經(jīng)常發(fā)生的，一般根據(jù)臨床癥狀和病理變化可進(jìn)行初步診斷，采血送往化驗室進(jìn)行監(jiān)測做出最后診斷，確診后對癥下藥及時治療。平時做好預(yù)防工作，加強(qiáng)飼養(yǎng)管理，從源頭上切斷傳染源，控制本病的發(fā)生，從而減少因發(fā)病帶來的經(jīng)濟(jì)損失。