聯(lián)合應(yīng)用基因分型和DH3檢測406例女性子宮頸HPV感染分析與臨床意義

姜朋飛,沈思環(huán),印洪林

HPV屬于球形無包膜的雙鏈DNA病毒,能特異性引起人體皮膚黏膜的鱗狀上皮增殖,可導(dǎo)致多種良惡性病變。HPV高危型持續(xù)感染是導(dǎo)致子宮頸癌發(fā)生的主要原因,其檢測方法多種、多樣,各有優(yōu)缺點(diǎn)。本科室聯(lián)合應(yīng)用基因分型和第三代雜交捕獲技術(shù)定量分型(daltonbio hybrid capture 3, DH3),可以準(zhǔn)確檢測子宮頸中HPV型別和病毒載量的高低,對子宮頸癌的篩查進(jìn)行精準(zhǔn)分流,現(xiàn)作簡要介紹。

1 材料與方法

1.1 材料收集2021～2022年我院婦產(chǎn)科門診和健康管理中心406例女性子宮頸標(biāo)本,患者年齡18～76歲,中位年齡34歲。

1.2 方法本組406例患者均由我院醫(yī)師一次性采用2個(gè)子宮頸刷取其樣本,其中350例患者另采集子宮頸液基細(xì)胞學(xué)標(biāo)本,分別行HPV基因分型檢測和DH3檢測。HPV基因分型檢測由南京金域醫(yī)學(xué)中心完成(PCR-反向點(diǎn)雜交法,購自亞能生物公司),DH3檢測由本科室完成(雜交捕獲-化學(xué)發(fā)光法,購自德同生物公司)。DH3檢測結(jié)果與陽性質(zhì)控品的比值>1為陽性,數(shù)值越大表示病毒載量越高。同時(shí)分析液基細(xì)胞學(xué)(離心沉降法,購自BD公司)和子宮頸活檢組織病理檢查,均由本科室完成。

1.3 分流流程本組聯(lián)合應(yīng)用基因分型和DH3檢測,依據(jù)HPV檢測結(jié)果的具體型別和病毒載量高低,對子宮頸癌的篩查進(jìn)行分流,詳細(xì)流程見圖1。

圖1 聯(lián)合應(yīng)用基因分型和DH3檢測HPV對子宮頸癌篩查分流圖

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析采用Minitab軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05,采用雙比率檢驗(yàn),以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 符合率基因分型和DH3檢測結(jié)果完全符合者(包括HPV陰性者)302例(302/406,74.4%);部分符合者99例(99/406,24.4%),其中DH3檢測13例,基因分型檢測86例;完全符合與部分符合者合計(jì)401例(401/406,98.8%),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(Z=7.51,P<0.001)。完全不符合者5例(5/406,0.1%)。

2.2 檢出率本組共檢測HPV陽性276例(276/406,68.0%),其中基因分型檢測陽性273例(273/276,98.9%),DH3檢測陽性199例(199/276,72.1%),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(Z=8.95,P<0.001)。檢測出HPV 16型53例(53/406,13.0%),HPV 18型62例(62/406,15.3%),HPV 31型11例(11/406,2.7%),HPV 33型15例(15/406,3.7%),HPV 52型68例(68/406,16.7%),HPV 58型47例(47/406,11.6%),HPV 82型2例(2/406,0.5%),HPV 16和18型均陽性2例(2/406,0.5%),其它高危型(31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、66和68型)混合感染64例(64/406,15.8%)。

2.3 與液基細(xì)胞學(xué)、組織學(xué)活檢的一致性分析本組350例(350/406,86.2%)患者中液基細(xì)胞學(xué)有異常者37例(37/350,10.6%),高危型HPV陽性34例(34/37,91.9%)。液基細(xì)胞學(xué)檢查異常者經(jīng)組織活檢證實(shí)子宮頸上皮內(nèi)病變(cervical intraepithelial neoplasia, CIN)17例(17/37,46.0%),液基細(xì)胞學(xué)檢查陰性者經(jīng)組織活檢證實(shí)為CIN者31例(31/50,62.0%)。取組織活檢115例(115/406,28.3%),其中高危型HPV陽性94例(94/115,81.7%);活檢組織中CIN者50例(50/115,43.5%),高危型HPV陽性(平均病毒載量達(dá)268)46例(46/50,92.0%),CIN中3級者12例(12/50,24.0%,中位年齡35歲);活檢組織中可見挖空細(xì)胞者91例(91/115,79.1%),其中81例HPV陽性(81/91,89.0%)。

3 討論

臨床工作中對子宮頸癌的篩查方法較多,常用的有子宮頸刮片細(xì)胞學(xué)檢查、液基細(xì)胞學(xué)檢查、HPV檢測、陰道鏡檢查和組織活檢等。通常臨床醫(yī)師先采用子宮頸細(xì)胞學(xué)檢查和HPV檢測作為人群的聯(lián)合初篩,再根據(jù)分流情況行陰道鏡檢查或定期復(fù)查。近年,子宮頸刮片細(xì)胞學(xué)檢查逐漸被淘汰,主要是因?yàn)槭止げ僮鲗?dǎo)致的涂片厚薄不均、細(xì)胞重疊等,影響顯微鏡下觀察。液基細(xì)胞學(xué)檢查受限于臨床取樣技術(shù)、制片技術(shù)和病理細(xì)胞學(xué)診斷醫(yī)師水平等影響,存在假陰性和假陽性。因此,子宮頸細(xì)胞學(xué)檢查的診斷質(zhì)量也不盡相同。

2015年美國陰道鏡和子宮頸病理學(xué)會(the American Society for Colposcopy and Cervical Pathology, ASCCP)發(fā)布的《高危型人乳頭狀瘤病毒檢測用于宮頸癌初篩:過渡期臨床指南》指出,可選擇HPV檢測單獨(dú)用于子宮頸癌的一線初篩。HPV常用的檢測方法有基因分型和DH3檢測。基因分型檢測采用的是PCR-反向點(diǎn)雜交法,該方法是應(yīng)用PCR體外擴(kuò)增和DNA反向點(diǎn)雜交相結(jié)合的DNA芯片技術(shù),具有特異性和敏感性高的特點(diǎn),可檢測23種HPV基因型別。DH3檢測采用的是雜交捕獲-化學(xué)發(fā)光法,敏感性稍低,該方法不需要配備標(biāo)準(zhǔn)分子實(shí)驗(yàn)室,相關(guān)設(shè)備試劑簡單,結(jié)果重復(fù)性好,對取樣條件無特殊要求(不受標(biāo)本帶血影響),可在基層醫(yī)院推廣,其試劑盒配備有陰性質(zhì)控品和高危型質(zhì)控品,可以檢測14種高危型HPV,檢測比值陰性提示樣本中不含相關(guān)型別的HPV或含量低于檢測限,陽性則不能確定具體的HPV型別,檢測比值可反映樣本中HPV病毒載量的高低。相對于單一基因分型或DH3檢測,聯(lián)合檢測可更加精準(zhǔn)地判斷感染具體型別和病毒載量的高低[1],可按《人乳頭狀瘤病毒核酸檢測用于宮頸癌篩查中國專家共識(2022)》指導(dǎo)進(jìn)行分流:(1)HPV 16/18型陽性者無論病毒載量高低均行陰道鏡檢查;(2)其它非HPV 16/18高危型陽性且病毒載量高者也行陰道鏡檢查;(3)其它非HPV 16/18高危型陽性且病毒載量低者行細(xì)胞學(xué)檢查[2];(4)HPV低危型陽性者需進(jìn)行定期隨訪。

根據(jù)DH3和基因分型的試劑盒說明書發(fā)現(xiàn),DH3檢測限為1 pg/mL,其對于測量值/參考值的比值為0.8～2.0的樣本(接近參考值),存在陰陽性波動?；蚍中蜋z測限為1.0×104copies/mL,其檢測過程中成倍擴(kuò)增后的產(chǎn)物在開蓋雜交時(shí)易造成交叉污染導(dǎo)致假陽性。同時(shí)基因分型檢測包含17種高危型和6種低危型HPV,與DH3檢測相比,其包含的基因型別更多,檢出率也更高。聯(lián)合檢測的缺陷是一次性采集2個(gè)檢測樣本,由于采樣先后順序可導(dǎo)致2個(gè)樣本檢測物分布不均,2種檢測方法均屬于行業(yè)認(rèn)可穩(wěn)定、可靠的方法,分別為定量檢測和定性檢測,檢測結(jié)果會出現(xiàn)些許差異,但并不影響臨床醫(yī)師對檢測結(jié)果的綜合判斷,進(jìn)行合理分流。

目前,隨著醫(yī)學(xué)的不斷發(fā)展,對HPV的研究越來越深入,為減少一過性感染的過度檢出,我院采用聯(lián)合基因分型和DH3檢測的方法,可以精準(zhǔn)地對目標(biāo)人群進(jìn)行分流,避免過度治療,值得臨床推廣。通過自取樣方式的普及和HPV疫苗的接種,聯(lián)合其它檢測方法的應(yīng)用,如甲基化檢測、E6/E7檢測[3]、Ki67/p16雙染、人工智能檢測和大數(shù)據(jù)平臺等[4],能更早地發(fā)現(xiàn)患者異常,做到早預(yù)防、早發(fā)現(xiàn)和早治療,可較大程度減少子宮頸癌的發(fā)生。