腦蛋白水解物聯合長春西汀通過TLR4/MyD88/NF-κB信號通路治療重癥高血壓性腦出血的療效及機制

張春香 冀明明 孫敏玲 李建英

(張家口市第一醫院 1內科ICU,河北 張家口 075000;2急診ICU;3康復科)

高血壓性腦出血是高血壓最嚴重的并發癥之一,好發于50～70歲。臨床表現多為小動脈管壁發生玻璃樣或纖維樣變性和局灶性出血、缺血和壞死,嚴重時發生血腫擴大、腦水腫加重、顱內壓增高、出現呼吸障礙、脈搏減慢、中樞性衰竭〔1～3〕。研究表明,高血壓性腦出血臨床可采用標準化的降壓方案治療,如α-腎上腺素能拮抗劑,鈣通道阻滯劑,α和β受體阻滯劑和利尿劑等〔4,5〕,但是療效均有限,患者可能出現顯著后遺癥,新型聯合用藥是臨床治療高血壓性腦出血的重要研究方向。長春西汀注射液聯合腦蛋白水解物治療是腦保護的重要臨床治療藥物,研究證實可以在急性腦梗死及動脈硬化腦梗死中發揮重要作用,改善患者神經功能缺損評分與日常生活能力評分,但長春西汀注射液聯合腦蛋白水解物是否能夠對高血壓性腦出血患者發揮腦保護作用尚不清晰〔6,7〕。Toll樣受體(TLR)4/髓樣分化因子(MyD)88/核因子(NF)-κB信號通路在氧化應激、炎癥機制中發揮重要作用,已被證實該通路的激活可導致多種疾病進展〔8〕,如通過抑制TLR4/MyD88通路可以保護大腦免受缺血/再灌注損傷〔9〕,成纖維細胞生長因子(FGF)10可通過TLR4/MyD88/NF-κB通路減輕實驗性創傷性腦損傷〔10〕,但TLR4/MyD88/NF-κB是否在高血壓性腦出血中也受到調控尚不清楚。本研究探討腦蛋白水解物聯合長春西汀通過TLR4/MyD88/NF-κB信號通路治療重癥高血壓性腦出血的療效及機制。

1 材料與方法

1.1樣本來源 選取2019年3月至2022年3月張家口市第一醫院高血壓性腦出血患者102例,隨機分為對照組(復方丹參液治療)和實驗組(腦蛋白水解物聯合長春西汀治療)各51例,對照組男27例,女24例;年齡46～78〔平均(63.41±5.36)〕歲;病程2～24〔平均(7.43±1.15)〕h;腦出血部位:基底節區35例,腦葉11例,丘腦5例;腦出血量為14～57〔平均(36.68±4.49)〕ml。實驗組男26例,女25例;年齡45～76〔平均(62.32±6.39)〕歲;病程2～24〔平均(7.35±1.28)〕h;腦出血部位:基底節區34例,腦葉10例,丘腦7例;腦出血量為22～60〔平均(37.45±6.22)〕ml。兩組性別及年齡等一般資料差異無統計學意義(P>0.05)。納入標準:(1)年齡40～80歲;(2)基底節區及腦葉等幕上出血;(3)首次發病,病程小于24 h;(4)具有手術適應證。排除標準:(1)外傷性腦出血、腦腫瘤和腦血管畸形患者;(2)腦疝形成、瀕死期和重要臟器衰竭者;(3)凝血功能障礙患者;(4)具有全身感染性或免疫系統疾病者;(5)具有其他神經系統疾病者。參與者均簽署知情同意書并通過醫院倫理委員會審核。

1.2試劑和設備 超氧化物歧化酶(SOD)檢測試劑盒(19160)、谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)檢測試劑盒(G6137)、丙二醛(MDA)檢測試劑盒(MAK085)、人內皮素(ET)-1、酶聯免疫吸附試驗(ELISA)試劑盒(RAB1039)、人血管內皮生長因子(VEGF)-A ELISA試劑盒(RAB0507),神經生長因子(NGF)試劑盒(RAB0380)、人TLR-4 ELISA試劑盒(RAB1088)均購于美國Sigma公司;人MyD88 ELISA試劑盒(PRS2127)、人NF-κB-p65 ELISA試劑盒(JL19458-48T)均購于上海江萊生物有限公司;人MyD88 ELISA試劑盒(E-EL-H1967c)均購于武漢伊萊瑞特生物科技股份有限公司,GDSFJM全自動多功能酶標儀購于廣東三豐精密儀器有限公司。

1.3臨床相關指標 采用頭顱CT測定顱內血腫體積,側腦室置入顱內壓監護儀測定顱內壓。對照組治療方式:250 ml的10%葡糖糖液中含20 ml復方丹參液,1次/d,靜脈滴注,連續2 w。實驗組治療方式:長春西汀(長春海悅藥業有限公司,國藥準字H20040484,10 mg)、腦蛋白水解物藥液(麗珠集團麗珠制藥廠,國藥準字H10970191,2 ml),125 ml生理鹽水中含20 mg長春西汀和120 mg腦蛋白水解物藥液,1次/d,靜脈滴注,連續2 w。

1.4神經功能評價 兩組神經功評價方法:采用3種評價方式綜合評價神經功能,分別為美國國立衛生研究院腦卒中量表(NIHSS)、格拉斯哥昏迷量表(GCS)和Barthel指數評分聯合評分。NIHSS:意識、語言和運動等項目,評分范圍0～42分,評分高表示神經受損嚴重。GCS:睜眼、語言和肢體運動等項目,評分范圍0～15分,評分高表示意識障礙輕。Barthel指數:認知交流和日常生活能力,評分范圍0～100分,評分高表示日常生活能力強。

1.5ELISA檢測患者外周血指標 患者靜脈采血5 ml,4 ℃ 3 000 r/ min,離心10 min,收集上清液,分裝到EP管中,嚴格按照試劑盒說明,采用ELISA檢測血清中SOD、GSH-Px、MDA、ET-1、VEGF、NGF、TLR-4、MyD88、NF-κB水平,于吸光度450 nm下進行各樣本吸光度檢測,每個樣本3個復孔。

1.6統計學處理 采用SPSS23.0軟件進行χ2檢驗、t檢驗。

2 結 果

2.1兩組臨床指標比較 如表1所示,治療前,兩組顱內血腫體積、顱內壓均無顯著性差異(P>0.05)。治療后,兩組顱內血腫體積、顱內壓明顯低于治療前,且實驗組顱內血腫體積、顱內壓明顯低于對照組(P<0.05)。

表1 兩組治療前后臨床指標比較

2.2兩組治療前后神經功能評分比較 如表2所示,治療前,兩組神經功能評分無明顯差異(P>0.05)。治療后,兩組神經功能評分較治療前均有統計學差異,且實驗組NIHSS評分顯著低于對照組,GCS評分和Barthel指數評分顯著高于對照組(P<0.05)。

表2 兩組治療前后神經功能評分比較分)

2.3兩組治療前后血清氧化應激指標比較 如表3所示,治療前,兩組血清氧化應激指標無明顯差異(P>0.05)。治療后,兩組血清氧化應激指標較治療前均有統計學差異,且實驗組血清SOD和GSH-Px水平明顯高于對照組,血清MDA水平明顯低于對照組(P<0.05)。

表3 兩組治療前后血清氧化應激指標比較

2.4兩組治療前后血清內皮功能比較 如表4所示,治療前,兩組血清內皮功能指標ET-1、VEGF和NGF水平無明顯差異(P>0.05)。治療后,兩組以上指標較治療前均有統計學差異,且實驗組血清ET-1水平明顯低于對照組,血清VEGF和NGF水平明顯高于對照組(P<0.01)。

表4 兩組治療前后血清內皮功能比較

2.5兩組治療前后TLR4/MyD88/NF-κB信號分子水平 如表5所示,治療前,兩組血清TLR4、MyD88、NF-κB水平無明顯差異(P>0.05)。治療后,兩組以上指標較治療前均有統計學差異,且實驗組血清TLR4、MyD88、NF-κB水平明顯低于對照組(P<0.01)。

表5 兩組治療前后NF-κB信號通路分子水平比較

3 討 論

急性高血壓性腦出血多由于血壓劇烈升高導致血管破裂,病情與患者出血速度、出血部位及出血量相關,如患者得不到及時治療常導致不同區域腦損傷,如腦島、皮質、杏仁核、前額葉區或腦干等區域〔11～13〕。我國發病率為(12～15)萬例/年,發病30 d內死亡率達到35%～52%,僅有約20%患者在6個月后恢復正常自理生活能力,因此臨床研究積極尋找特效藥物及聯合用藥方案,了解聯合用藥的生物學意義及其在高血壓性腦出血中的作用對早期治療及患者預后腦組織保護具有重要意義〔14,15〕。腦蛋白水解物是大腦特有的肽能神經營養藥物,能以多種方式作用于中樞神經,調節和改善神經元代謝,促進突觸形成,誘導神經元分化,保護神經細胞免受各種缺血和神經毒素損害。長春西汀為夾竹桃科植物小長春花中提取物,臨床用來上改善腦梗死后遺癥、腦出血后遺癥、腦動脈硬化癥等誘發的各種癥狀,臨床上將腦蛋白水解物和長春西汀聯合使用,發現具有治療血管性癡呆和椎-基底動脈供血不足的作用〔16,17〕,但是其在重癥高血壓性腦出血中的作用研究較少。本研究結果提示,腦蛋白水解物聯合長春西汀能促進術后顱內血腫清除,降低顱內壓,加快神經功能恢復,腦蛋白水解物聯合長春西汀可以顯著降低患者氧化應激損傷,促進神經生長,從而發揮高血壓性腦出血患者的腦保護作用。

TLR4/MyD88/NF-κB信號通路是參與非特異性免疫的重要信號通路,是細胞內炎癥和氧化應激信號轉導的重要信號通路〔18〕。研究表明,TLR4和AT1R介導自發性高血壓大鼠血腦屏障破壞、神經炎癥和自主神經功能障礙〔19〕,也有研究證實,遠程缺血預處理和后遠程缺血預處理通過抑制老年大鼠TLR4/MyD88信號通路減輕缺血性腦損傷〔20〕,本研究結果提示,該通路機制可能與降低炎癥反應,減少腦組織炎性損傷有關,通過抑制TLR4/MyD88/NF-κB信號通路的信號轉導發揮腦保護作用。

綜上,腦蛋白水解聯合長春西汀治療后可以顯著發揮高血壓性腦出血患者的腦保護作用,其機制可能與提高組織抗氧化能力和降低炎性損傷有關,并且可能通過抑制TLR4/MyD88信號轉導發揮調控作用。