膠體金免疫層析速測卡與液質聯用法檢測豇豆中農藥殘留

李改弟　米高權　邊臘紅　左鳳

摘 要：膠體金免疫層析速測卡測定農藥殘留具有針對性強、操作簡便、能夠半定量等優點。本文通過膠體金免疫層析速測卡與液質聯用法檢測豇豆中的阿維菌素、噻蟲嗪、噻蟲胺、滅多威、克百威、啶蟲脒和氟蟲腈7種農藥并進行對比分析，對膠體金免疫層析速測卡準確性和靈敏度進行確證。結果表明，膠體金免疫層析速測卡檢測豇豆與液質聯用法定量檢測結果基本一致，準確性和靈敏度較好。

關鍵詞：膠體金免疫層析法；農藥殘留檢測；食品安全

Determination of Pesticide Residues in Cowpea by Colloidal Gold Immunochromatography and Liquid Chromatography-Mass Spectrometry

LI Gaidi， MI Gaoquan， BIAN Lahong， ZUO Feng*

（Liangshan Agricultural Product Quality and Safety Testing Center， Liangshan 615000， China）

Abstract： The colloidal gold immunochromatographic assay card for the determination of pesticide residues has the advantages of strong pertinence， simple operation and semi-quantitative capability， abamectin， thiamethoxam， clothianidin， methomyl， carbofuran， acetamiprid and fipronil in cowpea were detected by colloidal gold immunochromatography and liquid chromatography-mass spectrometry， the accuracy and sensitivity of gold immunochromatographic test paper were confirmed. The results showed that the colloidal gold immunochromatographic assay was consistent with liquid chromatography-mass spectrometry in quantitative detection of cowpea， and the accuracy and sensitivity were good.

Keywords： colloidal gold immunochromatography; pesticide residue detection; food safety

豇豆，豆科植物，又叫姜豆、帶豆、角豆等，是重要的“菜籃子”產品。在豇豆生產中，為防止病蟲害的發生，有一些種植戶存在不合理使用農藥、不注重休藥期等情況，造成豇豆出現農藥殘留超標現象。近年來，我國在豇豆品種、肥料配方與技術、農藥使用方法等方面對豇豆種植做了很多研究，但受環境及管理措施的影響，豇豆農藥殘留超標問題仍時有發生，增加了食品安全風險[1]。四川省是全國豇豆主產區之一，四川省農業農村廳近年來加大了對豇豆農藥殘留的監測力度，2023年省級例行監測和監督把豇豆列為主檢品種。

當前，檢測農藥殘留的主要儀器有氣相色譜儀、氣質聯用儀、液相色譜儀、液質聯用儀等進行檢測，但這些儀器價格比較昂貴、檢測時間較長，對檢測人員的技術要求也較高，無法滿足當下快速檢測的需求。因此，建立一套合適的農產品農藥殘留快速檢測方法很重要。目前，檢測新鮮果蔬中農藥殘留的快速檢測方法有兩種，分別為酶抑制法和速測卡法（紙片法），技術標準為GB/T 5009.199—2003，我國監管部門、農業技術推廣部門以及批發市場等快速檢測室使用的農殘速測儀，主要針對的農藥種類是氨基甲酸酯類以及有機磷類，無法檢測菊酯類農藥[2-3]。膠體金免疫分析法因其靈敏度高、成本低、操作簡單等優勢受到廣泛關注，本文采用膠體金免疫分析法和液質聯用法檢測豇豆中阿維菌素、噻蟲嗪、噻蟲胺、滅多威、克百威、啶蟲脒和氟蟲腈等7種農藥殘留，對結果進行比對分析，以驗證膠體金免疫分析法測定果蔬中農藥殘留的可行性。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

空白豇豆；根據7種農藥在豇豆中檢出限量值，添加克百威、啶蟲脒、氟蟲腈、阿維菌素、噻蟲嗪、噻蟲胺和滅多威等7種標準物質于空白豇豆中，添加濃度為0.015 mg·kg-1、0.250 mg·kg-1、0.500 mg·kg-1，分別為A、B、C。

阿維菌素、噻蟲嗪、噻蟲胺、滅多威、克百威、啶蟲脒和氟蟲腈農藥標準溶液，農業農村部環境保護科研監測所；乙腈、甲醇（色譜純），甲酸、氨水（優級純），美國天地；提取包（MgSO4 4 g、NaCl 1 g、檸檬酸鈉二水化合物1 g、檸檬酸二鈉鹽半水合物

0.5 g），艾杰爾；蒸餾水，屈臣氏；阿維菌素、噻蟲嗪、噻蟲胺、滅多威、克百威、啶蟲脒和氟蟲腈7種農藥膠體金免疫層析速測卡，美正生物、快捷康生物。

1.2 儀器與設備

YP602N分析天平，上海菁海；LPD2500多管渦旋混合器，萊普特；TD-5M離心機，四川蜀科；Waters-XEVO-TQ超高效液相色譜串聯三重四極桿質譜儀，美國沃特世。

1.3 標準溶液配制

標準溶液：7種標準溶液單品，濃度均為100 μg·mL-1。

混合標準溶液（10 μg·mL-1）：吸取各單品標準溶液0.500 mL于5.0 mL容量瓶中，用乙腈定容至刻度線，備用。

上機標準溶液（0.10 μg·mL-1）：用豇豆空白樣做基質，吸取10.00 μL混合標準溶液（10 μg·mL-1），用豇豆空白基質定容至1.00 mL。

1.4 檢測方法

1.4.1 膠體金免疫層析法

膠體金免疫層析法檢測過程中應用了競爭法免疫層析原理，在層析過程待測液中的待測物與金標抗體結合，抑制了金標抗體與競爭抗原的結合，從而影響T線顯色。通過比較檢測線T與對照線C顏色的深淺程度，可對樣品進行定性判定。

膠體金免疫層析速測卡結果判定如圖1所示。陰性：T線（檢測線）顯色比C線（對照線）深或者同樣深表示樣品中待檢測物質含量低于檢測限量值，或不含待檢測物質；陽性：T線顯色比C線顯色淺，或T線無顯色，表示樣品中待檢測物質含量高于檢測限量值，T線比C線越淺表示樣品中農藥殘留含量越高；無效：C線未顯色，說明操作者操作過程不當或者檢測卡已經失效。

根據不同生產廠家（美正生物、快捷康生物）膠體金檢出限值，按照操作說明書進行操作，并對結果進行記錄，含量在檢測限量值之內的結果顯示陰性，含量超出檢測限量值的結果顯示陽性。

1.4.2 液質聯用法

（1）樣品前處理。參照GB 23200.121—2021[4]對豇豆中阿維菌素、噻蟲嗪、噻蟲胺、滅多威、克百威、啶蟲脒和氟蟲腈等7種農藥殘留進行定量分析。準確稱取10.00 g（精確至0.01 g）不同濃度試樣于50 mL離心管中，加入10.00 mL乙腈及1顆陶瓷質均子，劇烈振蕩1 min，加入提取包（MgSO4 4 g、NaCl 1 g、檸檬酸鈉二水化合物1 g、檸檬酸二鈉鹽半水合物0.5 g），劇烈振蕩1 min后4 200 r·min-1離心5 min。吸取6.00 mL上清液至凈化管中（PSA 150 mg、MgSO4?900 mg），渦旋混勻1 min，4 200 r·min-1離心5 min，吸取1.00 mL上清液過微孔濾膜，裝瓶待測。試劑空白及樣品空白前處理同上。

（2）色譜條件。色譜柱：Waters C18（50 mm×3.0 mm，3.5 μm）；柱溫：35 ℃；流動相組成：A相為（0.08%甲酸+0.05%氨水）水，B相為甲醇，C相為乙腈；洗脫方式：梯度洗脫。洗脫程序：0～4.5 min，95%A，5%B；4.5～6.0 min，20%A，5%B，75%C；6.0～12.0 min，100%C；12.0～15.0 min，95%A，5%B。流速：0.4 mL·min-1；進樣量：5 μL。

（3）質譜條件。電離噴霧離子源（ESI+）；掃描模式：多反應監測掃描方式；離子源接口電壓3.8 kV，離子源溫度150 ℃；干燥氣：氮氣，流速800 L·h-1，干燥氣溫度500 ℃；碰撞氣：氬氣，流速0.14 mL·min-1；7種農藥的質譜參數如表1所示。

2 結果分析

液質聯用法定量檢測結果如表2所示，美正生物、快捷康生物膠體金免疫層析速測卡檢測結果如表3所示。通過對比分析可知，兩家不同生產商的膠體金免疫層析速測卡檢測豇豆中的阿維菌素、噻蟲嗪、噻蟲胺、滅多威、克百威、啶蟲脒和氟蟲腈7種農藥，檢測結果與液質聯用法定量檢測結果基本一致。該方法針對性強，檢測條件受環境影響小、檢測時間短，檢測結果基本可以滿足《食品安全國家標準 食品中農藥最大殘留限量》（GB 2763—2021）[5]中規定的水果蔬菜農藥最大殘留限量要求（克百威0.02 mg·kg-1，啶蟲脒0.40 mg·kg-1，氟蟲腈0.02 mg·kg-1，阿維菌素0.05 mg·kg-1，噻蟲嗪0.30 mg·kg-1，噻蟲胺0.01 mg·kg-1，滅多威0.20 mg·kg-1）。

3 結論

對豇豆中農藥殘留進行檢測，要充分考慮豇豆在生產、運輸、銷售等過程中的環境條件。相較于傳統的分析檢測方法，膠體金免疫層析法具有靈敏度高、操作簡單、成本低、節省分析時間等優勢，可有效提升農藥殘留的檢測效率。截至目前，國內農殘免疫快檢產品主要以膠體金免疫層析技術為主，多家公司已投入膠體金試紙的生產，檢測對象涉及克百威、噻蟲嗪、啶蟲脒、氟蟲腈等30多種農藥[6]。在了解施藥類別的情況下，生長期、采摘前都可以對豇豆進行速測，膠體金免疫層析技術適合在基層農產品質量安全監管中推廣應用。

參考文獻

[1]楊淞杰，劉國軍，曾偉，等.四川省豇豆農殘問題治理現狀與對策建議[J].中國植保導刊，2023，43（11）：109-112.

[2]邱靜.我國主要農藥殘留快速檢測方法及產品現狀分析[J].農產品質量與安全，2011（5）：41-46.

[3]萬積成，唐曉賓，潘家榮，等.膠體金試紙條在蔬菜農藥殘留農戶自檢中的應用[J].農產品質量與安全，2010（1）：37-39.

[4]國家衛生健康委員會，農業農村部，國家市場監督管理總局.食品安全國家標準 食物源性食品中331種農藥及其代謝物殘留量的測定 液相色譜-質譜聯用法：GB 23200.121—2021[S].北京：中國標準出版社，2021.

[5]國家衛生健康委員會，農業農村部，國家市場監督管理總局.食品安全國家標準 食品中農藥最大殘留限量：GB 2763—2021[S].北京：中國標準出版社，2021.

[6]郭艷國，劉振江，潘興魯，等.我國農藥殘留快速檢測技術研究進展及其發展趨勢[J].現代農藥，2022，21（6）：1-5.

作者簡介：李改弟（1987—），女，甘肅平涼人，本科，農藝師。研究方向：農產品質量安全檢測。

通信作者：左鳳（1981—），女，四川南充人，本科，高級農藝師。研究方向：農產品質量安全檢測。E-mail：605601975@qq.com。