年齡對(duì)兒童髓母細(xì)胞瘤預(yù)后的影響及其腫瘤微環(huán)境分析

董文艷 黃進(jìn) 吳碩雄

【摘要】目的分析不同年齡段髓母細(xì)胞瘤患者生存率，探討腫瘤微環(huán)境中免疫細(xì)胞浸潤(rùn)對(duì)預(yù)后的影響及其與年齡的相關(guān)性，并篩選年齡相關(guān)免疫調(diào)節(jié)分子。方法對(duì)公共數(shù)據(jù)庫(kù)中的隊(duì)列進(jìn)行研究，使用Kaplan-Meier曲線進(jìn)行生存分析，根據(jù)年齡不同，利用MCPcounter對(duì)免疫細(xì)胞絕對(duì)豐度進(jìn)行量化，同時(shí)篩選年齡相關(guān)免疫調(diào)節(jié)分子，尋找影響低齡髓母細(xì)胞瘤預(yù)后的危險(xiǎn)因素。結(jié)果髓母細(xì)胞瘤患者的生存率隨年齡的減少而降低，0～3歲的嬰幼兒期髓母細(xì)胞瘤患者生存率在隊(duì)列所有病例中最低。嬰幼兒期患兒腫瘤微環(huán)境中的效應(yīng)免疫細(xì)胞CD8+T細(xì)胞、細(xì)胞毒性淋巴細(xì)胞、中性粒細(xì)胞、B淋巴細(xì)胞顯著低于其他年齡段患兒，腫瘤相關(guān)纖維母細(xì)胞、單核細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞顯著高于其他年齡段患兒。CXCR4的高表達(dá)與效應(yīng)免疫細(xì)胞浸潤(rùn)呈負(fù)相關(guān)，與腫瘤相關(guān)細(xì)胞呈正相關(guān)，這些免疫細(xì)胞與髓母細(xì)胞瘤預(yù)后密切相關(guān)。結(jié)論低齡引起髓母細(xì)胞瘤不良預(yù)后與CXCR4高表達(dá)介導(dǎo)的腫瘤微環(huán)境重塑密切相關(guān)。

【關(guān)鍵詞】?jī)和枘讣?xì)胞瘤；腫瘤微環(huán)境；CXCR4；免疫治療；GEO

【中圖分類號(hào)】R739.41【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】A【文章編號(hào)】1672-7770（2024）01-0065-07

Prognosis and tumor microenvironment analysis of pediatric medulloblastoma based on different ages DONG Wenyan， HUANG Jin， WU Shuoxiong. Department of Anesthesiology， Wuxi Childrens Hospital Affiliated to Jiangnan University， Wuxi 214023， China

Corresponding author： WU Shuoxiong

Abstract： ObjectiveTo analyze the prognosis of patients with medulloblastoma at different ages， and to explore the influence of immune cell infiltration on prognosis and the correlation with age， and screen age-related immune regulatory molecules. MethodsIn the study， cohorts from public database were studied through informatic analysis， Kaplan-meier curves were used for survival analysis， and MCPcounter was used to quantify the absolute abundance of immune cells in different ages. Meanwhile， age-related different expression genes were screened， and the effects of different expression genes on immune cell infiltration were analyzed. ResultsThe survival rate of patients aged 0-3 years was the lowest among all patients in the cohort. The number of CD8+T cells， cytotoxic lymphocytes， neutrophils and B lineage in the tumor microenvironment of infants were significantly lower than other age groups， while the number of tumor-associated fibroblasts， monocyte lineage and endothelial cells were significantly higher than other age groups. The expression of CXCR4 was negatively correlated with the infiltration of effector immune cells and positively correlated with tumor-associated cells， which were closely related to the prognosis of medulloblastoma. ConclusionThe poor prognosis of infants medulloblastoma is closely related to the remodeling of tumor microenvironment mediated by CXCR4 expression.

Key words： pediatric medulloblastoma; tumor microenvironment; CXCR4; immunotherapy; GEO

基金項(xiàng)目：無錫市衛(wèi)生健康委青年科研項(xiàng)目（Q202133）

作者單位：214023 無錫，江南大學(xué)附屬兒童醫(yī)院麻醉科（董文艷，吳碩雄）；南京醫(yī)科大學(xué)附屬無錫人民醫(yī)院神經(jīng)外科（黃進(jìn)）

通信作者：吳碩雄

髓母細(xì)胞瘤是一種常見于兒童、惡性程度最高的中樞神經(jīng)系統(tǒng)腫瘤，在所有兒童胚胎性腫瘤中占比約為65.8%，其中0～14歲兒童的發(fā)病率約為0.5例/10萬［1］。雖然在日益先進(jìn)的醫(yī)療條件下，進(jìn)行最大限度的手術(shù)切除和術(shù)后系統(tǒng)的放化療使髓母細(xì)胞瘤患兒生存率明顯提升，但在多種因素影響下，仍然有患兒出現(xiàn)復(fù)發(fā)甚至死亡。因此，對(duì)髓母細(xì)胞瘤預(yù)后的干預(yù)研究仍尤為重要。

髓母細(xì)胞瘤在細(xì)胞形態(tài)上類似胚胎期髓母細(xì)胞，具有侵襲性強(qiáng)、易轉(zhuǎn)移等特征，在本質(zhì)上屬多基因病變，這些基因及信號(hào)通路的交互作用調(diào)節(jié)細(xì)胞癌變的啟動(dòng)、侵襲轉(zhuǎn)移、復(fù)發(fā)、生存與死亡［2-3］。效應(yīng)免疫細(xì)胞是機(jī)體識(shí)別和清除癌變細(xì)胞的核心組成，在抑制腫瘤生長(zhǎng)、轉(zhuǎn)移、復(fù)發(fā)中發(fā)揮重要作用。本研究基于高通量基因表達(dá)數(shù)據(jù)庫(kù)（gene expression omnibus，GEO）中髓母細(xì)胞瘤的樣本，分析不同年齡段患兒腫瘤微環(huán)境中免疫細(xì)胞浸潤(rùn)情況，并進(jìn)一步篩選影響免疫浸潤(rùn)的相關(guān)分子，旨在通過促進(jìn)抗腫瘤免疫提高患兒生存率的探索。

1資料與方法

1.1一般資料GEO（https：//www.ncbi.nlm.nih.gov/geo/）數(shù)據(jù)庫(kù)是由美國(guó)國(guó)立生物技術(shù)信息中心創(chuàng)建的基因表達(dá)數(shù)據(jù)庫(kù)，收錄了世界各國(guó)研究機(jī)構(gòu)提交的基因表達(dá)數(shù)據(jù)，包括基因芯片，高通量測(cè)序數(shù)據(jù)。本研究使用數(shù)據(jù)集GSE85217是一項(xiàng)由加拿大多倫多兒童醫(yī)院發(fā)起的多中心研究，測(cè)序平臺(tái)為Affimetrix Human Gene 1.1 ST Array，數(shù)據(jù)集包含763例年齡段在0～57歲的原發(fā)性髓母細(xì)胞瘤患者。本研究根據(jù)兒童髓母細(xì)胞瘤診療規(guī)范的劃分選擇0～18歲年齡段患者作為兒童進(jìn)行后續(xù)分析，并定義0～3歲患兒為嬰幼兒期組，4～10歲患兒為學(xué)齡期組，10～17歲患兒為青春期組，大于18歲患兒為成年期組。下載數(shù)據(jù)集臨床資料信息后，剔除年齡性別不詳?shù)牟±螅灿?jì)有效病例716例。根據(jù)分組，對(duì)年齡、性別、分子亞型、病理亞型和轉(zhuǎn)移情況進(jìn)行匯總和統(tǒng)計(jì)。預(yù)后采用Kaplan-Meier生存分析，繪圖和統(tǒng)計(jì)使用Grsaphpad Prism8。

1.2基因集富集分析和差異表達(dá)基因篩選基因集富集分析（gene set enrichment analysis，GSEA）是一種基于表達(dá)矩陣來對(duì)基因進(jìn)行富集的方法，其結(jié)果反映某預(yù)定義基因集在兩組間的表達(dá)變化趨勢(shì)。本研究根據(jù)程序的要求準(zhǔn)備表達(dá)矩陣、表型數(shù)據(jù)、功能基因集（h.all.v7.5.symbols.gmt）文件，利用GSEA_4.1.0軟件對(duì)上述文件進(jìn)行分析。以NES（校正富集分?jǐn)?shù)）值>1和NOM P-value<0.05為標(biāo)準(zhǔn)對(duì)富集通路進(jìn)行篩選分析。

患者基因表達(dá)數(shù)據(jù)預(yù)處理在R語言環(huán)境中分析，通過Affy package（v1.44.0）處理探針數(shù)據(jù)，基于穩(wěn)健的多陣列平均算法對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化處理，轉(zhuǎn)化得到基因表達(dá)譜的矩陣數(shù)據(jù)。本研究中，兩組間差異表達(dá)基因篩選使用GEO2R進(jìn)行分析，以|Log2FoldChange|>1且adj.P<0.05為標(biāo)準(zhǔn)定義為差異表達(dá)基因。差異表達(dá)基因火山圖使用ggplot package繪制。

1.3免疫細(xì)胞浸潤(rùn)MCPcounter是一個(gè)可以利用轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)量化8個(gè)免疫細(xì)胞和2個(gè)基質(zhì)細(xì)胞絕對(duì)豐度的工具。本研究髓母細(xì)胞瘤患兒腫瘤微環(huán)境中免疫細(xì)胞浸潤(rùn)情況采用MCPcounter進(jìn)行分析。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)分析統(tǒng)計(jì)分析使用軟件SPSS 23和Graphpad Prism8，其中三組間臨床資料比較采用χ2檢驗(yàn)，生存分析采用對(duì)數(shù)秩檢驗(yàn)，免疫細(xì)胞浸潤(rùn)分析采用t檢驗(yàn)，相關(guān)性分析采用Pearson相關(guān)性分析。以P<0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1兒童髓母細(xì)胞瘤患者臨床資料716例有效病例中，0～17歲的兒童患者共計(jì)617例，根據(jù)年齡分組，有93例嬰幼兒期患兒，平均年齡為1.71歲，占有效病例的13.0%；學(xué)齡期患兒345例，平均年齡6.2歲，占有效病例的48.2%；青春期患兒179例，平均年齡12.49歲，占有效病例的25.0%。資料匯總顯示，男性患兒比例高于女性患兒，前者約為后者的2倍，但三組間性別比例沒有差異。在分型上，三組患兒的分子亞型分布具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，其中嬰幼兒期SHH型比例最高，學(xué)齡期和青春期患兒Group4型比例最高；由于存在病理類型和轉(zhuǎn)移情況不明的病例，本研究沒有對(duì)兩個(gè)指標(biāo)在三組間是否存在差異進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析（表1）。

2.2低齡是兒童髓母細(xì)胞瘤的臨床不良預(yù)后因素年齡是影響腫瘤預(yù)后的重要因素，本研究隨后對(duì)三組患兒及成年期患者的生存進(jìn)行分析，結(jié)果顯示，髓母細(xì)胞瘤術(shù)后生存率隨年齡的減少而降低，嬰幼兒期患兒長(zhǎng)期生存率顯著低于青春期和成年期，學(xué)齡期患兒長(zhǎng)期生存率則顯著低于成年期（圖1A）。

本研究對(duì)嬰幼兒期和青春期患兒的測(cè)序結(jié)果進(jìn)行基因集富集分析發(fā)現(xiàn)，多個(gè)信號(hào)通路于嬰幼兒期髓母細(xì)胞瘤富集，其中PI3K信號(hào)通路（NES=1.49，P<0.05）和KRAS信號(hào)通路活性（圖1B，NES=1.49，P<0.05）顯著高于青春期患兒，提示PI3K和KRAS信號(hào)通路的異常活化參與對(duì)髓母細(xì)胞瘤術(shù)后長(zhǎng)期生存的影響。

2.3低齡伴隨兒童髓母細(xì)胞瘤不良預(yù)后與抗腫瘤免疫低下有關(guān)上述結(jié)果顯示，低齡是兒童髓母細(xì)胞瘤的不良預(yù)后因素。低齡影響患兒對(duì)放化療的依從性和耐受性，同時(shí)也是影響機(jī)體免疫功能的重要因素。此外，PI3K異常活化亦可導(dǎo)致免疫功能受損和失調(diào)，從而影響疾病的轉(zhuǎn)歸［4］。因此，本研究不同年齡段髓母細(xì)胞瘤患兒免疫浸潤(rùn)情況顯示，嬰幼兒期患兒CD8+T細(xì)胞顯著低于學(xué)齡期患兒，細(xì)胞毒性淋巴細(xì)胞、中性粒細(xì)胞、B細(xì)胞顯著低于學(xué)齡期和青春期患兒，單核系細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、纖維母細(xì)胞則顯著高于學(xué)齡期和青春期患兒（圖2）；提示低齡髓母細(xì)胞瘤患兒抗腫瘤免疫力較弱，促血管生成能力強(qiáng)于學(xué)齡期和青春期患兒。

2.4CXCR4是介導(dǎo)低齡髓母細(xì)胞瘤免疫逃逸的關(guān)鍵年齡相關(guān)分子上述研究顯示，低齡確診髓母細(xì)胞瘤患兒腫瘤微環(huán)境中效應(yīng)免疫細(xì)胞顯著低于其他年齡段患兒。為了探究嬰幼兒期患兒免疫低下的原因，本研究隨后對(duì)三組患兒的基因表達(dá)進(jìn)行篩選。結(jié)果顯示，嬰幼兒期和學(xué)齡期患兒相比，有175個(gè)基因表達(dá)升高，91個(gè)基因表達(dá)降低；嬰幼兒期和青春期患兒相比，有203個(gè)基因表達(dá)升高，114個(gè)基因表達(dá)降低；學(xué)齡期與青春期患兒間沒有差異表達(dá)基因（圖3A）。上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示，PI3K通路影響髓母細(xì)胞瘤的生存預(yù)期，同時(shí)調(diào)節(jié)機(jī)體免疫應(yīng)答。因此，本研究將PI3K通路的核心基因與年齡差異表達(dá)基因進(jìn)行合并，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，CXCR4和PRKCB可能是介導(dǎo)低齡髓母細(xì)胞瘤不良預(yù)后的年齡相關(guān)分子（圖3B）。此外，本研究發(fā)現(xiàn)與青春期患兒相比，CXCR4的配體CXCL12在嬰幼兒期的表達(dá)亦顯著升高（圖3A）。

隨后，本研究分析CXCR4對(duì)免疫細(xì)胞浸潤(rùn)的影響，如圖3C所示，CXCR4的高表達(dá)與細(xì)胞毒性淋巴細(xì)胞呈強(qiáng)負(fù)相關(guān)，與纖維母細(xì)胞呈強(qiáng)正相關(guān)（|r|>0.5）；與CD8+T細(xì)胞、中性粒細(xì)胞、B淋巴細(xì)胞呈弱負(fù)相關(guān)，與內(nèi)皮細(xì)胞呈弱正相關(guān)（0<|r|<0.3）；與單核系細(xì)胞呈中等程度正相關(guān)（0.3<|r|<0.5），與自然殺傷細(xì)胞沒有相關(guān)性。結(jié)果顯示，CXCR4對(duì)兒童髓母細(xì)胞瘤免疫細(xì)胞浸潤(rùn)的影響與低齡髓母細(xì)胞瘤患兒腫瘤微環(huán)境結(jié)果一致。〖FL）〗〖KH-*1D〗

2.5基于CXCR4為靶點(diǎn)的臨床藥物治療探索CXCR4的高表達(dá)介導(dǎo)低齡髓母細(xì)胞瘤患兒的抗腫瘤免疫低下和不良預(yù)后。目前，已有多種CXCR4小分子抑制劑獲批上市或正在進(jìn)行臨床試驗(yàn)，這些抑制劑在腫瘤治療中發(fā)揮重要作用（表2）。多項(xiàng)研究顯示，多靶點(diǎn)的聯(lián)合應(yīng)用可顯著增強(qiáng)免疫治療的效果［5］。為此，本研究繼續(xù)探索CXCR4與其他免疫治療靶點(diǎn)的相關(guān)性；選擇GD2、TIM3、PD-L1/PD-1、IDO1和CTLA4為研究對(duì)象，如圖4所示，兒童髓母細(xì)胞瘤中CXCR4與TIM3的表達(dá)呈中等程度正相關(guān)（0.3<|r|<0.5），與GD2、PD-L1、IDO1的表達(dá)成弱正相關(guān)，與PD-1的表達(dá)呈弱負(fù)相關(guān)（0<|r|<0.3），與CTLA4的表達(dá)沒有相關(guān)性，表明CXCR4抑制劑和TIM3單克隆抗體聯(lián)合應(yīng)用具有更強(qiáng)的協(xié)同效應(yīng)。

3討論

髓母細(xì)胞瘤是兒童最常見神經(jīng)系統(tǒng)惡性腫瘤，在世界衛(wèi)生組織神經(jīng)系統(tǒng)腫瘤分級(jí)中被定義為惡性程度最高的Ⅳ級(jí)，總體中位生存期約為66個(gè)月，其中0～14歲患兒5年存活率約63.9%［1］。在年齡和性別分布上，髓母細(xì)胞瘤中位發(fā)病年齡在5～7歲，男性發(fā)病率（約60%）大于女性［6］。本研究參考的研究隊(duì)列中，男性患兒占比約65.5%，男女比例約為2∶1，以4～10歲患兒發(fā)病率最高，約占所有病例的48.2%，與文獻(xiàn)報(bào)道一致。髓母細(xì)胞瘤根據(jù)分子表型的不同被分為WNT、SHH、group 3和group 4四個(gè)亞型，其中WNT型預(yù)后較好，兒童5年生存率為95%，而group 3型在所有分子亞型中預(yù)后最差并極易轉(zhuǎn)移［7］。本研究的分析提示，不同年齡段髓母細(xì)胞瘤的分子亞型存在顯著差異，嬰幼兒期以SHH型為主，占比63.4%，而學(xué)齡期和青春期以group 4型為主，占50%以上。

影響髓母細(xì)胞瘤的預(yù)后因素有很多，包括年齡、殘余病灶大小、Chang氏分期、病理類型和分子亞型等。年齡是影響髓母細(xì)胞瘤預(yù)后的重要因素，對(duì)于小于3歲的患兒，需同時(shí)滿足殘余灶<1.5 cm2，Chang氏分期M0，病理類型為促結(jié)締組織增生型或廣泛小結(jié)節(jié)型才被歸為標(biāo)危組，否則均為高危組［8］。Kohler等對(duì)神經(jīng)系統(tǒng)腫瘤的統(tǒng)計(jì)亦顯示，0～1歲嬰兒髓母細(xì)胞瘤患者5年生存率約為33%，顯著低于1～4歲幼兒患者（47%）和5～14歲兒童患者（67%），提示確診年齡與預(yù)后密切相關(guān)［9］。 本研究根據(jù)年齡分組對(duì)患兒生存率進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)嬰幼兒期患兒在4個(gè)年齡段中預(yù)后最差，顯著低于成年期患者和青春期患兒。腫瘤在本質(zhì)上屬多基因病變，分子生物學(xué)和遺傳學(xué)的快速發(fā)展使人們開始關(guān)注髓母細(xì)胞瘤相關(guān)的基因和信號(hào)通路改變，包括與患者預(yù)后的關(guān)系。研究顯示，NOTCH信號(hào)通路的轉(zhuǎn)錄因子ATOH1可促進(jìn)SHH型髓母細(xì)胞瘤的軟腦膜播散和轉(zhuǎn)移［10］。而在group 3和group 4型髓母細(xì)胞瘤中，WIP1的過表達(dá)促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的侵襲［11］。此外，腫瘤微環(huán)境中的基質(zhì)細(xì)胞及其分泌的因子也是髓母細(xì)胞瘤轉(zhuǎn)移的因素之一［12-13］。因此，本研究隨后分析低齡相關(guān)的不良預(yù)后是否與基因水平的變化相關(guān)。結(jié)果顯示，相比于青春期，PI3K和KRAS兩個(gè)信號(hào)通路的核心分子在嬰幼兒期患兒中顯著富集。KRAS信號(hào)通路在腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)以及血管生成等過程中起著重要調(diào)控作用，KRAS可以通過轉(zhuǎn)錄因子Gli的激活促進(jìn)胰腺癌的發(fā)生，亦可通過KRAS/YY1/ZNF322/Shh轉(zhuǎn)錄軸增強(qiáng)新生血管的形成［14-15］。PI3K信號(hào)通路在多種腫瘤發(fā)生中發(fā)揮關(guān)鍵作用，目前共有5種針對(duì)PI3K的小分子抑制劑被批準(zhǔn)臨床使用，這些抑制劑通過阻斷PI3K信號(hào)通路的活化可抑制髓母細(xì)胞瘤的增殖、耐藥及遷移［16］。

PI3K信號(hào)通路不僅影響腫瘤細(xì)胞，而且參與免疫細(xì)胞的成熟、活化和遷移。研究顯示，PI3K的異常活化降低CD8+T細(xì)胞的浸潤(rùn)，上調(diào)抑制性細(xì)胞因子如IL-10、TGFβ等的表達(dá)，增強(qiáng)調(diào)節(jié)性T細(xì)胞、2型巨噬細(xì)胞等抑制性免疫細(xì)胞的浸潤(rùn)和纖維母細(xì)胞介導(dǎo)的腫瘤進(jìn)程［17-18］。鑒于PI3K在低齡髓母細(xì)胞瘤患兒中的影響及其與免疫微環(huán)境的相互作用，本研究對(duì)兒童髓母細(xì)胞瘤免疫浸潤(rùn)進(jìn)行研究。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，嬰幼兒抗腫瘤免疫顯著降低，表現(xiàn)在CD8+T細(xì)胞、細(xì)胞毒性淋巴細(xì)胞、中性粒細(xì)胞、B細(xì)胞都顯著降低；而CD8+T細(xì)胞、細(xì)胞毒性淋巴細(xì)胞等介導(dǎo)的免疫應(yīng)答是清除腫瘤細(xì)胞的首要因素，其功能障礙和衰竭均有利于腫瘤免疫逃逸［19］。此外，研究結(jié)果提示嬰幼兒期患兒?jiǎn)魏讼导?xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、纖維母細(xì)胞較學(xué)齡期和青春期患兒顯著升高。單核細(xì)胞可發(fā)育成巨噬細(xì)胞，并極化為促炎的1型巨噬細(xì)胞或抗炎的2型巨噬細(xì)胞，但2型巨噬細(xì)胞和腫瘤相關(guān)纖維母細(xì)胞通過自身及其分泌的抑制性細(xì)胞因子形成免疫屏障，進(jìn)一步抵抗細(xì)胞毒性淋巴細(xì)胞的抗腫瘤效應(yīng)［20］。

免疫細(xì)胞發(fā)揮功能受包括免疫檢查點(diǎn)在內(nèi)的多種分子調(diào)控，免疫檢查點(diǎn)是維持免疫穩(wěn)態(tài)的重要分子，但腫瘤細(xì)胞通過異常表達(dá)的共抑制分子及其相關(guān)配體，抑制免疫細(xì)胞的激活，從而逃避免疫攻擊［21］。通過以上結(jié)果得知，低齡髓母細(xì)胞瘤伴隨臨床不良預(yù)后，同時(shí)低齡患兒抗腫瘤免疫顯著降低。為尋求低齡患兒抗腫瘤免疫低下的原因，本研究分析各組患兒髓母細(xì)胞瘤基因表達(dá)情況，并篩選與PI3K信號(hào)通路相關(guān)的差異表達(dá)基因；結(jié)果顯示，CXCR4和PRKCB是PI3K信號(hào)通路相關(guān)的年齡差異表達(dá)基因。同時(shí)，本研究發(fā)現(xiàn)，CXCR4的表達(dá)與效應(yīng)免疫細(xì)胞CD8+T細(xì)胞、細(xì)胞毒性淋巴細(xì)胞、中性粒細(xì)胞、B淋巴細(xì)胞呈負(fù)相關(guān)，而與纖維母細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞和單核系細(xì)胞呈正相關(guān)，結(jié)果與低齡髓母細(xì)胞瘤免疫浸潤(rùn)表型一致。CXCR4是趨化因子CXCL12的特異性受體，兩者結(jié)合促進(jìn)腫瘤的生長(zhǎng)和遷移［22］。此外，CXCL12/CXCR4促進(jìn)腫瘤血管生成和誘導(dǎo)抑制性免疫反應(yīng)。研究顯示，CXCL12/CXCR4阻礙CD8+T細(xì)胞的分化，促使巨噬細(xì)胞向2型極化，并通過其他作用幫助腫瘤逃避免疫監(jiān)視［23］。

CXCR4高表達(dá)的促癌作用，讓人們意識(shí)到其作為腫瘤免疫治療靶點(diǎn)的可能，目前，有多項(xiàng)CXCR4小分子抑制劑和單克隆抗體被批準(zhǔn)上市或正在進(jìn)行臨床試驗(yàn)［24］。多項(xiàng)研究表明，多免疫靶點(diǎn)的抑制可顯著增強(qiáng)抗腫瘤功效［25］。因此，本研究從免疫靶點(diǎn)間的相關(guān)性著手，探討可能的雙靶點(diǎn)協(xié)同作用；結(jié)果顯示，CXCR4與TIM3在表達(dá)水平正相關(guān)，與PD-1/PD-L1等靶點(diǎn)相關(guān)性較弱或沒有相關(guān)性，提示CXCR4抑制劑和TIM3單抗的聯(lián)合使用可協(xié)同逆轉(zhuǎn)髓母細(xì)胞瘤的抑制性免疫表型。

本研究基于兒童髓母細(xì)胞瘤的生物信息學(xué)分析表明，低齡是臨床預(yù)后的不良因素之一，這可能與CXCR4介導(dǎo)的效應(yīng)免疫細(xì)胞浸潤(rùn)降低有關(guān)；同時(shí)，本研究給出聯(lián)合雙靶點(diǎn)免疫治療的可行方案，以期提高兒童髓母細(xì)胞瘤的長(zhǎng)期生存率。

利益沖突：?所有作者均聲明不存在利益沖突。

［參 考 ?文 ?獻(xiàn)］

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（收稿2022-09-04修回2022-10-21）