添加復合乳酸菌和糖蜜對不同水分含量苜蓿青貯品質(zhì)的影響

摘要：本文旨在研究水分含量（67.69%，59.43%，47.26%和38.07%）對添加復合乳酸菌和2%糖蜜青貯后紫花苜蓿（Medicago sativa L.）青貯品質(zhì)的影響。復合乳酸菌由植物乳桿菌和布氏乳桿菌組成，等比添加1×107cfu·g-1 FW。室溫厭氧發(fā)酵后開袋對青貯苜蓿營養(yǎng)品質(zhì)、發(fā)酵品質(zhì)和微生物數(shù)量進行測定。結(jié)果表明，萎蔫對添加復合乳酸菌和糖蜜的苜蓿青貯后的粗蛋白（Crude protein，CP）、酸性洗滌纖維（Acid detergent fiber，ADF）、氨態(tài)氮和有機酸含量均有顯著影響（Plt;0.05）；在不同水分條件下使用復合乳酸菌均能顯著提高青貯后的乳酸含量（Plt;0.05），降低酸性洗滌纖維含量、pH值和氨態(tài)氮含量（Plt;0.05）；添加復合乳酸菌在一定程度上能改善苜蓿青貯的細菌群落結(jié)構(gòu)。根據(jù)主成分分析得出，苜蓿在含水量為59.43%條件下，添加復合乳酸菌青貯效果最佳，可有效提高青貯苜蓿品質(zhì)。原料含水量為47.26%時添加糖蜜效果最佳。

關(guān)鍵詞：紫花苜蓿；發(fā)酵品質(zhì)；水分；復合乳酸菌；糖蜜

中圖分類號：S963.22+3.3 """文獻標識碼：A """"文章編號：1007-0435（2024）05-1601-09

Effects of Adding Compound Lactobacillus and Molasses on the Quality of

Alfalfa Silage with Different Moisture Contents

HEI Meng-qin1， CAO Zheng-yu1， WANG Zhi-yuan1， DAI Chun-hui2， CHEN Cheng1*， ZHANG Wen-ju1*

（1.The College of Animal Science amp; Technology， Shihezi University， Shihezi， Xinjiang 832003， China; 2. Huyanghe Heqi

Agricultural Technology Company， Huyanghe， Xinjiang 834034， China）

Abstract：The aim of this experiment was to investigate the effect of different moisture contents （67.69%，59.43%，47.26% and 38.07%） on the quality of alfalfa （Medicago sativa L.） silage after adding compound Lactobacillus and 2% molasses，respectively. The composite lactic acid bacteria were composed of Lactobacillus plantarum and Lactobacillus brucelli，with an equal addition of 1×107 cfu·g-1 FW. After anaerobic fermentation at room temperature，the nutritional quality，fermentation quality and microbial quantity of silage alfalfa were determined. The results showed that wilting significantly affected the contents of crude protein （CP），acid detergent fiber （ADF），ammonia nitrogen，and organic acid in alfalfa silage（Plt;0.05）;The use of composite lactic acid bacteria under different water conditions can significantly increase the lactic acid content after silage （Plt;0.05），and reduce the content of acidic washing fiber，pH value，and ammonia nitrogen content （Plt;0.05）;Adding composite lactic acid bacteria can improve the bacterial community structure of alfalfa silage. According to principal component analysis，under the condition of 59.43% moisture content in alfalfa，adding composite lactic acid bacteria for silage has the best effect and can effectively improve the quality of alfalfa silage. Adding molasses has the best effect when the moisture content of the raw material is 47.26%.

Key words：Alfalfa;Fermentation quality;Moisture;Compound lactic acid bacteria;Molasses

紫花苜蓿（Medicago sativa L.）具有粗蛋白質(zhì)含量高、適口性好、多年生等特點，是廣泛種植的青貯作物。在集約化農(nóng)業(yè)中，通過青貯手段調(diào)制的苜蓿已成為為全年持續(xù)提供優(yōu)質(zhì)青貯飼料的來源。然而紫花苜蓿的可溶性碳水化合物較低，具有較高的緩沖能力，且天然含水量高，因此天然附著微生物對紫花苜蓿青貯后容易發(fā)生不適當?shù)那噘A，造成飼料資源的浪費。接種微生物可以改變青貯的許多參數(shù)，但對發(fā)酵的影響程度取決于菌株的特性，并與附生菌群有效競爭的能力以及有足夠的基質(zhì)有關(guān)［1］。在原料中添加同型發(fā)酵乳酸菌可使乳酸快速積累，降低pH值和營養(yǎng)物質(zhì)的損失［2］，但使用同型發(fā)酵乳酸菌中乳酸和低pH值不足以抑制好氧菌的生長［3］。使用異型發(fā)酵乳酸菌，能產(chǎn)生高濃度的具有抗真菌特性的乙酸，可以提高青貯在厭氧條件下的穩(wěn)定性。然而，在發(fā)酵初期，青貯苜蓿中pH值降低較慢，可能導致在發(fā)酵的好氧階段有害細菌的生長［4］。由于這些特性，添加復合乳酸菌接種劑是改善苜蓿發(fā)酵過程，同時增加干物質(zhì)回收率的一種有潛力的選擇［5-6］。

Oliveira等人［7］的研究中，布氏乳桿菌和植物乳桿菌聯(lián)合使用可顯著抑制梭狀芽孢桿菌、霉菌和酵母的生長，改善苜蓿青貯60 d后的發(fā)酵特性和功能性碳水化合物代謝。并且，Zhang等人［8］的研究中接種乳酸菌還可以抑制腸桿菌和肺炎克雷伯菌等有害微生物的生長，以有效延緩苜蓿青貯的好氧變質(zhì)。此外，萎蔫程度往往會影響青貯過程中乳酸菌的發(fā)酵，但萎蔫后對苜蓿青貯品質(zhì)影響結(jié)果不一致。有研究表明苜蓿青貯原料在萎蔫至水分含量為60%～70%加入添加劑更利于青貯發(fā)酵［9-10］。Blajman等人［11］的研究中萎蔫21 h對pH值、DM、粗蛋白質(zhì)、纖維的降解有積極影響，但萎蔫后乙醇含量較高，植物乳桿菌和布氏乳桿菌的添加可以抵消乙醇的增加，但接種乳酸菌和萎蔫的青貯飼料并沒有產(chǎn)生更多的乙酸，好氧穩(wěn)定性沒有通過接種劑的施用來改善；Wan等人［12］發(fā)現(xiàn)萎蔫苜蓿中的氨態(tài)氮水平低于新鮮苜蓿。但Cavallarin等［13］認為干物質(zhì)含量低于320 g·kg-1的青貯經(jīng)歷了丁酸發(fā)酵和蛋白質(zhì)水解增加，苜蓿中氨態(tài)氮增加。糖蜜是目前常見的青貯糖類添加劑，能直接為乳酸菌提供發(fā)酵底物，改善青貯發(fā)酵品質(zhì)。萎蔫程度和添加復合乳酸菌劑及糖蜜對于苜蓿青貯品質(zhì)的影響報道較多，而在不同萎蔫下對比苜蓿青貯缺少乳酸菌和缺少碳水化合物研究較少，同時，基于以上苜蓿青貯萎蔫和添加乳酸菌的研究結(jié)果的不一致，本研究通過對比復合乳酸菌和糖蜜在不同水分下改善苜蓿青貯品質(zhì)的能力，基于隸屬函數(shù)法采用主成分分析旨在得出利用添加復合乳酸菌和糖蜜青貯的最適苜蓿萎蔫程度，并評價最適水分下天然苜蓿青貯缺少乳酸菌和和缺少可溶性碳水化合物對苜蓿青貯品質(zhì)的影響，以期為紫花苜蓿青貯添加劑的應用提供理論依據(jù)和數(shù)據(jù)支持。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

選用胡楊河市124團小羊廠種植的紫花苜蓿，第2茬初花期刈割后在田間晾曬萎蔫6 h后，萎蔫后的苜蓿水分含量為74%。田間萎蔫后在蔭蔽處萎蔫4 h，9 h，13 h，17 h后水分含量約為67.69%，59.43%，47.26%，38.07%，植物乳桿菌（Lactobacillus plantarum，LP）、布氏乳桿菌（Lactobacillus brucei，LB）購自內(nèi)蒙古源生泰牧業(yè)有限公司，糖蜜購自周邊制糖廠。

1.2 試驗設(shè)計

采用青貯袋青貯法，兩因素（4水分×2添加劑）8水平設(shè)計，在紫花苜蓿含水量為67.69%，59.43%，47.26%和38.07%時分別添加復合乳酸菌（植物乳桿菌、布氏乳桿菌，比例為1∶1，1×107 cfu·g-1FW）（LBP組）和2%糖蜜（M組），不添加復合乳酸菌及糖蜜為對照組（CK組），稱取500 g苜蓿干草，將復合乳酸菌和2%糖蜜溶解于20 mL 30℃無菌水中后按試驗設(shè)計分別噴灑到原料上，混合均勻，裝填到聚乙烯青貯袋內(nèi)，封口，壓實，抽真空，每處理設(shè)置3個重復，放于室溫蔭蔽處中自然青貯60 d，并定期檢查抽真空。

1.3 測定指標及方法

1.3.1 復合乳酸菌產(chǎn)酸能力測定 將活化的復合乳酸菌菌液按2%接種于MRS液體培養(yǎng)基中，以不接種復合乳酸菌的MRS液體培養(yǎng)基作為空白對照，30℃震蕩培養(yǎng)。期間每隔2 h取1次樣，連續(xù)取到24 h，測定復合乳酸菌pH值與吸光度（OD600 nm），繪制復合乳酸菌的產(chǎn)酸曲線與生長曲線。

1.3.2 營養(yǎng)成分測定 測定萎蔫風干紫花苜蓿鮮樣及青貯后干物質(zhì)（Dry matter，DM）、粗蛋白（Crude protein，CP）、中性洗滌纖維（Neutral detergent fiber，NDF）、酸性洗滌纖維（Acid detergent fiber，ADF）、可溶性碳水化合物（Water soluble carbohydrates，WSC）。DM、CP、半纖維素、NDF和ADF含量采用張麗英的方法測定［14］；可溶性碳水化合物含量采用蒽酮-乙酸乙酯比色法測定［15］。

1.3.3 發(fā)酵指標測定 發(fā)酵特性指標主要測定pH值、氨態(tài)氮、乳酸、乙酸、丙酸、丁酸含量。取10 g青貯樣品置于三角瓶中，加入90 mL超純水浸沒，放置搖床中，浸提24 h，過濾并收集濾液，取適量進行pH值的測定，將剩余濾液用于測定，氨態(tài)氮、乳酸、乙酸、丙酸、丁酸含量。用pHS-3D型酸度計測定pH值；采用苯酚-次氯酸鈉比色法測定氨態(tài)氮含量；采用高效液相色譜儀Agilent 1200測定有機酸含量［16］，色譜柱型號：C18填充色譜柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）；流動相：甲醇-0.02 mol·L-1 磷酸二氫鈉（pH值為2.7）=2.5∶97.5（V/V）。流速0.6 mL·min-1；洗脫梯度0 min：A∶B=0∶100，5 min：A∶B=2∶98，10 min∶A∶B=2∶98；柱溫40℃；進樣量20 μL，檢測波長：210 nm，測定時間：30 min。

1.3.4 微生物數(shù)量的測定 稱取10 g青貯樣品于90 mL無菌生理鹽水中，在搖床上（180 r·min-1）震蕩120 min，梯度稀釋101～107，分別取100 μL在培養(yǎng)基上涂布均勻。微生物主要測定霉菌、乳酸菌、酵母菌和丁酸梭菌數(shù)量。霉菌、酵母菌、乳酸菌、丁酸梭菌的數(shù)量，分別采用麥芽糖浸粉瓊脂培養(yǎng)基、高鹽察氏培養(yǎng)基、MRS培養(yǎng)基、強化梭菌鑒別培養(yǎng)基進行培養(yǎng)，所有培養(yǎng)基均購自海博生物技術(shù)有限公司，培養(yǎng)結(jié)束后進行平板計數(shù)，計算微生物數(shù)量［17］。

1.4 綜合評價

根據(jù)花梅等人［18］的隸屬函數(shù)法選擇氨態(tài)氮、pH值、乳酸含量、丁酸含量、乳酸菌數(shù)量、霉菌數(shù)量、丁酸梭菌數(shù)量7項指標，其中乳酸含量和乳酸菌數(shù)量為正向指標，氨態(tài)氮、pH值、丁酸含量、霉菌數(shù)量、丁酸梭菌數(shù)量為負向指標，用隸屬函數(shù)法統(tǒng)一量綱，再進行主成分分析進行綜合評價，通過式（3）計算綜合得分（Dn）。隸屬函數(shù)值計算公式：

式中：R（Xi）：各處理中某一正向指標的隸屬度，R（Xi）′：各處理中某一負向指標的隸屬度，Xi：各指標實際測定值；Xmax：第i個指標的最大值；Xmin：第i個指標的最小值；主成分分析法得到的各樣品營養(yǎng)品質(zhì)的綜合分值以Dn表示；第n個樣品第i個累積貢獻率≥85%的主成分以分值Fin表示；Ej為第j個主成分的貢獻率。

1.5 數(shù)據(jù)分析與處理

用SPSS 26.0數(shù)據(jù)進行方差分析，并用S-N-K法對各測定數(shù)據(jù)進行多重比較。Origin 2021軟件進行數(shù)據(jù)處理與圖表制作。

2 結(jié)果與分析

2.1 青貯前紫花苜蓿營養(yǎng)成分

紫花苜蓿含水量萎蔫到67.69%，59.43%，47.26%和38.07%時，主要營養(yǎng)成分如表1所示，不同萎蔫程度中，紫花苜蓿CP含量隨水分含量升高而升高，水分含量為67.69%時紫花苜蓿CP含量最高，為20.46%，CP含量較低的為含水量38.07%。水分含量為38.07%時紫花苜蓿NDF、ADF和WSC含量均為最高，WSC含量為4.56%，氨態(tài)氮含量最低。營養(yǎng)成分以干物質(zhì)計。

2.2 復合乳酸菌生長性能和產(chǎn)酸能力測定

由圖1可知，LB和LP之間生長速率和產(chǎn)酸能力有較大差異。LP產(chǎn)酸能力和生長速率均大于LBP和LB。LP產(chǎn)酸能力較好，LP和LBP在2～6 h生長速率均可達到最大，大約12 h生長速度變緩，進入穩(wěn)定期，隨后菌液OD600 nm變化較小，在0～10 h的產(chǎn)酸速率較快，LBP的pH值最低為4.075，LP的pH值最低為3.578，10～18 h產(chǎn)酸速率逐漸下降，產(chǎn)酸速率較快。LB生長速率和產(chǎn)酸速率均較為緩慢，10～14 h為對數(shù)生長期，22 h進入穩(wěn)定期；自開始pH值逐漸降低，10～16 h下降速度較快，24 h時pH值為4.382。

2.3 水分含量對添加復合乳酸菌和糖蜜苜蓿青貯營養(yǎng)品質(zhì)的影響

如表2所示，含水量與添加復合乳酸菌及糖蜜對紫花苜蓿青貯CP，NDF，ADF和WSC含量均有顯著影響（P＜0.05），但各水分組相比紫花苜蓿僅水分含量變化對CP、ADF含量無顯著影響；水分含量為38.07%和47.26%時，添加復合乳酸菌對兩組CP含量差異不顯著，但水分含量為59.43%時LBP組苜蓿青貯相較于各水分條件下LBP組和M組，對提高CP含量均有顯著差異（P＜0.05），相較于CK組CP含量提高百分點為14%，添加復合乳酸菌后，與不同水分相比水分含量為67.69%組CP含量均較低，營養(yǎng)損失較多；水分含量為47.26%時，添加復合乳酸菌及糖蜜均對苜蓿NDF、ADF含量影響差異顯著（P＜0.05）。不同水分下，添加菌劑及糖蜜均能顯著提高青貯苜蓿WSC含量（P＜0.05），添加復合乳酸菌組中水分含量為38.07%時WSC含量最高，達到4.11%DM，同時NDF含量最低。水分含量為67.69%時，WSC含量最少，微生物對WSC的消耗較多。兩處理對水分含量為38.07%時苜蓿青貯NDF影響不同，LBP組會降低NDF含量，與對照組差異顯著（P＜0.05），但添加糖蜜會提高NDF含量。說明在不同含水量下，通過合理添加復合乳酸菌和糖蜜均可以較好地改善苜蓿青貯后的營養(yǎng)品質(zhì)。

2.4 水分含量對添加復合乳酸菌和糖蜜苜蓿青貯發(fā)酵品質(zhì)的影響

如表3所示，原料水分含量和添加劑的互作效應對氨態(tài)氮、pH值及有機酸含量具有顯著影響（Plt;0.05），其中氨態(tài)氮隨水分含量先升高后降低。氨態(tài)氮在水分含量為67.69%+CK組最高，水分含量為59.43%+LBP組氨態(tài)氮含量最低為1.12 g·kg-1 DM。各水分含量下兩種添加劑的使用顯著降低了氨態(tài)氮含量，且 LBP組較M組氨態(tài)氮含量更低；青貯后水分含量為47.26%、59.43%和67.69%組水分含量變化對青貯苜蓿pH值影響差異不顯著，但添加復合乳酸菌后，與對照組相比pH值均下降顯著（Plt;0.05），在水分含量為59.43%時，添加復合乳酸菌組pH值最低，達到優(yōu)秀苜蓿青貯pH值標準。不同水分含量下，有機酸含量隨水分含量升高而升高，乳酸含量先降低后升高，丙酸含量升高，且差異顯著（Plt;0.05），丁酸含量在水分含量為67.69%時最高，達到16.31 g·kg-1 DM。添加復合乳酸菌后，水分含量為59.43%組乳酸含量最高，丁酸含量最低，水分含量為38.07%和67.69%添加糖蜜組均有較高丁酸。所有水分含量組對添加復合乳酸菌較糖蜜組更能提高乳酸含量（Plt;0.05）。

2.5 水分含量對添加復合乳酸菌和糖蜜苜蓿青貯微生物組成的影響

如表4所示，苜蓿水分含量對添加復合乳酸菌和糖蜜苜蓿青貯后所測微生物數(shù)量均有顯著影響（P＜0.05），水分含量為59.43%和67.69%時，與添加糖蜜相比添加復合乳酸菌更能降低霉菌數(shù)量（P＜0.05）。水分含量為38.07%時霉菌數(shù)量最多；酵母菌數(shù)量變化中，水分含量為38.07%和67.69%時添加糖蜜均不能減少酵母菌數(shù)量。水分為47.26%時，添加復合乳酸菌和糖蜜對酵母菌均有抑制效果（P＜0.05）；水分含量為67.69%時，丁酸梭菌數(shù)量最高；不同水分含量下，添加復合乳酸菌能增加乳酸菌數(shù)量，降低丁酸梭菌數(shù)量（P＜0.05）。

2.6 水分含量對添加復合乳酸菌和糖蜜苜蓿青貯品質(zhì)綜合評價

為確定水分對添加劑青貯苜蓿品質(zhì)，通過綜合主成分分析進行排名，由表5可知，基于隸屬函數(shù)分值，主成分1、2的貢獻率分別為80.696%，9.161%，2個主成分的累積貢獻率達到了89.85%，即保留了所選指標的絕大部分信息。第1主成分對應特征向量中，數(shù)量較大的指標為霉菌和pH值。以PC1和PC2作圖，如圖2所示，苜蓿青貯相關(guān)指標大致可以分為3組，I組為霉菌、氨態(tài)氮和pH值，與PC1呈正相關(guān)，II組為CP與PC1呈負相關(guān)，III組為乳酸和乳酸菌，與PC2呈負相關(guān)。8項指標與2個主成分進行線性組合以主成分貢獻率為權(quán)重，利用公式（3）計算出綜合評價值，結(jié)果顯示如表6所示，水分含量為59.43%添加復合乳酸菌苜蓿青貯綜合價值最高，其次為水分含量為47.26%的苜蓿青貯中復合乳酸菌添加組和糖蜜添加組。此外，各添加復合乳酸菌和糖蜜組的綜合評價得分均大于CK組。

3 討論

原料含水量可影響苜蓿青貯中乳酸菌發(fā)酵速率，水分含量過少，會使苜蓿難以壓實，氧氣難以排出，有助于有害微生物繁殖與生長，不能形成較低且穩(wěn)定的酸性環(huán)境，發(fā)酵過程受到抑制，飼料發(fā)霉且易引起“二次發(fā)酵”［19］。水分含量過高，會使青貯料滲透壓較低，滲液增加，同時會使糖分含量降低，造成原料營養(yǎng)物質(zhì)流失嚴重，不利于乳酸菌發(fā)酵［20］，且容易引起丁酸發(fā)酵。本研究中，高水分時，干燥時間較短，可以防止葉片脫落，CP含量較高，隨著萎蔫時間的增加，有部分汁液損失和葉片脫落，CP含量有所降低。高水分對WSC有部分稀釋作用，WSC含量隨水分含量升高而降低。適宜含水量是優(yōu)質(zhì)青貯飼料制作的重要條件，隨著乳酸菌快速繁殖，產(chǎn)生大量乳酸，能降低苜蓿青貯飼料pH值，克服緩沖能，同時抑制微生物活動，使乳酸菌在細菌群落中占據(jù)主導地位［21］。有研究表明，青貯中，只有少量乳酸菌可以在低水分條件下生長，大多數(shù)乳酸菌可以在水分含量為80%～50%中生長［22-23］。當苜蓿青貯的水分含量超過70%時，有利于梭狀芽孢桿菌大量繁殖產(chǎn)生丁酸，降解苜蓿青貯飼料中的蛋白質(zhì)，影響青貯品質(zhì)［24］。本試驗研究結(jié)果中，水分含量為67.69%苜蓿青貯后WSC含量較低，與閆星全等人［25］研究原料含水量對青貯苜蓿品質(zhì)的影響結(jié)果一致，可能是pH值過高，不能有效抑制丁酸梭菌發(fā)酵，青貯苜蓿中營養(yǎng)物質(zhì)大量轉(zhuǎn)化為丁酸造成的。有諸多研究者認為適當降低原料含水量，同時添加乳酸菌劑是達到適當發(fā)酵和提高飼料消化率的有效手段［26-27］。但乳酸菌發(fā)揮最大青貯效果的最適含水量當前仍有爭議［28-30］。

3.1 添加復合乳酸菌對不同水分含量苜蓿青貯品質(zhì)的影響

制作青貯時，乳酸菌被認為更加耐受低水分環(huán)境，因此可通過適當降低原料含水量來促進乳酸菌生長，使飼料中的可溶性糖轉(zhuǎn)化為乳酸，減少飼料營養(yǎng)物質(zhì)損失。本試驗中，隨著水分含量升高，添加復合乳酸菌后，pH值呈先降低再升高趨勢，原料含水量在59.43%時添加復合乳酸菌組青貯苜蓿的發(fā)酵品質(zhì)顯著優(yōu)于水分含量為67.69%組，主成分分析綜合評分為第一，pH值最低，且無丁酸產(chǎn)生，以上結(jié)果表明在青貯過程中乳酸能抑制丁酸發(fā)酵。水分含量為67.69%時，丁酸梭菌數(shù)量較高，因為丁酸梭菌可以在潮濕條件下（lt; 30%～35% DM）繁殖并將乳酸轉(zhuǎn)化為丁酸。Xu等［31］研究單獨使用布氏乳桿菌青貯pH值高于對照組，本試驗中添加復合乳酸菌組pH值均低于對照組，說明添加復合乳酸菌組有利于青貯飼料發(fā)酵；但最適水分含量與王成等人［32］研究結(jié)果不一致，可能與所用青貯菌劑不同，說明不同來源的乳酸菌具有不同的滲透壓適應性。在保存苜蓿營養(yǎng)方面，當水分含量分別為67.69%與38.07%時，添加復合乳酸菌后苜蓿CP含量較低，可能與水分含量過高和過低引起的霉菌與丁酸梭菌繁殖增多有關(guān)，使CP轉(zhuǎn)化為氨態(tài)氮、乙酸和丁酸；不同水分條件下添加復合乳酸菌組WSC含量較高，可能是復合乳酸菌中布氏乳桿菌為異型乳酸菌，繁殖速度和數(shù)量小于植物乳桿菌，且能減少其他細菌繁殖對青貯中WSC的消耗。與馮啟賢等人［33］研究的作為甲酸的有機酸可以顯著降低青貯后苜蓿ADF和NDF，提高WSC含量，與本文中布氏乳桿菌產(chǎn)乙酸等有機酸后有助于結(jié)構(gòu)碳水化合物的水解作用類似，且具有抗真菌作用，使酒精發(fā)酵減少，增加WSC保存率［34］，與對照組相比，添加復合乳酸菌和糖蜜對ADF降低作用較小，且有所升高，可能原因為青貯中微生物未能利用纖維類物質(zhì)，相對含量上升。

在評價青貯飼料好壞的指標中，丁酸含量越少，青貯料品質(zhì)越好。不同水分下添加復合菌劑能減少丁酸梭菌數(shù)量，使丁酸含量減少，水分含量高適宜丁酸梭菌生長。乳酸能夠降低青貯過程的酸度對丁酸梭菌繁殖有抑制作用。研究表明，植物乳桿菌和布氏乳桿菌共同發(fā)酵過程中植物乳桿菌可以調(diào)控早期發(fā)酵階段，pH值會下降得更快，青貯活躍發(fā)酵期結(jié)束后，布氏乳桿菌會將乳酸轉(zhuǎn)化為乙酸，適度的乙酸生產(chǎn)有可能抑制酵母菌和霉菌［35］，青貯飼料的pH值隨之升高，有助于提高青貯飼料的有氧穩(wěn)定性［36］。本研究中，添加復合菌劑后乙酸含量與對照組相比均顯著升高，在水分含量為59.43%時，乙酸含量最高，水分含量為47.26%時最低，乙酸有助于pH值的降低，Driehuis等人［37］將與未添加乳酸菌的空白對照組相比，布氏乳桿菌和植物乳桿菌處理組pH值下降更快。林樹巖等人［38］研究微生物添加劑青貯高粱中，復合乳酸菌處理組pH值表現(xiàn)最優(yōu)。兩種乳酸菌類型組合可能具有潛在的優(yōu)勢和互補效應［39］。本研究發(fā)現(xiàn)在低水分下復合乳酸菌也能增加乳酸生成量，與司華哲等人［40］研究低水分青貯結(jié)果一致。但任永霞等人［41］研究得出復合乳酸菌組和CK組乳酸含量無顯著差異，可能復合乳酸菌較苜蓿不易將秸稈和西蘭花菜尾中WSC轉(zhuǎn)化為乳酸導致。不同水分下，添加復合乳酸菌后在水分含量為59.43%時氨態(tài)氮較高，可能是復合菌劑代謝旺盛引起。且不同水分含量下，添加復合乳酸菌相比于對照組和添加糖蜜均能顯著降低酵母菌數(shù)量，有助于提高青貯飼料有氧穩(wěn)定性。綜合評價中各添加復合乳酸菌綜合評價得分均大于CK組，表明不同水分下添加復合乳酸菌對苜蓿青貯品質(zhì)均有改善作用。

3.2 添加糖蜜對不同水分含量苜蓿青貯品質(zhì)的影響

DM和WSC是保證青貯飼料中充分發(fā)酵的主要因素，WSC是前期發(fā)酵的底物［42］。研究表明WSC含量為28.52～37.19 g·kg-1 DM時，是繼續(xù)發(fā)酵和使pH值降低的WSC閾值［43］。并且，Hristov等人［44］的研究中水分為65%更有利于可溶性糖分轉(zhuǎn)化為乳酸。糖蜜本身富含WSC，并且為乳酸菌發(fā)酵提供充足的發(fā)酵底物，Yuan等［45］在飼料青貯中添加糖蜜能夠顯著降低pH值，使乳酸含量顯著提高。但添加量過高會因酵母菌數(shù)量增加而引起營養(yǎng)物質(zhì)損失。本試驗中，在苜蓿青貯中，當不加糖蜜時，對比不同水分含量青貯苜蓿CP含量和氨態(tài)氮發(fā)現(xiàn)，CP含量下降較多，pH值較高，可以說明可溶性糖含量不足，未能快速形成較低酸性環(huán)境，雖然水分含量為59.43%時較為適宜苜蓿青貯，但由于發(fā)酵底物糖分含量不足，發(fā)酵進程緩慢，青貯品質(zhì)不佳，乳酸含量較少，使青貯很難快速達到穩(wěn)定狀態(tài)，進而影響青貯的品質(zhì)，與薛春勝等人［38］研究一致。

添加糖蜜后，水分含量不同，表現(xiàn)出不同青貯品質(zhì)。試驗中，添加糖蜜后乳酸含量的增加表明WSC得到了充分利用。但在水分含量為38.07%與67.69%時添加糖蜜組中pH值較高，青貯很難快速達到穩(wěn)定狀態(tài)。陳鑫珠等人［46］研究高水分全株玉米青貯添加糖蜜時出現(xiàn)青貯料pH值不易降低，乙酸含量和丙酸含量較高的結(jié)果，可能原因為青貯原料汁流損失增加，并誘發(fā)梭菌腐敗，與本研究結(jié)果一致。本試驗中與添加復合乳酸菌組相比，添加糖蜜組有較多的好氧細菌，表明一部分糖蜜被好氧細菌消耗，與宗成等人［17，47］研究結(jié)果一致，糖蜜未被乳酸菌發(fā)酵，會促進部分乳酸進一步發(fā)酵為乙酸。添加糖蜜不會降低NDF和ADF含量，與Baytok等人［48］研究的添加糖蜜可降低結(jié)構(gòu)性碳水化合物含量結(jié)果不一致，可能與原料不同有關(guān)。但試驗水分含量為47.26%添加糖蜜組與同水分不加糖蜜組對比有較濃酸香味，較低pH值、氨態(tài)氮、霉菌數(shù)量，且綜合評分為第三，說明苜蓿水分含量對糖蜜青貯品質(zhì)有不同影響，這與鄭會超等人［49］經(jīng)稻草凋萎前后添加糖蜜裹包青貯結(jié)果一致。李改英等人［50］研究發(fā)現(xiàn)控制水分含量為60%～63%時，添加5%糖蜜能提升糖蜜麩皮青貯品質(zhì)，降低pH值和WSC含量，與本試驗結(jié)果一致，可見添加糖蜜提高了青貯飼料的品質(zhì)，縮短了青貯時間。周昕等［51］研究中水分含量為60%組和65%組，添加糖蜜后有害微生物數(shù)量較少，青貯品質(zhì)更高。與本試驗最適水分結(jié)果不一致，可能為原料特性不同的原因。添加糖蜜后相較于添加復合乳酸菌，青貯苜蓿營養(yǎng)品質(zhì)均有一定程度的損失，其原因可能為添加復合乳酸菌更有助于青貯苜蓿穩(wěn)定性。

4 結(jié)論

對萎蔫至水分含量為47.26%～59.43%的紫花苜蓿添加復合乳酸菌青貯的發(fā)酵品質(zhì)及營養(yǎng)價值改善效果最好，適宜在苜蓿青貯推廣中使用；在水分含量為47.26%時添加2%糖蜜組對紫花苜蓿青貯品質(zhì)的改善效果綜合評價結(jié)果為第三。且在水分含量為59.43%和47.26%下添加復合乳酸菌劑和糖蜜改善苜蓿發(fā)酵品質(zhì)優(yōu)于水分含量為38.07%和67.69%時，保存了苜蓿營養(yǎng)價值。

參考文獻

［1］ SUCU E，F(xiàn)ILYA I. Effects of homofermentative lactic acid bacterial inoculants on the fermentation and aerobic stability characteristics of low dry matter corn silages［J］. Turkish Journal of Veterinary and Animal Sciences，2006，30（1）：83-88

［2］ 李榮榮，鄭猛虎，崔欣雨，等. 優(yōu)良乳酸菌的篩選及對苜蓿青貯發(fā)酵品質(zhì)的影響［J］. 中國草地學報，2021，43（11）：69-75

［3］ 李彥飛，楊雙雙，初曉輝，等. 昆明優(yōu)質(zhì)本土乳酸菌的篩選及其對全株玉米青貯品質(zhì)的影響［J］. 草地學報，2022，30（12）：3215-3224

［4］ BLAJMANl J，VINDEROLA G，PEZ R，et al. The role of homofermentative and heterofermentative lactic acid bacteria for alfalfa silage：a meta-analysis［J］. The Journal of Agricultural Science，2020，158：107-118

［5］ REICH L J，KUNG L. Effects of combining Lactobacillus buchneri 40788 with various lactic acid bacteria on the fermentation and aerobic stability of corn silage［J］. Animal Feed Science amp; Technology，2010，159（3-4）：105-109

［6］ 王挺，宋磊，王旭哲，等. 復合乳酸菌對番茄皮渣與苜?；旌锨噘A發(fā)酵品質(zhì)及瘤胃降解率的影響［J］. 草業(yè)學報，2022，31（10）：167-177

［7］ OLIVEIRAI A S，WEINBERG Z G，OGUNADE I M，et al. Meta-analysis of effects of inoculation with homofermentative and facultative heterofermentative lactic acid bacteria on silage fermentation，aerobic stability，and the performance of dairy cows［J］. Journal of Dairy Science，2017，100（6）：4587-4603

［8］ ZHANG T，LI L，WANG X，et al. Effects of Lactobacillus buchneri and Lactobacillus plantarum on fermentation，aerobic stability，bacteria diversity and ruminal degradability of alfalfa silage［J］. World Journal of Microbiology amp; Biotechnology，2009，25（6）：965-971

［9］ 鐘書，張曉娜，楊云貴，等. 乳酸菌和纖維素酶對不同含水量紫花苜蓿青貯品質(zhì)的影響［J］. 動物營養(yǎng)學報，2017，29（5）：1821-1830

［10］劉婷，王騰飛，羅寬，等. 苜蓿青貯添加劑研究進展［J］. 飼料研究，2016（19）：12-14

［11］BLAJMAN J E，SIGNORINI M L，VINDEROLA G，et al. Impact of native spray-dried lactic acid bacteria，packing density and wilting time on fermentation characteristics of experimental maize and lucerne silages［J］. Grass and Forage Science：The Journal of the British Grassland Society，2022（1）：77

［12］WAN J C，XIE K Y，WANG Y X，et al. Effects of wilting and additives on the ensiling quality and in vitro rumen fermentation characteristics of sudangrass silage［J］. Animal Bioscience，2021，34（1）：56-65

［13］CAVALLARIN L，ANTONIAZZI S，BORREANI G，et al. Effects of wilting and mechanical conditioning on proteolysis in sainfoin （Onobrychis viciifolia Scop） wilted herbage and silage［J］. Journal of the Science of Food and Agriculture，2005，85（5）：831-838

［14］張麗英. 飼料分析及飼料質(zhì)量檢測技術(shù)［M］.第2版.北京：中國農(nóng)業(yè)大學出版社，2007：47-87

［15］閆艷紅，李君臨，郭旭生，等. 多花黑麥草與大豆秸稈混合青貯發(fā)酵品質(zhì)的研究［J］. 草業(yè)學報，2014，23（4）：94-99

［16］劉秦華，張建國，盧小良. 乳酸菌添加劑對王草青貯發(fā)酵品質(zhì)及有氧穩(wěn)定性的影響［J］. 草業(yè)學報，2009，18（4）：131-137

［17］宗成，張健，邵濤，等. 添加劑對紫花苜蓿青貯飼料發(fā)酵品質(zhì)的影響［J］. 草業(yè)學報，2020，29（12）：180-187

［18］花梅，孫啟忠，呂艷敏，等. 不同品種玉米青貯品質(zhì)的綜合評價［J］. 飼料研究，2023，46（7）：105-109

［19］張春原，楊國航，王元東，等. 不同玉米品種的青貯產(chǎn)量和營養(yǎng)品質(zhì)比較分析［J］. 作物雜志，2008（3）：38-39

［20］李文茜，王玉美，張永根. 影響青貯飼料質(zhì)量的因素及提高其質(zhì)量的措施［C］//第十二屆中國牛業(yè)發(fā)展大會論文集.遵義：中國牛業(yè)科學，2017：177-180

［21］李向林，萬里強. 苜蓿青貯技術(shù)研究進展［J］. 草業(yè)學報，2005（2）：9-15

［22］王飛，董祥，朱欣，等. 乳酸菌添加劑對高水分全株玉米青貯品質(zhì)和飼用效益的影響［J］. 黑龍江畜牧獸醫(yī)，2019（18）：118-122

［23］侯紅雁，申晨，霍文婕，等. 同型發(fā)酵乳桿菌對低水分紫花苜蓿青貯發(fā)酵品質(zhì)及體外消化率的影響［J］. 草地學報，2021，29（4）：835-841

［24］COBLENTZ W K，MUCK R E. Effects of natural and simulated rainfall on indicators of ensilability and nutritive value for wilting alfalfa forages sampled before preservation as silage［J］. Journal of Dairy Science，2012，95（11）：6635-6653

［25］閆星全，賈玉山，格根圖，等. 原料含水量及添加劑種類對青貯苜蓿品質(zhì)的影響［J］. 草地學報，2023，31（6）：1861-1866

［26］TAO L，ZHOU H，NAIFENG Z，et al. Effects of different source additives and wilt conditions on the pH value，aerobic stability，and carbohydrate and protein fractions of alfalfa silage［J］. Animal Science Journal，2017，88（1）：12599

［27］AGARUSSI M C N，PEREIRA O G，DA SILVA V P，et al. Fermentative profile and lactic acid bacterial dynamics in non-wilted and wilted alfalfa silage in tropical conditions［J］. Molecular Biology Reports，2019，46（1）：451-460

［28］DUNIèRE L，SINDOU J，CHAUCHEYRAS-DURAND F，et al. Silage processing and strategies to prevent persistence of undesirable microorganisms［J］. Animal Feed Science and Technology，2013，182（1-4）：1-15

［29］KUIKUI N，JINGYUN Z，BAOGE Z，et al. Assessing the fermentation quality and microbial community of the mixed silage of forage soybean with crop corn or sorghum［J］. Bioresource Technology，2018：265：563-567

［30］萬里強，李向林，張新平，等. 苜蓿含水量與添加劑組分濃度對青貯效果的影響研究［J］. 草業(yè)學報，2007（2）：40-45

［31］XU D，WANG N，RINNE M，et al. The bacterial community and metabolome dynamics and their interactions modulate fermentation process of whole crop corn silage prepared with or without inoculants［J］. Microbial Biotechnology，2020，4（2）：561-576

［32］王成，王益，周瑋，等. 植物乳桿菌和含水量對辣木葉青貯品質(zhì)和單寧含量的影響［J］. 草業(yè)學報，2019，28（6）：109-118

［33］馮啟賢，張磊，李妍，等. 甲酸處理對苜蓿青貯品質(zhì)及瘤胃降解率的影響［J］. 草地學報，2023，31（4）：1264-1272

［34］RABELO C H S，HRTER C J，VILA C L D S，et al. Meta-analysis of the effects of Lactobacillus plantarum and Lactobacillus buchneri on fermentation，chemical composition and aerobic stability of sugarcane silage［J］. Grassland Science，2019，65（1）：3-12

［35］MUCK R E，NADEAU E M G，MCALLISTER T A，et al. Silage review：Recent advances and future uses of silage additives［J］. Journal of Dairy Science，2018，101（5）：3980-4000

［36］王目森.植物乳桿菌與布氏乳桿菌對多花黑麥草青貯品質(zhì)及有氧穩(wěn)定性的影響［D］. 成都：四川農(nóng)業(yè)大學，2017

［37］DRIEHUIS F S，ELFERINKl S J W H，WIKSELAAR P G V. Fermentation characteristics and aerobic stability of grass silage inoculated with Lactobacillus buchneri，with or without homofermentative lactic acid bacteria［J］. Grass Forage，2010，57（4）：330-343

［38］林樹巖，劉通. 微生物添加劑對青貯高粱主要營養(yǎng)成分、抗營養(yǎng)因子及消化率的影響［J］. 飼料研究，2022，45（20）：93-98

［39］ZHANG T，LI L，WANG X F，et al. Effects of Lactobacillus buchneri and Lactobacillus plantarum on fermentation，aerobic stability，bacteria diversity and ruminal degradability of alfalfa silage［J］. World Journal of Microbiology amp; Biotechnology，2009，25（6）：965-971

［40］司華哲，劉晗璐，南韋肖，等. 不同發(fā)酵類型乳酸菌對低水分粳稻秸稈青貯發(fā)酵品質(zhì)及有氧穩(wěn)定性的影響［J］. 草地學報，2017，25（6）：1294-1299

［41］任永霞，楊關(guān)根，任孟雨，等. 不同混貯比例和添加劑對西蘭花尾菜發(fā)酵品質(zhì)的影響［J］. 草地學報，2023，31（9）：2868-2874

［42］SILVA V P，PEREIRA O G，LEANDRO E S，et al. Selection of Lactic Acid Bacteria from Alfalfa Silage and Its Effects as Inoculant on Silage Fermentation［J］. Agriculture，2020，10（11）：518

［43］LUO R，ZHANG Y，WANG F，et al. Effects of Sugar Cane Molasses Addition on the Fermentation Quality，Microbial Community，and Tastes of Alfalfa Silage［J］. Animals，2021，11（2）：355

［44］HRISTOV A N，SANSDEV S G. Proteolysis and rumen degradability of protein in alfalfa preserved as silage，wilted silage or hay［J］. Animal Feed Science amp; Technology，1998，72（1-2）：175-181

［45］YUAN X J，DONG Z H，TAJEBE D S，et al. Adding distiller's grains and molasses on fermentation quality of rice straw silages［J］. Cincia Rural，2016，46（12）：2235-2240

［46］陳鑫珠，高承芳，張曉佩，等. 糖蜜對不同比例苧麻雜交狼尾草混合青貯發(fā)酵品質(zhì)的影響［J］. 草地學報，2016，24（6）：1358-1362

［47］趙慶杰，原現(xiàn)軍，郭剛，等. 添加糖蜜和乳酸菌制劑對西藏青稞秸稈和多年生黑麥草混合青貯發(fā)酵品質(zhì)的影響［J］. 草業(yè)學報，2014，23（4）：100-106

［48］BAYTOK E，AKSU T，KARSLI M A，et al. The Effects of Formic Acid，Molasses and Inoculant as Silage Additives on Corn Silage Composition and Ruminal Fermentation Characteristics in Sheep［J］. The Scientific and Technological Research Council of Turkey，2005（2）：469-474

［49］鄭會超，楊金勇，應如朗，等. 凋萎和添加劑對稻草裹包青貯發(fā)酵品質(zhì)和營養(yǎng)價值的影響［J］. 動物營養(yǎng)學報，2017，29（4）：1312-1318

［50］李改英，高騰云，傅彤，等. 不同糖蜜添加量對紫花苜蓿青貯品質(zhì)和發(fā)酵進程的影響［J］. 華中農(nóng)業(yè)大學學報，2008（5）：625-628

［51］周昕，黃秋連，王健，等. 添加乳酸菌劑和糖蜜對不同含水量食葉草青貯發(fā)酵品質(zhì)及體外干物質(zhì)消失率的影響［J］. 動物營養(yǎng)學報，2021，33（3）：1594-1606

（責任編輯 劉婷婷）

收稿日期：2023-11-02；修回日期：2024-01-26

基金項目：國家自然科學基金項目（32060770）；第七師胡楊河市財政科技計劃項目（2022C11）資助

作者簡介：

黑夢琴（1998-），女，漢族，河南駐馬店人，碩士研究生，主要從事動物營養(yǎng)與飼料科學研究，E-mail：2419808495@qq.com；*通信作者Author for correspondence，E-mail：enze105@163.com；zhangwj1022@sina.com