乳酸菌和混合酸對苜蓿青貯品質、葉綠素及其降解酶的影響

摘要：為了探究紫花苜蓿（Medicago sativa L.）青貯過程中葉綠素及其降解酶含量的變化規律，試驗采用雙因素試驗設計（添加劑×3，天數×13），處理包括對照組（Control）、添加乳酸菌（Lactic acid bacteria，LAB）（植物乳桿菌，105cfu·g-1新鮮物質基礎）組和添加混合酸（Mixed acid，MA）（添加量4%）組。結果表明：與對照青貯相比，LAB和MA處理的青貯pH值較低，乳酸含量較高。對照組中葉綠素a和葉綠素b含量低于LAB組，高于MA組。在苜蓿青貯過程中，LAB抑制了葉綠素降解酶的活性，抑制了葉綠素的降解，MA則相反。綜上：添加LAB可以改善紫花苜蓿青貯發酵品質，且LAB組的紫花苜蓿青貯中葉綠素含量最高，葉綠素降解酶含量最低。本研究為調制生產富含功能性成分的苜蓿青貯飼料提供了理論基礎。

關鍵詞：發酵品質；苜蓿青貯；微生物組成；葉綠素；葉綠素降解酶

中圖分類號：S816.5+3 """文獻標識碼：A """"文章編號：1007-0435（2024）05-1610-09

Effects of Lactic Acid Bacteria and Mixed Acids on Fermentation Quality，

Chlorophyll and Chlorophyll Degrading Enzymes in Alfalfa Silage

KONG De-hui1，2， JIN Si-yu3， CAO Yang1，2，4*

（1.College of Animal Science and Technology， Heilongjiang Bayi Agricultural University， Heilongjiang Provincial Key Laboratory of

Efficient Utilization of Feed Resources and Nutrition Manipulation in Cold Region， Daqing， Heilongjiang Province 163319， China;

2. Engineering Research Center of Processing and Utilization of Grain By-products， Ministry of Education， Daqing， Heilongjiang

Province 163319， China; 3.Muyuan Foods Co.， Ltd.， Nanyang， Henan Province 47300， China; 4. Key Laboratory of Low-carbon

Green Agriculture in Northeastern China， Ministry of Agriculture and Rural Affairs P. R. China， Daqing， Heilongjiang

Province 163319， China）

Abstract：In order to study the changes of chlorophyll and chlorophyll degrading enzyme contents in alfalfa （Medicago sativa L.） silage，we used a two-factor test design （Additive×3，Days×13），with two additive treatments of adding lactic acid bacteria （LAB，Lactobacillus plantarum，105cfu·g-1 of fresh matter basis） or mixed acid （MA） （4% fresh matter basis），in comparison with the control without additive materials （CK）. The results showed that the silage treated with LAB and MA addition exhibited a lower pH and higher lactic acid content than those of the CK. The contents of chlorophyll a and chlorophyll b in CK were lower than those in the treatment with LAB，but higher than those in the treatment with MA. The addition of LAB inhibited the activity of chlorophyll degrading enzymes and slowed the degradation of chlorophyll，while MA showed the opposite pattern. In summary，LAB addition improved the fermentation quality of alfalfa silage，and obtained the highest chlorophyll content and the lowest activity of chlorophyll degrading enzyme in alfalfa silage. This study laid a practical and theoretical foundation for developing feed additives and increasing chlorophyll content in alfalfa silage.

Key words：Fermentation quality;Alfalfa silage;Microbial composition;Chlorophyll;Chlorophyll degrading enzymes

苜蓿（Medicago sativa L.）具有產量高、粗蛋白質含量高、適口性好等優點，被譽為“牧草之王”［1］。紫花苜蓿青貯主要在中國北方大部分地區生產，那里收獲季節雨水較多，很難生產出高質量的干草［2］。青貯飼料的發酵品質可以通過青貯飼料的顏色來評價，青貯飼料的顏色評分是青貯飼料發酵品質感官評價的重要指標之一［3］。發酵品質好的青貯飼料與新鮮飼料的顏色非常接近，即接近綠色和黃綠色。青貯飼料保持與新鮮苜蓿相似的綠色或黃綠色程度，這主要是由苜蓿葉片葉綠素含量決定的。葉綠素是地球上植物中含量最豐富、最重要的色素［4］，葉綠素及其衍生物具有造血、提供維生素、解毒、抗病和抗氧化等功能，如葉黃素是視網膜的組成成分［5-7］，β-胡蘿卜素是合成維生素E的原料［8］，它們都具有提高免疫力的功能。葉綠素在瘤胃內通過生物氫化作用，葉綠醇會以游離狀態存在，葉綠醇再通過瘤胃微生物的作用會生成植烷酸［9］，這些植烷酸會隨著代謝沉淀成牛奶和牛肉。植烷酸具有調節胰島素、促進脂肪酸酸化的作用［10-11］，對人類脂肪肝和糖尿病等生活方式疾病有緩解作用［12］。Bruh等［13］研究了苜蓿干草貯藏加工對α -生育酚和胡蘿卜素濃度的影響，發現第一次割草的 α -生育酚和胡蘿卜素在貯藏過程中有損失，而第五次割草的生育酚和胡蘿卜素在貯藏過程中無損失。Lindqvist［14］研究了豆草混合物中α -生育酚和β-胡蘿卜素受萎蔫、青貯和青貯添加劑類型的影響，發現無論青貯處理如何，百脈根（Lotus corniculatus L.）和梯牧草（Phleum pratense L.）均能提高了α-生育酚含量。然而關于苜蓿青貯過程中葉綠素代謝的研究卻很少。

本研究通過測定苜蓿青貯過程中葉綠素含量和相關降解酶活性，闡明苜蓿青貯過程中葉綠素降解代謝規律。為調制生產富含功能性成分的苜蓿青貯飼料提供理論基礎，對草食家畜養殖中減少藥物的使用，生產具有保健功能的畜產品以及零植烷酸的畜產品提供理論依據，這對保護人類健康具有重要的現實意義。

1 材料與方法

1.1 試驗材料及添加劑

紫花苜蓿原料為二茬草，由黑龍江蓬勃牧業有限公司提供。在室內通風處晾曬至半干（含水量50%左右），切至2～3 cm。

乳酸菌（Lactic acid bacteria，LAB）添加劑參考曹陽等人［15］的研究將乳酸菌（植物乳桿菌，108 cfu·g-1；雪印，札幌，日本）和無菌水按1 ∶ 400的體積比例制備。混合酸（Mixed acid，MA）參考Hiroshi［16］的方法將2 N硫酸和2 N鹽酸以1 ∶ 4的體積比例混合進行制備。

1.2 試驗設計

試驗采用雙因素完全隨機試驗設計（添加劑×3，時間×13），采用小規模青貯制備方法。對照組：稱重200 g原料裝入16 cm×25 cm聚乙烯袋中，真空密封包裝，LAB組：添加量為105cfu·g-1 新鮮物質基礎；MA組：MA按4%的比例均勻加入，常溫避光保存，在0，1，3，5，7，15，22，39，46，53，60，67，74 d開封，每個時間開封3袋。測定0，1，5，15，39，53和67 d的發酵參數和微生物組成，并測定所有組葉綠素相關降解酶和葉綠素的含量。

1.3 發酵品質測定

將樣品20 g裝入聚乙烯袋中，加入180 mL滅菌蒸餾水，用均質機拍打90秒，制成青貯浸提液。用快速定性濾紙過濾，并測定其濾液的pH值。所獲得的濾液取1.5 mL經12 000 r·min-1離心5 min，用0.22 μm微孔濾膜過濾后，采用高效氣相色譜進行乳酸（Lactic acid，LA）、乙酸（Acetic acid，AA）、丙酸（Propionic acid，PA）、丁酸（Butyric acid，BA）含量分析。采用分光光度計法，根據馮宗慈［17］的方法測定氨態氮（Ammonia nitrogen，NH3-N）。

1.4 一般化學成分測定

測定項目包括干物質（Dry matter，DM）、有機物（Organic matter，OM）、粗脂肪（Ether extract，EE）、粗蛋白（Crude protein，CP）、酸性洗滌纖維（Acid detergent fiber，ADF）、中性洗滌纖維（Neutral detergent fiber，NDF）、總氮（Total nitrogen，TN）含量。將開封后的一部分樣品放入電熱恒溫鼓風干燥箱中，在65℃條件下烘至恒重，由此得出自由水含量。用微型植物粉碎機將恒重后樣品粉碎并過1 mm篩，進行一般化學成分分析，

OM，EE，CP和TN的測定分別用（AOAC）中的方法934.01，976.05，920.39進行［18］，NDF與ADF利用Van soest方法進行測定［19］。

1.5 微生物組成測定

將乳酸細菌培養基（MRS）、大腸桿菌培養基（LB）、營養瓊脂培養基（NA）、馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養基（PDA）劃定1×101倍、1×103倍、1×105倍3個培養區域，其中梭菌計數瓊脂培養基（CCA）和NA（耐熱）培養基劃定1×101倍和1×102倍2個培養區域。用無菌水將青貯浸提液進行梯度稀釋，連續稀釋為1×101倍液、1×102倍液、1×103倍液、1×104及1×105倍液。用移液槍移取稀釋液20 μL，按照培養基中預先劃分好的區域將稀釋液滴入培養基中，并用涂菌棒均勻涂開。將1×101和1×102稀釋液水浴加熱（75℃，15 min），快速冷卻后涂CCA、NA（耐熱）培養基。其中MRS、CCA置于厭氧培養箱（37℃）培養，其余置于恒溫培養箱（37℃），培養48 h后取出進行菌落數計數。

1.6 葉綠素含量測定

參考閆震等［20］的方法，葉綠素a和葉綠素b含量的測定采用分光光度計法，提取溶液為丙酮乙醇（1 ∶ 1；V/V）。稱取2 g左右的樣品放入1.5 mL的離心管內，加入少許的碳酸鈣和二氧化硅，再加入適量的提取液，用組織研磨器研磨至組織發白。用快速定性濾紙過濾并定容至25 mL，混勻。用分光光度計分別測得665 nm和649 nm吸光度下的OD值。

計算公式如下：

葉綠素a=（12.72×A1-2.59×A2）×V/1 000×m

葉綠素b=（22.88×A1-4.67×A2）×V/1 000×m

式中：A1=665 OD值；A2=649 OD值；V=液體體積（mL）；m=樣品質量（g）。

1.7 葉綠素相關降解酶活性測定

參考Funamoto［21］和Kaewsuksaeng［22］的方法，將樣品剪碎后均勻混合后，稱取4 g，在液氮中研磨后加入20 mL丙酮，置于-20℃提取40 min，提取液12 000 r·min-1離心5 min，去除上清液，對底部沉淀再用同樣條件重復提取2次。在沉淀中加入5 mmol·L-1 pH=7的磷酸緩沖液3 mL（含50 mM KCL，0.24% TritonX-100），30℃下磁力攪拌30 min，12 000 r·min-1離心5 min，上清液即是酶粗提液。葉綠素酶（Chlase）、脫鎂葉綠素酶（PPH）和脫鎂葉綠酸a單加氧酶（PAO）的活性測定均用購自上海源葉有限公司的ELISA試劑盒。

1.8 數據處理

試驗數據在 Excel 2020 軟件初步整理后，使用SAS 9.2統計軟件，采用標準線性模型（GLM）對數據進行分析：

Yij=μ+αi+βj+（α×β）ij+ eij

其中，μ=總體均值；αi=添加劑效應（i=Control，LAB，MA）；βj=天數效應（j=0，1，5，15，39，53，67）；（α×β）ij=添加劑效應與天數效應之間的相互作用的影響；eij=隨機誤差，用Tukey檢驗確定平均值之間的差異顯著性（Plt;0.05）。

2 結果與分析

2.1 乳酸菌和混合酸對苜蓿青貯發酵品質的影響

添加LAB和MA對苜蓿青貯中pH、乳酸、乙酸、丙酸、丁酸和NH3-N的影響如表1。隨著發酵天數的延長，pH值逐漸降低。MA組的pH值顯著低于對照組（Plt;0.05），LAB組的pH值除0 d外均低于對照組，但差異不顯著，兩組pH值在第67 d時達到最低，分別為4.21和5.08。乳酸含量隨發酵天數的延長先升高后降低。乳酸含量在發酵初期迅速上升，在發酵第39 d達到最大值，隨后緩慢下降。LAB組和MA組在第53 d和第67 d的乳酸含量顯著高于對照組（Plt;0.05），其他天數也高于對照組，但差異不顯著。隨著發酵天數的延長，乙酸含量逐漸升高。乙酸含量在0～5 d迅速上升，然后緩慢上升。LAB組乙酸含量顯著低于對照組（Plt;0.05），MA組與對照組之間差異不顯著。隨著發酵天數的延長，丙酸含量逐漸升高。0～5 d未檢測到丙酸，MA組丙酸含量顯著高于對照組（Plt;0.05），LAB組與對照組之間差異不顯著。各處理均未檢測到丁酸。隨著發酵天數的延長，NH3-N含量逐漸升高。MA組NH3-N含量顯著低于對照組（Plt;0.05），LAB組NH3-N含量低于對照組，但差異不顯著。

2.2 乳酸菌和混合酸對苜蓿青貯化學成分的影響

添加LAB和MA對苜蓿青貯中化學成分的影響如表3。苜蓿青貯中干物質（DM）含量隨著發酵天數的延長差異不顯著，CP，OM，ADF和NDF含量隨著發酵天數的延長顯著下降（Plt;0.05），EE含量隨著發酵天數的延長顯著上升（Plt;0.05）。LAB組和MA組的DM，EE，OM，NDF和ADF含量與Control組相比差異不顯著。在第67 d時，MA組的CP含量顯著高于Control組（Plt;0.05），CP 含量為24.24，LAB組的CP含量也高于Control組，但差異不顯著，CP含量為23.46。在發酵天數和處理的相互作用下，DM含量差異不顯著，CP，EE，OM，ADF和NDF含量差異顯著（Plt;0.05）。

2.3 乳酸菌和混合酸對紫花苜蓿青貯飼料微生物組成的影響

添加LAB和MA對苜蓿青貯中乳酸菌、桿菌、大腸菌群、需氧菌、梭菌、霉菌和酵母菌數量的影響如表3。紫花苜蓿青貯飼料中乳酸菌數量隨著發酵天數的延長顯著上升（Plt;0.05），耐熱菌和大腸桿菌數量隨著發酵天數的延長顯著下降（Plt;0.05）；LAB組乳酸菌數量顯著高于對照組（Plt;0.05），MA組乳酸菌數量略高于對照組，但差異不顯著，在第15 d時，兩組乳酸菌含量達到最高，分別為11.55和9.55 cfu·g-1 FM。LAB組和MA組的耐熱菌和好氧性細菌與對照組比較差異不顯著。隨著發酵天數的延長，大腸菌群數量逐漸減少，MA組大腸菌群數量顯著低于對照組（Plt;0.05）。LAB組大腸菌群數量低于對照組，但差異不顯著。第39 d開始，LAB組和對照組都沒有檢測到大腸桿菌。LAB組和MA組在第15 d 的酵母菌數量顯著低于對照組（Plt;0.05），其他時間的酵母數量雖低，但差異不顯著。

2.4 乳酸菌和混合酸對紫花苜蓿青貯飼料葉綠素a和葉綠素b含量的影響

乳酸菌和混合酸對紫花苜蓿青貯飼料葉綠素a含量影響如圖1A所示。各組葉綠素a含量隨發酵天數的延長逐漸降低。LAB組在0～5 d高于對照組，但差異不顯著，在 5～74 d顯著高于對照組（Plt;0.05）。整個過程中，MA組葉綠素a含量顯著低于LAB組（Plt;0.05）。乳酸菌和混合酸對紫花苜蓿青貯飼料葉綠素 b含量影響如圖1B所示。隨著發酵天數的延長，各處理葉綠素b含量逐漸降低。在整個發酵過程中，MA組葉綠素b含量均低于對照組。除0 d外，LAB組葉綠素b含量均高于對照組。

2.5 乳酸菌和混合酸對葉綠素降解酶活性的影響

乳酸菌和混合酸對葉綠素酶（CLH）的活性的影響如圖2A所示。隨著發酵時間的延長，各組葉綠素酶活性先升高后降低。LAB組CLH活性在0～3 d高于對照組，在5～74 d低于對照組，在第22 d達到最高值27.40 mU·g-1，之后逐漸下降。MA組CLH活性在0～46 d顯著高于對照組（Plt;0.05），在53～74 d顯著低于對照組（Plt;0.05），在第39 d達到最高值30.48 mU·g-1，然后逐漸下降。在整個發酵過程中，MA組的葉綠素酶活性均高于LAB組。乳酸菌和混合酸對紫花苜蓿青貯飼料脫鎂葉綠素酶（PPH）活性影響如圖2B所示。各組PPH活性隨發酵天數的延長先升高后降低。在整個發酵過程中，LAB組PPH活性均低于對照組，在第39 d達到最高值8.34 mU·g-1，然后逐漸下降。MA組PPH活性在0～3 d迅速升高，在第22 d達到最高值8.54 mU·g-1，隨后逐漸下降；MA組在0～39 d PPH活性均高于對照組，46～74 d PPH活性低于對照組，并且在整個發酵過程中PPH活性一直高于LAB組。乳酸菌和混合酸對紫花苜蓿青貯飼料脫鎂葉綠酸a 單加氧酶（PAO）活性影響如圖2C所示。在0～53 d，LAB組PAO活性高于對照組，在5～74 d，低于對照組。MA組PAO活性在0～5 d顯著高于對照組（Plt;0.05），在7～74 d顯著低于對照組（Plt;0.05），MA組PAO活性在1～74 d均高于LAB組。

3 討論

3.1 乳酸菌和混合酸對紫花苜蓿青貯飼料發酵品質的影響

pH 值是評估青貯飼料發酵質量的基本指標［23］，MA組的pH值顯著低于對照組（Plt;0.05），LAB組的pH值除0 d外均低于對照組，但差異不顯著。乳酸含量在發酵前期快速上升是發酵品質良好的典型特征［24］，在青貯飼料發酵過程中，乳酸菌可以有效利用可溶性碳水化合物產生乳酸，以降低pH值，抑制有害微生物的生長繁殖［25］，從而提高紫花紫花苜蓿青貯飼料的保存性。含有乳酸菌的接種劑的主要優點之一是它們能夠提高乳酸生產的效率和速率，從而減少青貯中的蛋白質水解［26］。青貯飼料中有機酸在發酵過程中的過渡行為是pH值逐漸下降，發酵過程中乳酸含量相應增加，這是良好發酵過程的典型特征，與前人的研究結果一致［25，27］。結果表明，pH和乳酸含量的變化在早期（0～15 d）較為明顯，后期（15～60 d）變化較為平緩［28］。在本試驗中，處理組的pH值顯著低于對照組（Plt;0.05），且MA組的pH值最低，與張志登［29］的結果一致。LAB和MA均能夠提高紫花苜蓿青貯飼料的發酵品質。

3.2 乳酸菌和混合酸對紫花苜蓿青貯飼料化學成分的影響

牧草的粗蛋白、粗脂肪含量、NDF和 ADF含量是評價優質飼草的重要指標［30］。Shelito等人［31］研究表明，CP在青貯過程中逐漸被降解成NH3-N，降低了OM含量，造成一些營養損失，這與本研究結果一致。青貯飼料中的NH3-N/TN反應了青貯過程中CP分解程度，NH3-N/TN愈大時，表明CP分解越多，青貯飼料的發酵品質越低［32］。在本試驗中，添加MA顯著降低紫花苜蓿青貯飼料第74 d CP分解程度，這與張志登等［29］研究結果一致。陳龍賓等人［33］研究表明，經過酸處理后的紫花苜蓿青貯飼料CP含量高于對照組，ADF和NDF含量低于對照組，這與本研究結果一致。在紫花苜蓿青貯中添加MA可以在一定程度上保護CP不被降解為NH3-N，降低ADF和NDF含量。

3.3 乳酸菌和混合酸對紫花苜蓿青貯飼料微生物組成的影響

乳酸菌在青貯發酵中起著重要的作用。乳酸菌水平是預測青貯發酵是否充分的重要因素。一般情況下，當乳酸菌水平達到105 cfu·g-1 FM時，青貯能得到較好的保存［15，34］。本研究中，LAB組和MA組青貯發酵的乳酸菌水平均高于105 cfu·g-1 FM，因此LAB組和MA組青貯發酵充分且保存良好。使用乳酸菌作為添加劑的主要優點之一是可以提高乳酸生產的效率和速度，降低pH值，從而減少青貯過程中粗蛋白質的分解。植物乳桿菌是本研究中使用的接種劑。它能促進乳酸發酵，在低pH環境下生長良好［33］。該菌株制備的青貯飼料能夠促進乳酸菌的繁殖，降低pH值，抑制有害微生物的生長和繁殖，提高青貯飼料的發酵品質，與本研究結果一致。Okine等［25］ 和Woolford等［27］ 研究表明，發酵前期乳酸菌數量呈上升趨勢，后期呈下降趨勢，這與本研究結果一致。在青貯發酵過程中，乳酸菌能夠有效利用水溶性碳水化合物產生足夠的乳酸［36］，在LAB組中，乳酸菌數量高于對照組。LAB組和MA組降低了pH值，抑制了有害細菌的生長，提高了發酵質量。大腸桿菌最適生長繁殖的pH值5.0～9.0［37］。本研究中，隨著發酵天數的延長，大腸菌群數量逐漸減少，MA組大腸菌群數量顯著低于對照組（Plt;0.05），是因為MA的添加使苜蓿青貯的pH值在不需要LA累積的情況下就可以快速下降，大腸桿菌的生長繁殖能力下降。LAB組大腸菌群數量低于對照組，但差異不顯著。LAB組好氧性細菌在第53 d后顯著低于對照組（Plt;0.05），酵母菌在第39 d后顯著低于對照組（Plt;0.05），這與蔣再慧等［38］研究結果一致。本研究中，添加組的乳酸菌數量均顯著高于無添加組，好氧性細菌、大腸桿菌和酵母菌均低于無添加組，可見乳酸菌和混合酸的添加可以有效提高青貯飼料中的乳酸菌數量，抑制有害微生物的繁殖。

3.4 乳酸菌和混合酸對葉綠素含量和葉綠素相關降解酶活性的影響

葉綠素降解代謝會有兩種路徑，一部分葉綠素在Chlase的作用下發生脫植基反應，生成脫植基葉綠素［39］。另一部分葉綠素在酸性環境下會失去鎂離子變為去鎂葉綠素，經PPH的作用分解為葉綠醇和脫鎂葉綠酸［40］。這兩種途徑最后都會在PAO作用下發生卟啉環氧化環開環反應，使綠色褪去葉色發黃［41］。在本試驗中，均檢測到Chlase和PPH的活性，說明在紫花苜蓿青貯過程中葉綠素的降解代謝這兩條路徑都存在。Chlase的作用是在葉綠素降解過程中去除植物硅酸體，隨著青貯時間的延長，Chlase的活性逐漸降低，葉綠素含量逐漸降低［42］。本研究中，0～3 d，Chlase活性上升較快，MA組gt;LAB組gt;對照組，5～22 d，上升速度緩慢，39～74 d，LAB組和MA組Chiase活性逐漸下降，對照組繼續上升。在酸性條件下，葉綠素分子容易失去卟啉環中的Mg+，成為脫鎂葉綠素［43］，PPH的作用是將葉綠素水解為脫鎂鐵酸鹽［44］，PPH活性的增加是由于底物濃度的增加。本研究中，0～39 d PPH活性上升較快，MA組gt;對照組gt;LAB組，46～7 d對照組，LAB組和MA組活性逐漸下降，依次為MA組gt;LAB組gt;對照組。PAO在葉綠素降解和代謝中起著重要的調節作用，而PAO催化是綠色回歸的重要過程［45-46］。MA組PAO活性在0～1 d迅速上升，葉綠素a和葉綠素b含量低于LAB照和對照組，且先黃化。LAB組PAO活性先高于對照組，后又低于對照組。葉綠素a和葉綠素b含量也高于對照組。

在整個發酵過程中，MA組Chlase、PPH和PAO活性在發酵前期和中期均高于對照組，然后低于對照組。0～46 d，葉綠素a含量低于對照組，53～74 d高于對照組，葉綠素b含量在整個發酵過程中均低于對照組，LAB組Chlase和PAO活性在0～5 d先高于對照組，再低于對照組，PPH活性在整個發酵過程中均低于對照組。0～7 d時，葉綠素a含量低于對照組，15～74 d時高于對照組，0 d時葉綠素b含量低于對照組，1～74 d時高于對照組。其原因尚不確定。我們認為在發酵過程中產生了一種物質，降低了葉綠素降解酶的基因表達，抑制了葉綠素降解酶的活性，這種物質與發酵質量有關，還需要進一步的試驗來驗證這一猜想。

4 結論

添加LAB和MA都能夠改善苜蓿發酵品質，但葉綠素降解率和發酵品質并沒有相關性。LAB因降低了葉綠素降解酶活性，而抑制了葉綠素的降解；但MA提高了葉綠素降解酶活性，而促進葉綠素降解。本研究僅從酶水平揭示了添加LAB和MA對紫花苜蓿青貯過程中葉綠素變化的影響，今后需利用微生物組、基因組及代謝組等多組學聯合技術，進一步探究苜蓿青貯中葉綠素降解代謝機制。

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（責任編輯 劉婷婷）

收稿日期：2023-12-04；修回日期：2024-03-19

基金項目：黑龍江省重點研發計劃指導類項目（GZ20230029）；國家自然科學基金項目（No.32171676）；黑龍江省“百千萬”工程科技重大專項（No.2021ZX12B03）資助

作者簡介：

孔德慧（1999-），女，漢族，黑龍江大慶人，碩士研究生，主要從事反芻動物營養研究，E-mail：1955857122@qq.com；*通信作者Author for correspondence，E-mail：hbdkcaoyang@163.com