菌糠水提液對馬鈴薯致病疫霉的抑制機理

莫雯婧　陳洪森　桂芳澤　洪慈清　蔡鑫鎧　關雄　潘曉鴻

摘要：菌糠是菌菇生產后殘留的物質，含有豐富的無機鹽和有機質等成分。利用熱水浸提法制備香菇菌糠水提液（water extract from spent mushroom substrate，WESMS），通過紫外分光光度計和Zeta電位及粒徑儀對其紫外吸收情況、表面電荷和水中分散粒徑進行表征，采用平板滲透法及十字交叉測量直徑法計算WESMS對致病疫霉的抑制率，利用光學顯微鏡和掃描電鏡觀察病原菌細胞形態的損傷程度，并采用瓊脂糖凝膠電泳法分析WESMS 對致病疫霉 DNA 的影響。結果表明，WESMS 在紫外線A（UVA，315～400 nm）、B（UVB，280～315 nm）和C（UVC，100～280 nm）波段均有吸收，在水中的分散粒徑為3 649.27 nm。抑菌試驗表明，WESMS對病原菌的生長具有抑制作用，隨著提取液體積百分濃度的增加，抑制效果更明顯，在高體積百分濃度（6.25%WESMS）作用下對病原菌的抑制率近100%。經WESMS處理后病原菌的菌絲更加扭曲、扁平，且褶皺明顯增多，表明WESMS可對細胞造成明顯破壞；WESMS處理組的DNA條帶亮度暗于對照組，損傷程度與WESMS體積百分濃度呈正相關。研究結果為菌糠的資源化利用及其對馬鈴薯晚疫病的有效防治提供科學依據和技術支撐。

關鍵詞：香菇菌糠；馬鈴薯晚疫病；致病疫霉；抗菌機理

doi：10.13304/j.nykjdb.2023.0159

中圖分類號：S435.32；X712 文獻標志碼：A 文章編號：10080864（2024）05012909

隨著馬鈴薯主糧化戰略的開展，馬鈴薯成為我國四大主糧作物之一，馬鈴薯產業也在保障我國糧食安全、保護生態環境穩定等方面發揮著重要作用[1]。根據聯合國糧農組織（Food andAgriculture Organization，FAO，https：//www.fao.org/home/en）2022年的數據，全世界種植馬鈴薯的國家和地區有158個，種植面積1 920.50萬hm2，總產量達3.85 億t，平均單產20.10 t·hm-2。我國馬鈴薯種植面積和總產量均居世界第1位，但單產水平與發達國家仍存在差距[2]。由致病疫霉（Phytophthora infestans）引起的馬鈴薯晚疫病是馬鈴薯生產中最具毀滅性的病害之一，具有發生范圍廣、流行速度快、危害損失重、防治難度大的特點[3]。該病常發生于10～25 ℃的溫度范圍內，故在秋冬季發生率較高，被感染的葉緣及葉尖表面可見顏色為綠褐色、類似于水漬的斑點，斑點周邊可見淺綠色暈圈，如果環境濕度過高，斑點顏色為褐色，表面覆蓋有白色霉層[4]。目前，該病害大部分通過化學試劑來防治，如烯酰嗎啉和嘧菌酯等化學農藥[56]，而化學試劑會引發一系列的環境以及人體安全健康等問題，所以尋找綠色環保的新型抗菌材料成為安全、有效地降低該病害發生的關鍵手段。

香菇菌糠（spent mushroom substrate，SMS）是香菇生產過程中殘留下來的基質，研究表明，每生產1 kg菌菇將產生5 kg菌糠[7]。我國是世界上最大的菌類農產品生產國和消費國，每年平均產生約1 320萬t的菌糠[8]。由于菌糠含有豐富的氮和磷等營養成分，未經處理直接丟棄于環境中會造成嚴重的地下水體污染[9]，因此尋找廉價可靠的方法對菌糠進行資源化利用具有重要的研究意義。當前，菌糠主要應用于飼料添加劑、植物肥料、能源供應、污染物處理、二次培養與發酵以及植物病害防控等方面[10-15]。研究發現，香菇菌糠作為堆肥基質能有效降低黃瓜炭疽病的發病程度[16]，其水提液對辣椒疫霉菌（Phytophthora）也具有抑制作用[17]；杏鮑菇菌糠提取液對靈芝、真姬菇、秀珍菇和平菇菌絲具有抗菌活性，且其對4種食用菌菌絲的生長具有不同程度的抑制作用[18]。以上研究表明，菌糠具有作為新型抗菌材料的潛力，但當前對菌糠提取物的抗菌機理還有待進一步全面深入地分析。

本研究通過干燥、粉碎、過篩等方式將香菇菌糠原料進行預處理，得到菌糠粉末，將用熱水浸提獲取的菌糠水提液（water extract from spentmushroom substrate，WESMS）作為抗菌材料，利用平板滲透試驗來觀察抑菌效果，通過十字交叉測量直徑法計算平均抑菌率。采用光學顯微鏡和掃描電鏡觀察WESMS 對病原菌細胞的損傷程度、通過瓊脂糖凝膠電泳法比較對照組與處理組DNA條帶損傷情況，以期為菌糠作為農業病原菌抗菌劑提供理論基礎和技術支撐。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

1.1.1 樣品采集

香菇菌糠原料取自福建農林大學國家菌草工程技術研究中心，致病疫霉菌由福建農林大學病原菌群體遺傳與進化研究國際團隊饋贈。

1.1.2 培養基

培養基為黑麥（rye）固體培養基：60 g黑麥用單蒸水沖洗2～3遍，然后用單蒸水浸泡放于4 ℃冰箱過夜，次日倒掉浸泡用水，再用單蒸水清洗1～2遍，用破壁機勻漿3～4 min，研磨到肉眼不見大顆粒。混合液55 ℃水浴2 h，蓋上戳洞的保鮮膜。水浴后用4 層紗布過濾，定容至1 L，然后用250 mL錐形瓶分裝，加入WESMS，配成體積百分濃度分別為0.00%、0.33%、0.66%、1.64%、3.23%和6.25%的培養基，每100 mL液體培養基中加入2 g瓊脂條，高壓蒸汽滅菌，制備成固體培養基平板后備用。

1.2 試驗方法

1.2.1 香菇菌糠的前處理

將香菇菌糠外包裝上的污泥清理干凈，脫去外包裝，將其揉碎至無較大塊狀物，放于干燥箱（DH-9070A，上海一恒科學儀器有限公司）60 ℃干燥4～6 d，取出粉碎，過60目篩，得到菌糠粉末，用自封袋密封包裝備用。將菌糠粉末與水以1 g∶3 mL的比例混合均勻，高壓蒸汽鍋（HVE-50，日本三洋公司）121 ℃滅菌20 min，待冷至室溫，9 500 r·min-1離心10 min，取出上清液，先用2層濾紙和0.45 μm針式過濾器過濾，再用0.22 μm針式過濾器過濾，裝到滅菌的藍蓋瓶中[19]。

1.2.2 WESMS的表征

對香菇菌糠母液進行稀釋，超聲15 min 后，使用紫外可見吸收光譜儀（UV1800，上海奧析科學儀器有限公司）測定WESMS 在紫外線A（ultraviolet A，UVA）、B（UVB）以及C （UVC）波段的紫外吸收情況，并利用粒度分析儀（Zetasizer Nano ZS90，美國賽默飛公司）測定其在水中的分散粒徑大小。

1.2.3 抑菌試驗

使用平板滲透的方法來評估WESMS的抑菌效果。將直徑為6 mm的菌餅接種至已配制好的含不同WESMS 體積分數（0.00%、0.33%、0.66%、1.64%、3.23% 和6.25%）的平板中央，其中，含0.00% WESMS的平板是加入最大體積百分比濃度等量無菌水的黑麥培養平板，為空白對照（CK），每組3個重復。18 ℃恒溫培養，采用十字交叉法分別測量5、7、9 和11 d 的菌絲直徑，計算菌落生長距離和抑制率[20]。

菌落凈生長距離（mm）=菌落直徑-菌餅直徑 （1）

菌落生長抑制率=（對照菌落生長距離-處理菌落生長距離）／對照菌落生長距離×100% （2）

1.2.4 光學顯微鏡觀察

取20 μL的無菌水于載玻片上，將培養了一定天數的空白對照組（CK）與處理組的菌絲分別用滅過菌的牙簽沿著邊緣刮取一小塊下來，放于載玻片中攤平，蓋上蓋玻片于光學顯微鏡（ECLIPSE E100，日本尼康公司）下觀察菌絲形貌。

1.2.5 掃描電鏡觀察

將空白對照組（CK）與處理組菌落從平板上完整撕取下來，用無菌水清洗，置于2.5% 的戊二醛溶液中，放于4 ℃冰箱固定12 h。用1% OsO4后固定樣品1 h；然后，再次使用磷酸鹽緩沖液（pH=7.0）洗滌處理樣品3次，用一系列體積百分乙醇（30%、50%、70%、80%、90%、95%、100%）脫水15 min。將樣品轉移到無水乙醇和異戊乙酸（體積比1∶1）的混合物中30 min[21]；然后在空氣中自然干燥，使用掃描電鏡（SU8020，日本日立公司）進行觀察。

1.2.6 DNA損傷情況觀察。

采用真菌DNA提取試劑盒（Fungal DNA Kit D3390， Omega）提取空白對照組與處理組菌的DNA，通過微量紫外分光光度計（Nano-100，杭州奧盛譜爾科學儀器公司）檢測提取DNA 的純度。以15 kD 的Marker 作為參照，進行瓊脂凝膠電泳檢測，對比DNA損傷情況。

1.2.7 Zeta 電位測定WESMS 和病原菌表面電荷

將WESMS稀釋100倍，超聲15 min。將正常生長的馬鈴薯致病疫霉菌落從平板上完整撕取下來，放于無菌水中重懸一段時間，采用Zeta電位及粒度分析儀（Zetasizer Nano ZS90，美國賽默飛公司）測定WESMS和病原菌表面電荷，并進行比較分析。

1.3 數據統計與分析

抑菌率數據采用Origin 2018[22]和IBM SPSSStatistics 26 軟件進行分析，使用單因素ANOVA分析進行顯著性檢驗，P<0.05 代表具有顯著性差異。

2 結果與分析

2.1 香菇菌糠水提液獲取與表征分析

香菇菌糠原料質地較厚實，帶有水分，干燥完成后顏色變淺。粉碎后得到棕褐色粉末，熱水浸提、離心、過濾后得到近黑色菌糠水提液（WESMS）（圖1A）。將母液進行稀釋后，超聲15 min，測定其紫外可見光吸收情況，結果顯示，其在UVA（315～400 nm）、UVB（280～315 nm）以及UVC（190～280 nm）3個波長范圍內都具有紫外吸收（圖1B）。將母液稀釋100倍后，其分散在水中的粒徑平均為3 649.27 nm。

2.2 WESMS 對馬鈴薯致病疫霉菌的抑制效果

WESMS中含有草酸、水楊酸及其他酚酸類物質，因而可能具有一定的抗菌活性[17 ， 2324]。本研究結果表明，WESMS 對病原菌具有較強的抑制作用，且隨著WESMS體積百分濃度的增加，菌絲生長范圍更加有限，抑制作用更加明顯（圖2）。表1為不同體積百分濃度的香菇菌糠水提液對馬鈴薯致病疫霉菌的抑制率結果，在WESMS 體積百分濃度為1.64% 時，抑制率總體上大于50%，當WESMS體積百分濃度達到6.25%時，抑制率接近100%；此外還發現，抑菌率隨著培養天數的增加總體上呈現遞減的趨勢，表明WESMS 對病原菌的生長造成了嚴重影響。WESMS體積百分濃度越高，向外生長的菌絲數量越少，且培養前期的抑制作用整體上大于培養后期，可能是WESMS 影響了核酸和蛋白質的合成與活性。

2.3 抑菌機理研究分析

2.3.1 顯微鏡及掃描電鏡觀察分析

正常生長的菌絲表面光滑圓潤，粗細較均勻[25-27]，空白對照組菌絲形態（圖3A、B、C）符合正常生長樣貌，飽滿健康，而經高體積百分濃度（6.25%）WESMS處理過的菌絲表面不光滑，部分菌體收縮，有較多分支，出現大量的突起，彎曲程度嚴重（圖3D），內容物分布不均勻，可能造成空腔等畸變現象（圖3E），有菌絲“截斷”現象（圖3F）。在掃描電鏡下觀察發現，空白對照組菌絲較圓潤飽滿，粗細均勻，筆直（圖4A～D），而6.25%WESMS 處理組菌絲粗細不均，且似有內容物流出現象，扁平，褶皺較多，大多纏繞在一起（圖4E～G），末端扭曲程度嚴重（圖4H）。以上結果表明，WESMS對致病疫霉菌的抗菌活性抑制主要是引起其細胞壁及細胞膜受損破壞，可能是WESMS 中具有抗菌活性的物質在與病原菌細胞相互作用時結合在細胞上，從而進入到細胞內起干擾作用。

2.3.2 DNA 損傷情況分析

測定所提取病原菌DNA的OD600/800，發現OD600/800均在1.8～2.1，表明提取得到的DNA較純。以相對分子質量為15 kD的Marker作為參考[21]，進行瓊脂糖凝膠電泳檢測分析DNA損傷情況，由圖5可知，對照組總DNA條帶亮度高于處理組，隨著WESMS 體積百分濃度的增加，DNA含量越低，受損程度越高，電泳條帶亮度越低，說明DNA損傷程度與WESMS體積百分濃度呈正相關， 香菇菌糠水提液對病原菌的DNA造成了傷害，可能引發DNA鏈的斷裂與位點突變、雙鏈畸變、基因突變等多種形式的DNA損傷。與此同時，DNA 損傷又會引發多種細胞反應，其中包括了氧化應激[28]。

2.3.3 Zeta電位測定分析

Zeta電位是評價膠體分散體穩定性的重要指標[29]。電位正負表示試樣粒子電荷的正負性，電位絕對值反映顆粒之間相互作用的強度，絕對值越大分散體系越穩定，膠體越不易凝聚。由表2可知，WESMS的平均Zeta電位為-29.25 mV，病原菌的平均Zeta電位為-38.57 mV，根據WESMS的Zeta電位絕對值可以判斷其在水溶液中會變得比較不穩定，吸引力超過了排斥力，容易發生團聚。通過二者的Zeta電位結果可知，二者表面帶有相同電荷，具有排斥作用，WESMS與病原菌之間的反應可能不是由靜電吸附力驅動的。以上研究表明，WESMS對病原菌的生長造成延滯。

3 討 論

目前，通過現代殺菌劑來防控植物病蟲害是一種十分重要的手段，但是病原菌極易對現代殺菌劑產生抗性，最終導致化學防治失敗[30]。食用菌菌糠是一種具有廣泛再利用價值的農業資源[3132]。菌糠作為一種菌菇生產過程中的廢棄物，如果隨意丟棄，會對環境造成嚴重的不良影響，特別會對水體環境造成嚴重污染，因此對菌糠進行資源化利用具有重要意義。研究表明，香菇菌糠水提物可以減輕稻瘟病的發生，其對稻瘟病孢子有直接抑制作用，起到抑制作用的為3種酚酸化合物，為香菇分解菌糠原料蔗渣所得到的產物[24]。將香菇和杏鮑菇（Pleurotus eryngii）菌糠水提取物噴灑在黃瓜（Cucumis sativus Linn.）葉片表面，或直接將菌糠與營養土混合后用于黃瓜栽培，均能顯著減輕黃瓜白粉病和角斑病的發生[33]。且相較于化學殺菌劑，由于其多是生物來源，故不易引發病原菌產生抗性，并且對植物幾乎沒有毒害作用，成本較低。對比生物源抑菌劑，其抑菌效果優于某些生物制劑，如甲殼胺、申嗪霉素、乙蒜素[34]等，也優于某些拮抗菌株[35]。以上結果說明，香菇菌糠水提液具有成為防治植物病害的新型材料的潛力。

本研究將得到的香菇菌糠原材料經過去污、揉碎、干燥、粉碎以及過篩處理得到菌糠粉末，再用熱水浸提、離心、過濾得到香菇菌糠水提液（WESMS），并對其粒徑大小以及Zeta電位正負進行測定，結果表明，其Zeta電位絕對值較小，粒徑在幾千納米級別，具有進入卵菌細胞膜的潛力。用WESMS來拮抗馬鈴薯致病疫霉菌，結果表明，WESMS對該病原菌具有很強的抑制作用，且隨著體積百分濃度的升高，抑菌效果也更好，在6.25%WESMS下，抑菌率可達到近100%。菌糠是一種成分復雜的混合物[36]，有研究推測其抗菌作用主要是由木質素被分解后產生的草酸所引起的，而大多數真菌具有產生木質素氧化酶的能力[16]。除了抗卵菌，其對細菌，如金黃色葡萄球菌和銅綠假單胞菌均有抑制活性，原因在于菌糠富含多種活性物質，如多糖、多酚和萜類等，不同組成的菌糠具有不同的抗菌譜。然而對于其與菌在作用過程中是何種物質起到抗菌作用的研究還有待進一步探索。

本研究對WESMS抗菌機理進行了較系統的研究，發現WESMS 處理組的菌絲形態較對照組有較大差異，內容物分布不均，有外滲現象，且扭曲嚴重，大部分纏繞在一起，表面上出現較多的小突起，壁面粗糙，還出現頂端部分膨大現象。通過凝膠電泳分析，WESMS處理組的DNA 確實受到了一定程度的損傷，條帶相較于空白對照組的暗，且隨著WESMS體積百分濃度的升高，DNA 損傷程度越大。通過測定病原菌的Zeta電位發現，其和WESMS 一樣同為負電位，在產生排斥作用的同時，可能對于營養物質的攝取造成影響。通過抗菌效果以及機理的研究發現，WESMS不僅對報道的常見農業病原菌具有抑制作用，對馬鈴薯致病疫霉同樣具有良好效果，故WESMS 具有成為防控植物病害的新型抑菌劑的潛力。合理運用菌糠資源，不僅能提高農作物的品質與產量、保障人們的健康生活，還能降低菌糠過多堆積對環境造成的影響。

參 考 文 獻

［1］ 楊雅倫，郭燕枝，孫君茂.我國馬鈴薯產業發展現狀及未來展望[J].中國農業科技導報， 2017，19（1）： 29-36.

YANG Y L， GUO Y Z， SUN J M. Present status and futureprospect for potato industry in China [J]. J. Agric. Sci. Technol.，2017，19（1）： 29-36.

［2］ 李文華，呂典秋，閔凡祥.中國、荷蘭和比利時馬鈴薯生產概況對比分析[J].中國馬鈴薯， 2018，32（1）： 54-60.

LI W H， LYU D Q， MIN F X. Comparative analysis of potatoamong China， Holland and Belgium [J]. China Potato J.， 2018，32（1）： 54-60.

［3］ 夏善勇，牛志敏，李慶全，等.馬鈴薯晚疫病致病疫霉菌遺傳多樣性及防治研究進展[J]. 黑龍江農業科學， 2022（12）：89-94.

XIA S Y， NIU Z M， LI Q Q， et al .. Research progress ongenetic diversity of Phytophthora infestans in potato late blightand its control [J]. Heilongjiang Agric. Sci.， 2022（12）： 89-94.

［4］ 陳小勇. 馬鈴薯病害及防治技術[J]. 世界熱帶農業信息，2023（4）： 48-49.

［5］ 劉洋，趙秀梅，鄭旭，等.馬鈴薯晚疫病對甲霜靈和精甲霜靈抗藥性的田間藥效試驗[J].黑龍江農業科學， 2022（6）： 53-56，83.

LIU Y， ZHAO X M， ZHENG X， et al .. Field efficacy test ofpotato late blight resistance to metalaxyl and metalaxyl-M [J].Heilongjiang Agric. Sci.， 2022（6）： 53-56，83.

［6］ 劉冠求，萬博，崔亮，等.不同殺菌劑對馬鈴薯晚疫病和早疫病的田間防治效果[J].園藝與種苗， 2022，42（4）： 53-54，75.

LIU G Q， WAN B， CUI L， et al .. The field control effects ofdifferent fungicides on potato late blight and potato early blight [J].Hortic. Seed， 2022，42（4）： 53-54，75.

［7］ LAU K L， TSANG Y Y， CHIU S W. Use of spent mushroomcompost to bioremediate PAH-contaminated samples [J].Chemosphere， 2003， 52（9）： 1539-1546.

［8］ HUANG J L， LIU J Y， CHEN J C， et al .. Combustion behaviorsof spent mushroom substrate using TG-MS and TG-FTIR：thermal conversion， kinetic， thermodynamic and emissionanalyses [J]. Bioresour. Technol.， 2018， 266： 389-397.

［9］ HU T， WANG X J， ZHEN L S， et al .. Effects of inoculating withlignocellulose-degrading consortium on cellulose-degrading genesand fungal community during co-composting of spent mushroomsubstrate with swine manure [J]. Bioresour. Technol.， 2019， 291：121876-121885.

［10］ FAZAELI H， SHAFYEE-VARZENEH H， FARAHPOOR A， et al..Recycling of mushroom compost wheat straw in the diet offeedlot calves with two physical forms [J]. Int. J. Recyc.Organic Waste Agric.， 2014， 3（3）： 65-72.

［11］ NGAN N M， RIDDECH N. Use of spent mushroom substrate asan inoculant carrier and an organic fertilizer and their impactson roselle growth （Hibiscus sabdariffa L.） and soil quality [J].Waste Biomass Valori.， 2020， 12： 3801-3811.

［12］ LIN Y Q， GE X M， LI Y B. Solid-state anaerobic co-digestionof spent mushroom substrate with yard trimmings and wheatstraw for biogas production [J]. Bioresour. Technol.， 2014， 169：468-474.

［13］ WU J G， XIA A Q， CHEN C Y， et al .. Adsorptionthermodynamics and dynamics of three typical dyes onto bioadsorbentspent substrate of Pleurotus eryngii [J]. Int. J.Environ. Res. Public Health， 2019， 16（5）： 679-689.

［14］ ECONOMOU C N， PHILIPPOUSSIS A N， DIAMANTOPOULOUP A. Spent mushroom substrate for a second cultivation cycleof Pleurotus mushrooms and dephenolization of agro-industrialwastewaters [J/OL]. FEMS Microbiol. Lett.， 2020， 367（8）：fnaa060 [2023-02-16]. https：//doi.org/10.1093/femsle/fnaa060.

［15］ FUJITA R， YOKONO M， UBE N， et al .. Suppression ofAlternaria brassicicola infection by volatile compounds fromspent mushroom substrates [J]. J. Biosci. Bioeng.， 2021， 132（1）：25-32.

［16］ INAGAKI H， YAMAGUCHI A. Spent substrate of shiitake（Lentinula edodes） inhibits symptoms of anthracnose incucumber [J]. Mushroom Sci. Biotechnol.， 2009， 17（3）： 113-115.

［17］ KANG D S， MIN K J， KWAK A M， et al .. Defense responseand suppression of Phytophthora blight disease of pepper bywater extract from spent mushroom substrate of Lentinulaedodes [J]. Plant Pathol. J.， 2017， 33（3）： 264-275.

［18］ 張國廣，王麗霞，占凌云，等.杏鮑菇菌糠提取液對4種食用菌菌絲生長影響[J].中國食用菌， 2009，28（5）： 19-20，23.

ZHANG G G， WANG L X， ZHAN L Y， et al .. Effects of spentsubstrate of Pleurotus eryngii on the mycelia growth of fouredible fungi [J]. Edible Fungi China， 2009， 28（5）： 19-20，23.

［19］ RAO W H， ZHANG D Y， GUAN X， et al .. Recycling of spentmushroom substrate biowaste as an anti-UV agent for Bacillusthuringiensis [J/OL]. Sustainable Chem. Pharm.， 2022， 30：100811 [2023-02-16]. https：//doi.org/10.1016/j.scp.2022.100811.

［20］ 張頂洋，邱賽飛，饒文華，等.不同形貌納米氫氧化鎂對芒果葉斑病原真菌的抑制作用[J]. 中國農業科技導報， 2022，24 （3）： 140-147.

ZHANG D Y， QIU S F， RAO W H， et al .. Inhibitory effect ofNano-Mg（OH）2 with different morphology on pathogen mangophoma leaf spot [J]. J. Agric. Sci. Technol.， 2022，24（3）： 140-147.

［21］ 陳賽黎. 納米二氧化硅對馬鈴薯晚疫病菌的抗菌機制[D].福州： 福建農林大學， 2019.

CHEN S L. Antibacterial mechanism of nano-silica againstPhytophthora infestans [D]. Fuzhou： Fujian Agriculture andForestry University， 2019.

［22］ 張荷花，蔣繼志，張紅霞，等.拮抗菌W-7抑制馬鈴薯致病疫霉機理初步研究[J].中國植保導刊， 2019，39（9）： 5-10， 20.

ZHANG H H， JIANG J Z， ZHANG H X， et al .. Preliminarystudy on mechanism of inhibition effect of W-7 strain onPhytophthora infestens [J]. China Plant Prot.， 2019， 39（9）： 5-10， 20.

［23］ ISHIHARA A， ANDO K， YOSHIOKA A， et al .. Induction ofdefense responses by extracts of spent mushroom substrates inrice [J]. J. Pestic. Sci.， 2019， 44（2）： 89-96.

［24］ ISHIHARA A， GOTO N， KIKKAWA M， et al .. Identification ofantifungal compounds in the spent mushroom substrate ofLentinula edodes [J]. J. Pestic. Sci.， 2018， 43（2）： 108-113.

［25］ 劉紫英，袁斌，肖花美，等.馬鈴薯致病疫霉及其拮抗菌的篩選與鑒定[J].浙江農業學報， 2020，32（5）： 840-848.

LIU Z Y， YUAN B， XIAO H M， et al .. Screening， identificationof Phytophthora infestans and its antagonistic bacterial strain [J].Acta Agric. Zhejiangensis， 2020，32（5）： 840-848.

［26］ 蔣繼志，李莎，王會仙. 3株致病疫霉拮抗放線菌復合發酵及其抑制機理[J]. 河北大學學報（自然科學版）， 2010，30（1）：78-82.

JIANG J Z， LI S， WANG H X. Culture condition optimizationof three actinomyces mixed fermentation against Phytophthorainfestans and mechanism [J]. J. Hebei Univ. （Nat. Sci.）， 2010，30（1）： 78-82.

［27］ 郭會婧. 幾種微生物源提取物抑制致病疫霉及其機理的研究[D].保定： 河北大學，2008.

GUO H J. Inhibition mechanisms of extracts from microorganismsagainst Phytophthora infestans [D]. Baoding： Hebei University，2008.

［28］ 冉茂良，高環，尹杰，等. 氧化應激與DNA損傷[J].動物營養學報， 2013，25（10）： 2238-2245.

RAN M L， GAO H， YIN J， et al .. Oxidative stress and DNAinjury [J]. Chin. J. Anim. Nutr.， 2013，25（10）： 2238-2245.

［29］ 陳立亞，于寶珠，趙慧芳. Zeta電位及其在藥學分散體系研究中的應用[J].藥物分析雜志， 2006，26（2）： 281-285.

CHEN L Y， YU B Z， ZHAO H F. Zeta potential and its application in the study of pharmaceutical dispersion systems [J].Chin. J. Pharm. Anal.， 2006，26（2）： 281-285.

［30］ 甘瑾， 馬李一， 張弘， 等. 芒果采后病原菌的分離及天然抗菌物質的篩選[J]. 食品科學， 2008，29（10）： 414-417.

GAN J， MA L Y， ZHANG H， et al .. Isolation of mangopostharvest pathogenic fungi and screening of natural plantantimicrobial substances against them [J]. Food Sci.， 2008， 29（10）：414-417.

［31］ 黃小云，沈華偉，韓海東，等.食用菌產業副產物資源化循環利用模式研究進展與對策建議[J]. 中國農業科技導報，2019，21（10）： 125-132.

HUANG X Y， SHEN H W， HAN H D， et al .. Researchprogress and countermeasures on recycling utilization mode ofedible fungi industry by-products [J]. J. Agric. Sci. Technol.，2019，21（10）： 125-132.

［32］ 周晚來，楊睿，張冬冬，等.菌渣基質化利用中存在的問題與應對策略探討[J].中國農業科技導報， 2021，23（10）： 117-123.

ZHOU W L， YANG R， ZHANG D D， et al .. Problems andcountermeasures in substrate utilization of spent mushroomsubstrates [J]. J. Agric. Sci. Technol.， 2021，23（10）： 117-123.

［33］ PARADA R Y， MURAKAMI S， SHIMOMURA N， et al ..Suppression of fungal and bacterial diseases of cucumberplants by using the spent mushroom substrate of Lyophyllumdecastes and Pleurotus eryngii [J]. J. Phytopathol.， 2012， 160（7-8）：390-396.

［34］ 張博，馬立國，張悅麗，等.幾種生物制劑對致病疫霉的毒力測定[J].農藥， 2017，56（2）： 138-140.

ZHANG B， MA L G， ZHANG Y L， et al .. Toxicity tests ofSseveral biological agents in vitro to Phytophthora infestansfrom potatoes [J]. Agrochemicals， 2017， 56（2）： 138-140.

［35］ 任興波，武志華，崔海辰，等.致病疫霉拮抗菌株YR-7的分離鑒定及其活性物質[J].微生物學通報， 2016，43（7）： 1513-1523.

REN X B， WU Z H， CUI H C， et al .. Isolation andidentification of the strain YR-7 against Phytophthora infestansand study on its antibiotic substances [J]. Microbiol. China，2016，43（7）： 1513-1523.

［36］ PHAN C W， SABARATNAM V. Potential uses of spentmushroom substrate and its associated lignocellulosic enzymes [J].Appl. Microbiol. Biot.， 2012， 96（4）： 863-873.

（責任編輯：胡立霞）

基金項目：國家重點研發計劃項目（2022YFD1400700）；福建農林大學茶樹綠色栽培與生態茶園建設研究項目 （K1520007A03）；福建農林大學科技發展資金項目（ KFB23012）。