長江刀鱭GHRH基因遺傳多態(tài)性及其與生長性狀的關聯(lián)分析

于愛清 施永海 徐嘉波 劉永士 鄧平平

摘 要 生長激素釋放激素（ GHRH）是魚類生長激素合成和分泌的重要調控因子，對細胞的生長、增殖和分化極為重要。基于長江刀鱭轉錄組測序數(shù)據(jù)，利用基因克隆和PCR擴增技術，獲得其? GHRH基因的cDNA全長和基因組DNA序列，并開展基因遺傳多態(tài)性與生長性狀的關聯(lián)性研究，為其分子標記輔助育種提供技術支持。結果顯示：長江刀鱭? GHRH基因cDNA全長1 329 bp，由5′-UTR（300 bp）、ORF（465 bp）和3′-UTR（564 bp）組成，推導的蛋白序列由154個氨基酸組成，具有一個信號肽和GLUCA結構域；該基因的DNA序列長2 983 bp，由4個內含子和5個外顯子組成，經(jīng)篩選，在第1、2內含子和第3外顯子上分別篩選到9、2和1個SNP位點；12個突變位點共36種基因型，分別與100尾長江刀鱭的體質量、體長和體高性狀進行關聯(lián)分析，獲得2個與其生長性狀顯著相關的位點（g.1636C>T和g.1882A>C）（P<0.05），CC基因型均是優(yōu)勢基因型；利用12個SNP位點分析刀鱭養(yǎng)殖群體的遺傳多樣性，獲得的觀測雜合度（HO）、期望雜合度（HE）和多態(tài)信息含量（PIC）分別為0.270～0.620、0.338～0.490和0.281～0.370；哈迪-溫伯格平衡（HWE）檢測結果顯示，12個SNP位點中有4個位點顯著偏離哈迪-溫伯格平衡（P<0.05）。結果表明，長江刀鱭? GHRH基因上位點g.1636C>T和g.1882A>C可以作為優(yōu)選長江刀鱭繁育親本的重要候選分子標記。

關鍵詞 長江刀鱭；? GHRH；單核苷酸多態(tài)性；生長性狀；關聯(lián)分析

刀鱭（Coilia ectenes）隸屬于鯡形目（Clupeiformes）、鳀科（Engraulidae）、鱭屬（Coilia），在中國各大水系均能發(fā)現(xiàn)其蹤跡，其中以長江流域產(chǎn)量最高，最負盛名，因其魚體豐腴肥滿，肉鮮味美，曾與鰣魚、河豚并稱“長江三鮮”，深受國內外消費者的青睞［1］。近年來，由于酷捕濫漁，棲息環(huán)境的污染、水文條件的改變、生態(tài)環(huán)境的惡化及海岸工程建設等諸多因素，其自然種質資源急劇衰退，每年的漁獲量波動很大，有的年份甚至不能形成優(yōu)勢種群［2］，岌岌可危。隨著長江“十年禁捕”政策的實施及長江刀鱭人工繁育、養(yǎng)殖技術的日趨成熟，其自然種質資源衰退的現(xiàn)狀獲得了緩解，但是在其養(yǎng)殖群體中仍然存在個體表型差異大、生長速度變慢、商品魚規(guī)格小以及新品種匱乏等問題，嚴重影響了其養(yǎng)殖產(chǎn)業(yè)的推廣，亟需對長江刀鱭生長性狀進行遺傳改良。

水產(chǎn)動物的生長性狀是受多種環(huán)境因素和遺傳因素共同影響的，而遺傳因素往往能夠反應出不同個體/群體種質差異，這亦是本研究進行分子標記輔助長江刀鱭生長性狀遺傳改良的重要理論基礎。分子標記輔助育種是利用分子標記與目標性狀基因緊密連鎖的特點，對具有性狀優(yōu)勢的等位基因或基因型的個體進行分子標記輔助選擇育種，是將分子生物學和遺傳育種有機結合的新品種選育技術［3-5］，不僅提高了選擇的準確性，降低了育種成本，而且加快了良種的選育進程，特別適用于繁育周期比較長的水產(chǎn)經(jīng)濟動物的良種選育。鑒于目前長江刀鱭分子標記輔助育種尚處于初始階段，篩選更多與其生長性狀相關的重要SNP標記，對其新品系的選育研究極為重要。

生長激素釋放激素（growth hormone-releasing hormone，GHRH），是由脊椎動物下丘腦分泌的一種能夠刺激動物腦垂體細胞分泌生長激素（growth hormone，GH）的多肽類物質，具有免疫調控、睡眠調控、生長發(fā)育調控及代謝調控等生物學功能［6-7］。禽畜類? GHRH基因的啟動子區(qū)域、編碼區(qū)域及非翻譯區(qū)均存在與其生長速度、品質及脂肪含量等性狀密切相關的SNP位點，被作為禽畜類良種選育的重要候選基因。水產(chǎn)動物? GHRH基因多態(tài)性亦與其生長性狀存在顯著相關性，如北極紅點鮭（Salvelinus leucomaenis）? GHRH基因第4內含子區(qū)域［8］、半滑舌鰨（Cynoglossus semilaevis）? GHRH基因第3內含子區(qū)域［9］、草魚（Ctenopharyngodon idella）? GHRH基因第2，3，4內含子和第3外顯子區(qū)域［6］、斑點叉尾鮰（Ictalurus punctatus）? GHRH基因第4內含子區(qū)域［7］及紅鰭東方鲀（Takifugu rubripes）? GHRH基因外顯子區(qū)域［10］上均鑒定到了與其生長性狀顯著相關的SNP標記，并初步應用于相應水產(chǎn)動物的分子標記輔助育種實踐。而養(yǎng)殖長江刀鱭? GHRH基因多態(tài)性與生長性狀的相關性研究尚未見報道，亟需進行相關研究以加速其良種的培育進程。本研究通過對長江刀鱭? GHRH基因進行克隆、擴增和測序，開展基因遺傳多態(tài)性SNP位點的篩選、檢測及其與生長性狀的關聯(lián)分析，以期能夠為長江刀鱭的分子標記輔助育種提供理論參考。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

所用長江刀鱭均取自上海市水產(chǎn)研究所（上海市水產(chǎn)技術推廣站）奉賢科研基地于2017年獲得的長江刀鱭核心選育群體（F3）。隨機選取3尾二齡刀鱭置于冰上放置1～2 min，迅速將腦組織解剖分離，并用無菌DEPC水沖洗后，迅速放入液氮速凍30 min，再轉移至-80 ℃超低溫冰箱儲存，用于長江刀鱭? GHRH基因的cDNA全長克隆。隨機選取100尾同批次同池塘飼養(yǎng)二齡長江刀鱭，用游標卡尺和電子天平測得其平均體長為 （21.89 ± 4.51） cm、平均體高為（3.40±? 0.74） cm、平均體質量為（39.83±22.73） g，剪取部分尾鰭置于盛有95%乙醇的? 1.5 mL離心管中，分別編號后，置于-20 ℃冰柜中保存，用于長江刀鱭? GHRH基因DNA序列擴增、SNP位點篩選及其遺傳多態(tài)性與生長性狀的關聯(lián)分析。隨機選取大規(guī)格雌性刀鱭（99.18 g±12.81 g）、小規(guī)格雌性刀鱭（16.10 g±0.26 g）、大規(guī)格雄性刀鱭（59.75 g±3.19 g）和小規(guī)格雄性刀鱭（18.90 g±0.44 g）各3尾，置于冰上放置1～2 min，迅速將腦組織解剖分離，并用無菌DEPC水沖洗后，置入液氮速凍30 min，再轉移至-80? ℃超低溫冰箱儲存，用于長江刀鱭? GHRH基因的相對表達量變化研究。

1.2 總RNA和DNA的提取

長江刀鱭腦組織總RNA的提取均參照Trizol Reagent Kit（RNA Extraction Kit，Invitrogen）試劑盒說明書進行。獲得的總RNA，溶解于DEPC水后，利用NanoVue Plus紫外分光光度計測定其濃度和純度，并利用1.5%瓊脂糖凝膠電泳檢測質量。將質量較好的RNA（28S和18S條帶清晰，且28S和18S灰度比約為2∶1、無拖尾現(xiàn)象、點樣孔的附近無殘留，表明RNA無降解，質量可靠）置于-80 ℃超低溫冰箱保存，備用。

長江刀鱭基因組DNA的提?。好總€樣品取25 mg左右的鰭條組織，經(jīng)滅菌ddH2O清洗后，剪碎并置于1.5 mL離心管中，參照天根生化科技（北京）有限公司的海洋動物組織基因組DNA提取試劑盒（DP324-03）說明書，提取樣品基因組DNA；利用瓊脂糖凝膠電泳和NanoVue Plus紫外可見分光光度計檢測樣本DNA的質量和濃度；經(jīng)1.5%瓊脂糖凝膠電泳檢測，顯示無拖尾降解現(xiàn)象、條帶清晰，且OD260 nm/OD280 nm的比值在1.8～2.0的DNA樣品，稀釋到50 ng/μL后，置于-20 ℃冰柜中保存，備用。

1.3 長江刀鱭? GHRH基因cDNA全長克隆和表達分析

1.3.1 cDNA第一鏈的合成 長江刀鱭腦組織所提取的總RNA經(jīng)測定質量和濃度后，按照PrimeScriptTM Real-time PCR Kit試劑盒（Takara公司，北京）的說明書進行反轉錄反應，獲得用于長江刀鱭cDNA序列拼接所需的cDNA模板，利用NanoVue Plus紫外可見分光光度計檢測反轉錄好的cDNA模板濃度，用RNase free water將終濃度同一調整為200 ng/μL后，置于-20 ℃冰箱保存，備用。

1.3.2 5′-RACE和3′-RACE cDNA模板的合成 參照SMARTerTM? RACE cDNA Amplification Kit（Takara公司，北京）說明書，獲得長江刀鱭腦組織3′-和5′-末端的cDNA模板，然后利用NanoVue Plus紫外可見分光光度計檢測反轉錄好的cDNA模板濃度，最后用Tricine-EDTA Bufffer將該模板稀釋至500 ng/μL，置于-20? ℃保存，備用。

1.3.3 長江刀鱭? GHRH基因cDNA全長的克隆 基于上海市水產(chǎn)研究所奉賢科研基地課題組長江刀鱭轉錄組數(shù)據(jù)，獲得CeGHRH的部分? cDNA序列，并利用Primer Premier 5.0 軟件分別設計基因特異性引物（CeGHRH-QC）（表1），對CeGHRH的部分cDNA序列拼接質量進行驗證?；跍y序驗證后的序列，設計特異性RACE引物（5′GSP-1～3和3′GSP-1～3），以反轉錄合成的長江刀鱭腦組織5′-cDNA或3′-cDNA為模板，利用SAMRT-RACE技術獲得CeGHRH的cDNA全長。PCR反應體系和反應條件均參照試劑盒說明書進行，PCR產(chǎn)物經(jīng)1.5%瓊脂糖凝膠電泳檢測后，將目的條帶割膠純化，并進行T-A克隆測序，測序菌液經(jīng)菌落PCR和瓊脂糖凝膠電泳檢測后，交由上海生物工程技術有限公司測序（測序所用引物為23-Mer和24-Mer）。

1.3.4 實時熒光定量PCR 以大規(guī)格/小規(guī)格的雌、雄長江刀鱭腦組織cDNA為模板，利用實時熒光定量PCR（qRT-PCR）技術檢測長江刀鱭? GHRH基因的表達差異情況?；陂L江刀鱭? GHRH基因的cDNA序列設計qRT-PCR引物（表1），利用天根生化科技（北京）有限公司生產(chǎn)的Talent熒光定量檢測試劑盒（SYBR Green）在StepOne Plus熒光定量PCR儀（ABI，美國）上進行qRT-PCR反應。反應體系和反應條件參照該試劑盒說明書，每個樣品做3次技術重復，以長江刀鱭β-actin為內參基因，利用 2-ΔΔCt法計算長江刀鱭? GHRH基因的相對表達量。

1.4? CeGHRH基因組DNA的擴增和SNP位點篩選

基于長江刀鱭? GHRH基因的cDNA序列，利用Primer Premier 5.0軟件設計基因特異性PCR擴增引物（表1），其中CeGHRH-FL是參照大西洋鯡? GHRH基因內含子和外顯子的相對位置設計而成，用于擴增? CeGHRH基因的第1內含子、第2內含子和第3內含子序列；CeGHRH-SC則以? CeGHRH基因的DNA序列為基礎設計而成，然后以具有極端生長表型的不同刀鱭（即體質量最大的10尾魚和最小的10尾魚）的DNA樣本為模板，利用直接測序法篩選長江刀鱭? GHRH基因上的多態(tài)性SNP位點。

1.5?? CeGHRH基因多態(tài)性與生長性狀的相關性分析

基于初步的多態(tài)性SNP位點篩選結果，前8個SNP位點由于間隔較近而不適合應用SnaPshot方法進行基因分型，因此采取直接測序的方法對100尾長江刀鱭進行基因分型；后面4個SNP位點則委托上海捷瑞生物工程有限公司利用SnaPshot基因分型技術對100尾長江刀鱭進行基因分型，基于基因分型結果，利用SPSS 20.0軟件中的一般線性模型對不同SNP位點的不同基因型與生長性狀進行相關性分析。

1.6 群體遺傳分析和連鎖不平衡分析

基于12個SNP位點的基因分型結果，計算不同位點不同基因型的基因頻率和基因型頻率，利用GenAlEx 6.5軟件［11］計算長江刀鱭養(yǎng)殖群體的有效等位基因數(shù)（effective number of alles，NE）、觀測雜合度（observed heterozygosity，HO）和期望雜合度（expected heterozygosity，HE）等遺傳多樣性參數(shù)，并對12個SNP位點進行哈迪-溫伯格平衡（Hardy-Weinberg equilibrium，HWE）檢驗；利用PIC_CALC軟件計算試驗群體中每個SNP位點的多態(tài)信息含量（polymorphic information content，PIC）；利用Haploview 4.2軟件［12］對12個SNP位點進行連鎖不平衡分析。

2 結果與分析

2.1 長江刀鱭? GHRH基因序列特征分析

長江刀鱭? GHRH基因cDNA全長1 329 bp，開放式閱讀框（Open Reading Frame，ORF）全長465 bp，編碼154個氨基酸（主要由1個信號肽和GLUCA結構域組成），其中5′-非編碼區(qū)主要由300個核苷酸組成，3′-非編碼區(qū)主要由564個核苷酸組成（圖1）。利用PCR擴增測序技術獲得? CeGHRH基因全長序列，長度為2 983 bp，由5個外顯子和4個內含子組成（圖2）。

2.2 長江刀鱭? GHRH基因表達分析

在雌性長江刀鱭中，大規(guī)格長江刀鱭? GHRH基因的mRNA表達量是小規(guī)格的2.04倍；在雄性刀鱭中，大規(guī)格長江刀鱭? GHRH基因的mRNA表達量是小規(guī)格長江刀鱭的2.24倍（圖3），表明長江刀鱭? GHRH基因對于長江刀鱭雌雄群體的生長表型均具有正向調控作用。

2.3 長江刀鱭? GHRH基因多態(tài)性與生長性狀的相關性分析

以20尾具有極端生長表型長江刀鱭的DNA為材料，利用直接測序法在長江刀鱭? GHRH基因上共檢測到12個SNP突變位點（具體位置見圖2），其中第1內含子上9個（g.552A>G、g.562A>T、g.592C>G、g.711A>T、g.748C>T、g.865G>T、g.875C>G、g.966A>T和g.1636C>T）；第2內含子上2個（g.1882A>C和g.1937C>T）；第3外顯子上1個（g.2092A>G）。

長江刀鱭? GHRH基因上的12個突變位點共36種基因型，分別與100尾長江刀鱭的生長性狀（體質量、體長和體高）進行關聯(lián)分析，鑒定到2個與長江刀鱭生長性狀顯著相關的SNP位點（表2）。從中可以看出，位點g.1636C>T 3種基因型個體的體質量、體長和體高的比較結果一致，均是CC>CT>TT，其中CC型個體的體質量、體長和體高性狀高于CT型的，顯著高于TT型的（P<0.05）；位點g.1882A>C的3種基因型個體的體質量、體長和體高的比較結果基本一致，均是CC>AC>AA，CC型顯著高于其他兩種基因型（P<0.05）。

2.4 長江刀鱭養(yǎng)殖群體的遺傳多樣性分析

基于長江刀鱭? GHRH基因上的12個突變位點對長江刀鱭養(yǎng)殖群體的遺傳多樣性進行評估，結果顯示（表3），有效等位基因數(shù)（NE）為? 1.510～1.962，觀測雜合度（HO）和期望雜合度（HE）分別為0.270～0.620和0.338～0.490，多態(tài)信息含量（PIC）為0.281～0.370，12個SNP位點均屬于中度多態(tài)（0.25T、g.875C>G、g.966A>T和g.2092A>G）均顯著偏離哈迪-溫伯格平衡（P<0.05），其余位點則符合哈迪-溫伯格平衡（P>0.05）。

2.5 連鎖不平衡分析

利用Haploview 4.2軟件對長江刀鱭? GHRH基因上的12個突變位點進行連鎖不平衡分析（圖4），結果顯示，位點g.552A>G、g.562A>T、g.592C>G、g.711A>T和g.748C>T處于完全連鎖狀態(tài)，組成Block1，與其他位點處于彼此獨立的狀態(tài)；位點g.865G>T、g.875C>G和g.966A>T處于完全連鎖狀態(tài)，組成Block2，與位點g.1636C>T處于非完全連鎖狀態(tài)（D′0.33），與位點g.1882A>C處于非完全連鎖狀態(tài)（D′>0.8但r2<0.33），位點g.1636C>T和位點g.1882A>C處于非完全連鎖狀態(tài)（D′>0.8但r2<0.33），其他兩兩位點間處于彼此獨立的狀態(tài)。

3 討? 論

GHRH作為GH/IGF生長軸信號通路中的重要成員，能夠與生長激素釋放激素受體結合，通過腺苷酸環(huán)化酶/cAMP/蛋白激酶信號通路和NO/NO合成酶信號通路促進生長激素的合成和分泌［7］，進而影響動物的生長和發(fā)育。該基因上鑒定到的突變位點，往往與家養(yǎng)的產(chǎn)奶率［13］、屠宰率［14］、日增重和脂肪厚度［15］和生長性狀［16］等經(jīng)濟性狀顯著相關，而被用于相關經(jīng)濟性狀的遺傳改良研究。魚類? GHRH基因的研究從前期的基因克隆、表達模式研究［17-19］，逐漸擴展到基因多態(tài)性與生長性狀關聯(lián)分析研究［6-7，10］，并開展了相關魚類生長性狀遺傳改良的育種實踐。在長江刀鱭中，基因多態(tài)性與生長性狀的相關性研究報道相對較少，因此，本研究中首次發(fā)現(xiàn)了長江刀鱭? GHRH基因突變位點與生長性狀的相關性。

3.1 長江刀鱭? GHRH基因多態(tài)性對其生長性狀的影響

本研究從長江刀鱭? GHRH基因上總共鑒定到12個突變位點，其中2個位點（g.1636C>T和g.1882A>C）與其生長性狀顯著相關。位點g.1636C>T中CC基因型個體的體長、體高和體質量性狀均顯著高于TT基因型個體（PC中CC基因型個體的體質量、體長和體高性狀均顯著高于其他兩種基因型（P<0.05），可以作為長江刀鱭分子標記輔助育種的重要參考位點。研究發(fā)現(xiàn)，這2個SNP位點均位于長江刀鱭? GHRH基因內含子，雖然內含子不具有編碼氨基酸的能力，但是發(fā)生在其他生長相關基因內含子上的突變位點亦導致水產(chǎn)動物的生產(chǎn)性狀發(fā)生顯著差異［20］，如斑點叉尾鮰（I.punctatus）MSTN基因第2內含子上的1個突變位點與其體質量、體長性狀顯著相關（P<0.05）［21］；長江刀鱭（C.ectenes）MSTN基因第1內含子上的1個突變位點與其體長、體高和體質量性狀顯著相關（P

3.2 長江刀鱭? GHRH基因上SNPs位點的連鎖不平衡分析

連鎖不平衡是指同一染色體上等位基因間廣泛存在的非隨機組合現(xiàn)象［6，23］。連鎖不平衡的強度經(jīng)常用D′（表示重組程度）和r2（表示重組和突變的程度）來評估，當兩個位點的D′>0.8時，表明兩個位點處于強連鎖不平衡狀態(tài)，r2>0.33，表明兩個位點緊密連鎖；當同時滿足D′>0.8且r2>0.33時，表明兩位點處于完全連鎖狀態(tài)，經(jīng)常會作為一個整體進行遺傳［6，24-25］。在本研究中，位點g.552A>G、g.562A>T、g.592C>G、? g.711A>T和g.748C>T處于完全連鎖狀態(tài)（D′>0.8且r2>0.33），組成Block1，這5個位點作為一個整體進行遺傳，與其他位點屬于獨立遺傳關系；位點g.865G>T、g.875C>G和? g.966A>T處于完全連鎖狀態(tài)（D′>0.8且r2>0.33），組成Block2，這3個位點作為一個整體進行遺傳，而與其它位點處于非完全連鎖狀態(tài)? （D′>0.8但r2<0.33）或彼此獨立狀態(tài)（D′T和? g.1882A>C）處于非完全連鎖狀態(tài)（D′>0.8但r2<0.33），因此綜合這2個位點的基因分型結果，篩選出具有優(yōu)異基因型的繁育親本，對于長江刀鱭良種的培育具有重要的參考價值。

3.3? 長江刀鱭? GHRH基因座的群體遺傳變異分析

雜合度（HO和HE）和多態(tài)性信息含量（PIC）是衡量群體遺傳變異程度的重要參考指標［26］，對于長江刀鱭養(yǎng)殖群體的種質資源評估具有重要作用。在本研究中，12個SNPs位點對于長江刀鱭養(yǎng)殖群體的遺傳多樣性評估結果顯示，觀測雜合度（HO）、期望雜合度（HE）和多態(tài)信息含量（PIC）分別為0.270～0.620、0.338～? 0.490和0.281～0.370，表明長江刀鱭養(yǎng)殖群體仍然具有豐富的遺傳變異和較好的種質開發(fā)潛力?；贐otstein等［27］提出的多態(tài)信息含量（PIC）的判斷標準，當PIC<0.25、0.250.5時，分別代表該位點具有低度、中度、高度多態(tài)性。在本研究中，12個SNP位點均屬于中度多態(tài)? （0.25

4 結? 論

長江刀鱭? GHRH基因上共檢測到12個SNP位點，具有較豐富的突變和遺傳多態(tài)性，在其第1、2內含子上成功鑒定到2個與其生長性狀顯著相關的SNP位點（g.1636C>T和g.1882A>C），對長江刀鱭的體長、體高和體質量均有較為顯著的影響，且CC基因型均是優(yōu)勢基因型，可以用來輔助長江刀鱭生長性狀的遺傳改良；其他SNP位點雖然與長江刀鱭的生長性狀沒有顯著的相關性，但是可以用于長江刀鱭養(yǎng)殖群體的種質資源評估。

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Growth Hormone Releasing Hormone （GHRH） Gene PolymorphismsAssociated with Growth Traits in Coilia ectenes

YU Aiqing，SHI Yonghai，XU Jiabo，LIU Yongshi and DENG Pingping

（Shanghai Fisheries Research Institute， Shanghai Fisheries Technology Extension Station， Shanghai 200433，China）

Abstract

To assess the association of polymorphisms of?? GHRH? gene with the growth-related traits in Coilia ectenes， we cloned the cDNA full-length sequence and DNA sequence of?? GHRH? gene， and further identified and validated single nucleotide polymorphisms （SNPs） in this gene . Based on the transcriptome data of C.ectenes， the cDNA full-length sequence and DNA sequence of?? GHRH? gene were obtained by gene cloning technology. SNPs in?? GHRH? gene were identified and genotyped in 100 individuals by DNA direct sequencing and SnaPshot method， respectively. Least squares method was used for association analysis between SNPs and growth traits in C.ectenes. Total cDNA length of?? GHRH? gene of C.ectenes was 1? 329 bp， containing a 5′-UTR of 300 bp， 3′-UTR of 564 bp and an open reading frame of 465 bp. The precursor peptide of GHRH contained 154 amino acids （aa），which included a signal peptide of 19 aa and a GLUCA domain of 27 aa. The genomic DNA of?? GHRH? gene was?? 2 983 bp in length and contained four introns and five exons. Twelve polymorphic sites （SNPs） were identified in intron 1 （9）， intron 2 （2） and exon 3 （1）. Two SNPs of g.1636C>T in intron 1 and g.1882A>C in intron 2 were significantly associated with the body length， body height and body? mass? traits （P<0.05）， while the other sites were not significantly associated with all three growth traits （P>0.05）. Population genetic analysis of cultured population of C.ectenes showed that， among these twelve SNPs， the observed heterozygosity （HO）， expected heterozygosity （HE） and polymorphism information content （PIC） were 0.270-0.620， 0.338-0.490 and 0.281-0.370， respectively. This study provides useful information for further studies on genetic evaluation of germplasm resources and marker assisted selection （MAS） in C.ectenes.

Key words Coilia ectenes；GHRH；Growth trait；Single nucleotide polymorphism；Association analysis

Received? 2022-06-28??? Returned 2022-09-11

Foundation item The Natural Science Foundation of Shanghai （No.19ZR1477900）；Shanghai Agriculture Applied Technology Development? Program，China[Grant No.G（2016）-6-2-2].

First author YU Aiqing， male， senior engineer. Research area：aquaculture， aquatic animal genetic and breeding. E-mail：aiqingyu0125@163.com

Corresponding?? author SHI Yonghai， male， research fellow. Research area：aquaculture， water environment monitoring and aquatic animal reproductive biology. E-mail：yonghais@163.com

（責任編輯：顧玉蘭 Responsible editor：GU Yulan）