脂肪間充質干細胞對巴馬小型豬自體皮膚移植愈合過程的影響

摘 要：擬應用脂肪間充質干細胞（adipose derived mesenchymal stem cells，ADSCs）干預小型豬自體皮膚移植實驗動物模型，觀察其對自體皮膚移植愈合過程中的作用效果。對9頭小型豬建立自體皮膚移植動物模型，將小型豬隨機分為3組：模型組（Model）、磷酸鹽緩沖液組（PBS）、脂肪間充質干細胞組（ADSCs）。各組分別于術前，術后7、14、21和28d，采集血液和皮膚組織樣本，并觀察、拍照、記錄移植皮片和周圍組織臨床變化情況。通過對移植皮片表觀檢查、病理組織學檢測，血常規以及血清生化檢測，移植皮片組織氧化應激、炎癥、再生相關指標檢測及血流恢復情況，綜合評價ADSCs對小型豬自體皮膚移植創口愈合的影響。臨床觀察發現，術后ADSCs組皮片恢復速度優于其他兩組，在術后28d，ADSCs組基本恢復正常皮膚狀態。在氧化應激方面，ADSCs組SOD、GSH含量顯著升高（0.01＜Plt;0.05），MDA顯著下降（0.01＜Plt;0.05）。在炎癥方面，ADSCs組顯著降低TNF-α、IL-1β含量，IL-10在術后7、14d極顯著升高（P＜0.01）。在皮膚組織再生方面，ADSCs組VEGF、bFGF、TGFβ3和CD31的表達量顯著上升（0.01＜P＜0.05）。在血流恢復方面，ADSCs在愈合過程中血流灌注百分比顯著高于其他兩組（0.01＜Plt;0.05）。綜上表明，在小型豬自體皮膚移植動物模型中，ADSCs能夠加速皮膚組織病理損傷的恢復，降低氧化應激反應及炎癥反應，促進皮膚組織再生，血管新生。表明ADSCs具有抗氧化、抗炎和促進組織再生的功能對小型豬自體皮膚移植具有良好的治療效果，本試驗為干細胞在自體皮膚移植和異體皮膚移植的臨床應用提供了實驗支撐和科學依據。

關鍵詞：小型豬；脂肪間充質干細胞；自體皮膚移植；創傷愈合

中圖分類號：S857.132

文獻標志碼：A

文章編號：0366-6964（2024）07-3193-12

收稿日期：2023-10-07

基金項目：國家自然科學基金面上項目（31972757）

作者簡介：呂英光（1994-），男，河北邢臺人，碩士，主要從事獸醫外科學研究，E-mail：957116947@qq.com

*通信作者：王洪斌，主要從事臨床獸醫學研究，E-mail：hbwang1940@neau.edu.cn

The Effect of Adipose Mesenchymal Stem Cells on the Healing Process of Autologous

Skin Transplantation in Bama Miniature Pigs

LüYingguang^1，2，JIAOGuangming^1，2，SANGJinfang^1，2，KOUZhipeng^1，2，LIUTao^1，2，

WANGYue^1，2，LUXiangyu^1，2，PIAOChenxi^1，2，MAYajun^1，2，

ZHANGJiantao^1，2，WANGHongbin^1，2*

（1.College of Veterinary Medicine，Northeast Agricultural University，Harbin150030，

China; 2.Heilongjiang Provincial Key Laboratory of Pathogenic Mechanism for

Animal Disease and Comparative Medicine，Harbin150030，China）

Abstract：This study aims to use adipose derived mesenchymal stem cells（ADSCs）to intervene in an experimental animal model of autologous skin transplantation in small pigs，and observe their effects on the healing process of autologous skin transplantation.The animal model of autologous skin transplantation of9miniature pigs was established，and the miniature pigs were randomly divided into3groups：model group（Model），phosphate buffer group（PBS），and adipose mesenchymal stem cell group（ADSCs）.Blood and skin tissue samples were collected before surgery and7，14，21，and28days after surgery，respectively，and clinical changes of grafts and surrounding tissues were observed，photographed，and recorded.The effect of ADSCs on wound healing of mini pig autologous skin transplantation was comprehensively evaluated through skin graft apparent examination，histopathological examination，blood routine examination and serum biochemical examination，skin graft tissue oxidative stress，inflammation，regeneration and blood flow recovery.The researchers observed that the skin recovery speed of ADSCs group was better than that of the other two groups，and the ADSCs group basically returned to normal skin status28days after surgery.In terms of oxidative stress，SOD and GSH contents in ADSCs group were significantly increased（0.01lt;Plt;0.05），while MDA contents were significantly decreased（0.01lt;Plt;0.05）.In terms of inflammation，the contents of TNF-α and IL-1β in ADSCs group were significantly decreased，and IL-10was significantly increased on7and14days after surgery（Plt;0.01）.In terms of skin tissue regeneration，the expression levels of VEGF，bFGF，TGFβ3and CD31in ADSCs group were significantly increased（0.01lt;Plt;0.05）.In terms of blood flow recovery，the percentage of blood perfusion of ADSCs during healing was significantly higher than that of the other two groups（0.01lt;Plt;0.05）.To sum up，ADSCs can accelerate the recovery of skin tissue pathological damage，reduce oxidative stress reaction promote skin tissue regeneration and Angiogenesis in the miniature pig autologous skin transplantation animal model.The results indicated that ADSCs had the functions of anti-oxidation，anti-inflammation and promoting tissue regeneration，and had good therapeutic effect on autologous skin transplantation of miniature pigs.This experiment provided experimental support and scientific basis for the clinical application of stem cells in autologous skin transplantation and allogeneic skin transplantation.

Key words：small pigs; adipose mesenchymal stem cells; autologous skin transplantation; wound healing

*Corresponding author：WANG Hongbin，E-mail：hbwang1940@neau.edu.cn

皮膚是人體最大的器官，占身體總質量的16%，包括表皮、真皮和皮下組織，具有調節體溫，保護機體的作用，是抵御有害因素的第一道防線^[1]。當機體皮膚組織遭受創傷、燒傷或其他損傷時，皮膚的連續性和完整性遭到破壞，極易感染，嚴重時甚至危及生命^[2]。皮膚移植是指當外界因素導致皮膚組織產生大面積損傷時，通過外科手術從供體區切取適宜皮片移植到受體區，完全覆蓋損傷區域，重新建立血液循環的一種治療方式^[3]。因而，應用自體皮膚移植在短時間內對創面進行修復是救治此類皮膚損傷有效方法。目前，用于皮膚損傷研究的實驗動物集中于大鼠^[4]、小鼠^[5]、犬^[6]等實驗動物，這些動物雖然易于操作和研究，但是研究結果很難應用于人類臨床轉化，而巴馬小型豬與人類皮膚結構相似^[7]，同源性較高，是研究皮膚移植實驗動物的最優選擇。

ADSCs自2001年在一次抽脂手術中發現^[8]，時至今日已被廣泛研究使用。脂肪組織大量存在于動物機體，1g脂肪組織可以提取約5×10⁴～2×10⁵個干細胞，幾乎達到1 g骨髓中干細胞數量的2500倍^[9]。ADSCs是一種對組織損傷修復安全、有效的治療方法，在皮膚損傷發揮作用時，主要通過增殖分化和旁分泌作用^[10]，促進傷口恢復。目前已經證明ADSCs在多種疾病中具有較好療效^[11]。

本研究旨在通過建立巴馬小型豬自體皮膚移植動物模型，探究ADSCs對自體皮膚移植實驗動物模型的治療效果，為ADSCs在醫學、獸醫學、比較醫學領域皮膚治療的臨床應用提供依據。

1 材料與方法

1.1 實驗動物

本試驗經東北農業大學動物倫理委員會監督，選取9頭1歲齡廣西巴馬小型豬（30～40kg）。在整個試驗周期內，飼養管理條件一致。

1.2 儀器設備及實驗試劑

獸用便攜式多參數監護儀（深圳邁瑞生物醫療電子股份有限公司），動物呼吸麻醉機（美國SurgiVet公司），EPOCH連續波長酶標儀（美國BIOTEK基因有限公司），組織研磨儀（上海凈信實業發展有限公司），動物呼吸麻醉機（美國SurgiVet公司），激光多普勒血流檢測儀（英國Moor Instruments公司）。

丙泊酚乳狀注射液（西安力邦制藥有限公司），異氟烷（河北一品制藥有限公司），DMEM低糖培養基（美國Cytiva有限公司），紅細胞裂解液（北京索來寶生物科技有限公司），4%多聚甲醛試劑（武漢博士得生物有限公司），IL-10、TNF-α、IL-1β、VEGF、bFGF、TGFβ3、CD31（上海酶聯生物科技有限公司），SOD、GSH、MDA（南京建成生物工程研究所）。

1.3 小型豬脂肪間充質干細胞的分離培養

選擇臨床檢測健康的小型豬。麻醉后，于腹股溝處獲取脂肪組織，將脂肪塊剪碎至乳糜狀，倒入等體積的1%Ⅰ型膠原酶，放入37 ℃搖床中膠原酶消化50min，1500r·min^-1離心10min，離心后，將上層未消化的脂肪組織，倒入雙倍體積1%Ⅰ型膠原酶，進行二次消化。第一次消化液等比例加入完全培養基進行終止。二次消化完全，重復第一次消化操作。200目細胞篩網過濾，1500r·min^-1離心10min，獲得沉淀。加入紅細胞裂解液，充分混合，1500r·min^-1離心5min得到細胞沉淀，加入完全培養基，接種培養瓶中，標記，放于37 ℃，5%CO₂培養箱中。當細胞融合率達到70%～80%，按照1∶2～1∶3傳代，至3～5代細胞用于動物試驗。

1.4 試驗方法及手術處理

1.4.1 動物分組

將9頭小型豬隨機分為3組：模型（Model）組、無菌磷酸緩沖液（PBS）組和ADSCs干預（ADSCs）組。

1.4.2 動物試驗

Model組、PBS組和ADSCs組，建立動物模型時均術前隔離禁食24 h，禁水12 h。耳緣靜脈建立通路，麻醉，術前注射頭孢曲松鈉，標記手術部位，在背中線兩側距離背中線3cm處，兩側各標記4個16cm²的正方形手術位置，每個位置間隔4cm，二次消毒，鋪創巾，取下皮片，在生理鹽水中切除皮下組織和部分真皮層，進行對位互換移植，結節縫合。Model組僅進行自體皮膚移植，PBS組分四點于筋膜層注射2mL無菌PBS溶液，ADSCs組分四點于筋膜層注射溶于2mL無菌PBS溶液的5×10⁴個·cm^-2的ADSCs，均注射一次，注射后，在移植部位覆蓋凡士林紗布，無菌紗布加壓包扎固定，碘酊消毒，覆蓋大塊紗布，術后7d拆線，拆除紗布。

1.5 樣本采集與指標檢測

1.5.1 樣本采集

血液樣本采集分別于術前，術后7、14、21和28d通過前腔靜脈采集兩份血液樣本，一份收集于5mL不含EDTA采血管中，靜置20 min后，3500r·min^-1離心10min，抽取血清，分裝，標記，-80℃保存，用于血清生化檢測。另一份收集于含EDTA采血管中，用于血常規檢測。組織樣本采集，分別于術前，術后7、14、21和28d于移植皮片周圍愈合處和移植皮片中央分別采集樣本，一部分固定于4%多聚甲醛中，標記，用于后續HE染色和Masson染色。另一部分切成小塊放至凍存管中，標記，于液氮中迅速冷凍，置于-80 ℃冰箱保存，用于皮膚組織相關因子檢測。

1.5.2 血常規及血清生化檢測

采用五分類血常規白細胞（WBC），中性粒細胞（NE）和淋巴細胞（LY）按照血常規儀器說明操作步驟進行操作。生化儀檢測總蛋白（TP）、白蛋白（ALB）和球蛋白（GLO）。

1.5.3 ELISA試劑盒

炎癥相關因子TNF-α、IL-1β和IL-10，再生相關因子VEGF、TGFβ3、CD31和bFGF均按照ELISA試劑盒（上海酶聯生物科技有限公司）說明書的步驟操作。

1.5.4 氧化應激試劑盒

GSH（南京建成生物工程研究所）、MDA（南京建成生物工程研究所）及SOD（南京建成生物工程研究所）均按照相應說明書進行操作

1.5.5 組織學分析

通過HE染色和Masson染色觀察病理組織變化，將取樣皮膚放入4%多聚甲醛固定，待固定后石蠟包埋，用蘇木精伊紅和蘇木素染色。

1.5.6 血流恢復檢測

通過多普勒激光血流儀檢測移植皮片表面血流恢復情況（圖1）。

1.6 數據統計分析

使用Graphpad prism8軟件進行分析統計并繪制圖表，結果表示為“平均數±標準差（x-±s）”的形式。差異顯著性分析使用單因素方差分析方法（one-way ANOVA），各組之間采用多重比較，P＜0.05具有統計學意義。

2 結 果

2.1 自體皮膚移植皮片臨床觀察

圖2顯示，在動物試驗期間，小型豬自體皮膚移植部位未出現感染及再次損傷狀況。精神狀態良好，采食、飲水、運動、排便均正常。術后即刻皮片顏色表現為蒼白，有輕微炎癥反應。術后7d三組移植皮片均與移植原部位建立血液供應，邊緣結合緊密，且ADSCs組較Model組與PBS組顏色更紅潤。術后14d，Model組、PBS組移植皮片表面干燥，觸之堅硬，顏色為深褐色，ADSCs組皮片表面干燥，顏色紅潤，三組皮片被毛開始生長。術后21d，Model組、PBS組移植皮片邊緣愈合明顯，形成瘢痕，皮片表面覆蓋壞死的表皮組織。ADSCs組大面積痂皮脫落且有少量出血點。三組皮片被毛生長較為明顯。術后28d，ADSCs組表面痂皮完全脫落，皮片顏色正常，觸之與正常皮膚相比缺乏彈性。Model組、PBS組移植皮片有大范圍出血，部分移植皮片完成再生，顏色為暗紅色。三組皮片被毛生長明顯。

2.2 移植皮片病理學分析

如圖3～5所示，造模后7d，Model組和PBS組有大量炎癥細胞浸潤，血供建立緩慢，表皮層壞死。ADSCs組炎癥細胞浸潤輕微，生長狀態良好。三組移植皮片與周圍皮膚交界明顯，呈嵌入狀，炎性反應較強，新生成的膠原纖維排序不規則。

造模后14d，Model組和PBS組仍有大量炎性細胞浸潤，較7d時炎性細胞數量減少。ADSCs組皮膚組織與干燥壞死部分分層明顯，成纖維細胞和膠原纖維生長明顯。三組移植皮片與周圍皮膚交界處，炎性反應減弱，恢復明顯。

造模后21d，Model組和PBS組炎性細胞浸潤程度降低，成纖維細胞和膠原纖維開始生長。ADSCs組成纖維細胞和膠原纖維較其他兩組數量更多，排列更整齊，結構更密集，部分表皮脫落。三組皮膚交界處炎性反應降低，ADSCs組較Model組和PBS組炎性反應降低明顯。ADSCs組組織新生膠原纖維大量沉積，分布均勻有規律，Model組和PBS組膠原纖維生成較少且排序無規則呈彎曲狀。

造模后28d，Model組和PBS組干燥壞死表皮脫落，表面為大量增生組織，移植皮片缺少表皮層。ADSCs組皮膚組織結構完整，表皮與真皮之間存在大量新生膠原纖維。三組皮膚交界處愈合完整，炎性反應大幅度降低，愈合完好。ADSCs組膠原纖維由厚變薄，向正常狀態恢復，Model組和PBS組組織膠原纖維大量沉積，排序相對于ADSCs組比較混亂。

2.3 血常規檢測

分別采集3組小型豬的血液樣本，進行血液常規和生化指標檢測，各組之間均無顯著差異（表1、表2）。

2.4 氧化應激反應檢測

如圖6所示，三組皮片移植部位MDA含量隨著愈合時間延長，呈現先升高后降低的趨勢。術后7d，ADSCs組MDA含量低于Model組和PBS組，并與Model組和PBS組均呈顯著差異（0.01lt;Plt;0.05），術后14d三組皮膚組織MDA含量達到峰值，且ADSCs組MDA含量仍低于Model組和PBS組，并與Model組和PBS組呈顯著差異（0.01lt;Plt;0.05）。術后21、28d，三組之間均無明顯差異（Pgt;0.05），含量逐漸下降。

三組皮片移植部位SOD含量隨愈合時間延長，在術后7、14和21d時呈逐漸升高，28 d時變化趨于平緩。四個時間點，ADSCs組的SOD含量均高于Model組和PBS組，并呈顯著性差異（0.01lt;Plt;0.05）。四個時間點Model組和PBS組均無顯著性差異（Pgt;0.05）。

三組皮片移植部位GSH含量隨愈合時間延長，均呈逐漸升高的趨勢。四個時間ADSCs組的GSH含量均高于Model組和PBS組。ADSCs組在術后7和28d均與Model組和PBS組呈顯著性差異（0.01lt;Plt;0.05）。ADSCs組在14和21d均與Model組和PBS組呈極顯著性差異（Plt;0.01）。四個時間點Model組和PBS組均無顯著性差異（Pgt;0.05）。

2.5 炎癥反應檢測

如圖7所示，三組皮片移植部位TNF-α含量隨愈合時間延長，均呈逐漸降低的趨勢。四個時間ADSCs組的TNF-α含量均低于Model組和PBS組。在術后14d，ADSCs組均與Model組和PBS組呈顯著性差異（0.01lt;Plt;0.05）。ADSCs組在7、21和28d均與Model組和PBS組呈極顯著性差異（Plt;0.01）。四個時間點Model組和PBS組均無顯著性差異（Pgt;0.05）。三組皮片移植部位IL-1β含量隨愈合時間延長，均呈逐漸降低的趨勢。四個時間ADSCs組的IL-1β含量均低于Model組和PBS組。在術后7d，ADSCs組均與Model組和PBS組呈極顯著性差異（Plt;0.01）。ADSCs組在14、21和28d均與Model組和PBS組呈顯著性差異（0.01lt;Plt;0.05）。四個時間點Model組和PBS組均無顯著性差異（Pgt;0.05）。三組皮片移植部位IL-10含量隨愈合時間延長，均呈逐漸降低的趨勢。在術后7和14d，ADSCs組的IL-10含量均高于Model組和PBS組，并且ADSCs組均與Model組和PBS組呈極顯著性差異（Plt;0.01）。術后21和28 d，三組均無顯著性差異（Pgt;0.05）。

2.6 再生因子檢測

如圖8所示，三組皮片移植部位VEGF含量隨愈合時間延長，ADSCs組逐漸降低，Model組和PBS組先降低后平緩的趨勢。四個時間ADSCs組的VEGF含量均高于Model組和PBS組。在術后7d，ADSCs組與其他兩組均呈顯著性差異（0.01lt;Plt;0.05）。在術后14d，ADSCs組與其他兩組均呈極顯著性差異（Plt;0.01）。在術后21和28 d，三組之間均無顯著性差異（Pgt;0.05）。三組皮片移植部位TGFβ3含量隨愈合時間延長，三組呈現先升高后降低的趨勢。在術后7d，ADSCs組與PBS組呈極顯著性差異（Plt;0.01），ADSCs組與Model組呈顯著性差異（0.01lt;Plt;0.05）。在術后14和21d，ADSCs組均與PBS組和Model組呈極顯著性差異（Plt;0.01）。在術后28d，三組之間均無顯著性差異（Pgt;0.05）。四個時間ADSCs組的TGFβ3含量均高于Model組和PBS組。三組皮片移植部位CD31含量隨愈合時間延長，Model組和PBS組呈現先升高后降低的趨勢，ADSCs組呈現逐漸降低的趨勢。四個時間ADSCs組的CD31含量均高于Model組和PBS組。在術后7d，ADSCs組均與其他兩組呈顯著性差異（0.01lt;Plt;0.05）。在術后14、21和28d，三組之間均無顯著性差異（Pgt;0.05）。三組皮片移植部位bFGF含量隨愈合時間延長，三組均呈現先升高后降低的趨勢。四個時間ADSCs組的bFGF含量均高于Model組和PBS組。在術后7和14d，ADSCs組均與Model組和PBS組呈極顯著性差異（Plt;0.01）。在術后21和28d，ADSCs組均與Model組和PBS組呈顯著性差異（0.01lt;Plt;0.05）。四個時間點Model組和PBS組之間均無顯著性差異（Pgt;0.05）。

2.7 血流恢復檢測

三組皮片移植部位血液灌注量（表3）和血流灌注量百分比（表4）隨愈合時間延長，三組均呈現逐漸升高的趨勢。四個時間ADSCs組的血流灌注量百分比均高于Model組和PBS組。在術后7和14d，三組之間均無顯著性差異（Pgt;0.05）。術后21d，ADSCs組均與其他兩組呈極顯著性差異（Plt;0.01）。在術后28d，ADSCs組與Model組呈顯著性差異（0.01lt;Plt;0.05）。在術后21和28d，PBS組和Model組均無顯著性差異（Pgt;0.05）。

3 討 論

自體皮膚移植模型建立，依據皮膚移植排斥評分法^[12]，評定移植皮片的存活情況。將移植皮片反應分為0～5級（表5），Model組、PBS組和ADSCs組三組在皮膚移植后的四個時間點移植皮片均與周圍皮膚組織緊密貼合，全部存活，毛發生長明顯，均未出現免疫排斥反應，Model組和PBS組在愈合過程中只出現表皮壞死脫落，移植皮片與周圍組織貼合緊密，愈合良好。ADSCs組的移植皮片術后呈粉紅色，并在術后21d僅有少量痂皮未脫落，基本愈合。

ADSCs不僅具有促進皮膚組織再生，降低皮膚損傷氧化應激反應和炎癥反應的作用，可以分化為多種細胞，包括：骨細胞、脂肪細胞、表皮細胞、血管內皮細胞、成纖維細胞等^[13]。還可以分泌VEGF、bFGF和TGFβ等多種細胞因子，促進血管新生，加速傷口愈合^[14]。此外，脂肪組織在機體內分布廣泛，獲取方便。在傷口愈合過程中，ADSCs還具有很強的遷移能力，聚集在受傷部位分化為真皮成纖維細胞^[15]、內皮細胞^[16]和角質形成細胞^[17]。血管供血不足容易造成自體皮膚移植低氧損傷，在術后最初48h內，移植皮膚依賴于受體皮膚組織的營養和血液供應。之后，皮下組織的血管生長滲透移植皮膚，連接至移植皮膚的真皮層，此過程持續5～7d，移植皮膚血運恢復，產生新的血液通道^[18]。在缺血時移植皮膚血液的低灌注導致表皮層造成嚴重損傷，血液由真皮層毛細血管運輸滋養移植皮膚表皮因而移植皮膚表皮層對組織缺血較為敏感。ADSCs具有對缺氧環境作出反應的能力，注射于移植皮膚下的ADSCs，分泌生長因子和抗凋亡因子，對移植皮膚產生保護作用^[19]。ADSCs可以通過增殖分化和遷移功能，到達缺血組織的血管周圍，降低TNF-α和IL-1β等相關炎性因子，影響恢復的氧化應激因素，使處于病變微環境中的細胞存活，防止細胞凋亡^[20]。ADSCs還可以分泌VEGF、bFGF和TGFβ3等生長因子，促進血管再生^[21]。在試驗過程中，通過移植皮膚的愈合效果和皮片存活評價標準，可以發現在整個動物試驗中ADSCs組的愈合情況均優于Model組和PBS組，三組移植皮片全部存活，未出現免疫排斥現象。

通過觀察自體皮膚移植皮片的病理組織學切片體現的炎癥反應情況及Mosson染色的膠原生成情況分析，可以發現ADSCs可以降低炎癥，促進膠原纖維生長，具有加速移植皮片愈合的趨勢。本次試驗中分別采取了移植皮片中央和愈合邊緣的組織樣本，發現ADSCs組在愈合時中央位置，炎證反應輕微，新生膠原纖維逐漸變粗，厚度逐漸變薄，瘢痕形成不明顯。邊緣愈合類似嵌入狀，真皮層方向尖銳，表皮層方向寬平，隨著愈合時間延長，形狀逐漸縮小。在愈合過程中術后，ADSCs愈合情況明顯好于Model組和PBS組，術后28 d時恢復正常皮膚組織狀態，Model組和PBS組，表皮層還未完全恢復。

自體皮膚移植后會產生強烈的氧化應激反應，產生大量ROS，導致細胞膜損傷，細胞死亡，脂質過氧化程度加劇，代謝產物MDA含量增多，不利于傷口愈合^[22-23]。通過檢測SOD活性，MDA、GSH含量，發現ADSCs組具有較高活性，SOD可以減少超氧化物的形成，保護細胞免受氧化反應傷害^[23]。檢測MDA、GSH含量發現，ADSCs組的GSH含量均高于其他兩組，MDA含量均低于其他兩組，表明ADSCs能夠降低自體皮膚移植部位的氧化應激反應，促進抑制皮膚愈合。

炎癥是機體應對外界侵入性因素的有力防御機制，皮膚移植過程中，細胞因子和趨化因子的級聯反應啟動，產生早期的炎癥反應，大量炎性細胞到達傷口部位清理壞死細胞、細菌和細胞碎片^[24]。在這種促炎環境中，巨噬細胞活化，產生大量促炎因子，介導Th1型免疫反應。急性炎癥反應完成，M1巨噬細胞減少，TNF-α及其他促炎細胞因子生成，并產生抗炎因子，使巨噬細胞進行M2極化^[25]。在此階段，抗炎因子含量升高，與促炎因子形成拮抗作用，加速皮膚移植部位愈合。TNF-α的含量隨時間推移逐漸降低，且在術后7、14、21和28d，ADSCs組的TNF-α和IL-1β含量均顯著低于其他兩組，IL-10在7和14d的含量極顯著高于其他兩組。表明ADSCs在自體皮膚移植愈合中，通過降低促炎因子含量，提高抗炎因子的數量，平衡損傷組織的氧化和抗氧化作用，促進皮膚愈合的正常狀態。

在小型豬自體移植實驗動物模型中，移植皮片恢復正常狀態，需要各類的生長因子相互配合完成。VEGF是一種有效的促血管生成蛋白，遷移至損傷部位促進血管生成^[26]，TGFβ3可引導各種細胞的遷移，以協調傷口愈合^[27]，并參與產生瘢痕的炎癥反應調節，減少組織收縮，增加皮膚彈性^[28]。CD31是內皮細胞和造血細胞上表達的黏附和信號傳導受體，在血管生成、血管通透性和細胞反應調節中起重要作用^[29]。bFGF可以促進表皮細胞增殖及表皮生長因子的分泌，參與調節細胞增殖分化和器官生長^[30]。通過檢測四種生長因子含量及檢測血流恢復情況表明，ADSCs組的四種生長因子的含量顯著高于其他兩組，表明ADSCs可能通過增殖分化或旁分泌作用，提高皮膚移植部位生長因子含量，加快移植皮膚愈合。

4 結 論

1）成功建立巴馬小型豬自體皮膚移植實驗動物模型，應用ADSCs干預后移植皮片表皮脫落時間較其他兩組短，有效保護了損傷組織，加速皮膚損傷愈合。2）ADSCs能夠顯著減輕小型豬自體皮膚移植損傷后的病理變化及促進膠原纖維生長。3）ADSCs能夠顯著降低小型豬自體皮膚移植損傷后氧化應激及炎癥反應，降低炎癥浸潤，提高抗炎因子表達，促進相關生長因子表達及血管再生。4）本試驗為ADSCs在小型豬自體皮膚移植的臨床應用提供了科學依據，也為比較醫學和醫學領域自體皮膚移植提供了重要參考資料。

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（編輯 白永平）