桉葉精油對黃顙魚幼魚生長性能、腸道組織結構和抗氧化能力的影響

摘要： 為探究桉葉精油對黃顙魚（Pelteobagrus fulvidraco）幼魚生長發育的影響，本研究以黃顙魚幼魚為研究對象，在黃顙魚基礎飼糧中添加不同含量的桉葉精油（L16處理、L32處理、L48處理、L64處理桉葉精油添加量分別為0.16 mL/kg、0.32 mL/kg、0.48 mL/kg、0.64 mL/kg），并評估黃顙魚幼魚的生長性能、抗氧化能力及腸道健康狀況。結果表明，桉葉精油對黃顙魚幼魚生長和形體指標沒有影響。桉葉精油能夠改善黃顙魚幼魚腸道組織結構，其中L48處理和L64處理效果較好。L48處理黃顙魚幼魚前腸肌層厚度、中腸絨毛長度、中腸絨毛寬度、中腸肌層厚度均顯著高于對照（P＜0.05）。L64處理黃顙魚幼魚中腸和后腸的絨毛長度、絨毛寬度、肌層厚度均顯著高于對照（P＜0.05）。同時桉葉精油能夠提高黃顙魚幼魚肝臟和腸道超氧化物歧化酶和谷胱甘肽過氧化物酶活性，其中L48處理和L64處理效果較好。綜上，在黃顙魚基礎飼糧中，桉葉精油較適宜的添加量為0.48～0.64 mL/kg。本研究結果可為桉葉精油在水產養殖中的應用提供理論依據。

關鍵詞： 桉葉精油；黃顙魚；腸道組織結構；抗氧化能力

中圖分類號： S963.7 文獻標識碼： A 文章編號： 1000-4440（2024）11-2122-09

Effects of eucalyptus essential oil on growth performance， intestinal histology， and antioxidant capacity of juvenile Pseudobagrus fulvidraco

WANG Wenjuan¹， ZHANG Man¹， WEI Liangjia¹， LI Ping¹， XIE Minghong¹， YANG Zhi¹， MA Longxin¹， WEI Junguang¹， ZHENG Yunfeng²

（1.College of Fisheries， Southwest University， Chongqing 400715， China；2.Yunnan Emerald Essence Co.， Ltd.， Kunming 650000， China）

Abstract： To investigate the effects of eucalyptus essential oil on the growth and development of juvenile Pseudobagrus fulvidraco， this study used juvenile P. fulvidraco as the research object. Different concentrations of eucalyptus essential oil were added to the basal diet of juvenile P. fulvidraco （the additions of eucalyptus essential oils in treatments L16， L32， L48， L64 were 0.16 mL/kg， 0.32 mL/kg， 0.48 mL/kg， 0.64 mL/kg， respectively）， and their growth performance， antioxidant capacity and intestinal health were evaluated. The results indicated that eucalyptus essential oil had no effect on the growth or morphological indices of juvenile P. fulvidraco. However， eucalyptus essential oil was able to improve the intestinal histological structure of juvenile P. fulvidraco， with L48 and L64 treatments showing better effects. Specifically， the anterior intestinal muscularis thickness， mid-intestinal villus length， mid-intestinal villus width， and mid-intestinal muscularis thickness of juvenile P. fulvidraco under L48 treatment were significantly higher than those of control （P＜0.05）. The villus length， villus width， and muscularis thickness of both the mid-intestine and hind-intestine of juvenile P. fulvidraco under L64 treatment were significantly higher than those of control（P＜0.05）. Additionally， eucalyptus essential oil enhanced the activities of superoxide dismutase and glutathione peroxidase in the liver and intestine of juvenile P. fulvidraco， with L48 and L64 treatments exhibiting superior effects. In summary， the optimal concentration range for adding eucalyptus essential oil to the basal diet of juvenile P. fulvidraco is 0.48 mL/kg to 0.64 mL/kg. The results of this study provide a theoretical basis for the application of eucalyptus oil in aquaculture.

Key words： eucalyptus essential oil；Pseudobagrus fulvidraco；intestinal histology；antioxidant capacity

桉葉精油是一種從桉樹、香樟樹等植物的枝葉中提取的無色或淡黃色液體混合物，具有獨特的清涼桉葉氣味^[1]。桉葉精油的主要化學成分是一些相對分子量較小的萜類化合物，如1，8-桉葉素、α-蒎烯^[2]、檸檬烯、松油醇^[3]等，這些化合物大多極性較低或者無極性^[4]。其中，1，8-桉葉素是桉葉精油的主要活性成分，其分子式為 C₁₀H_18O。桉葉精油具有抗菌、殺蟲、抗氧化、消炎和鎮痛等功效^[5]，已經被廣泛用于醫療、護理、食品和美容等多個領域^[6-8]。自2020年7月1日起，中國全面禁止抗生素類飼料添加劑的使用，開發抗生素的替代品迫在眉睫。目前，研究發現，桉樹提取物、桉葉粉、桉葉精油能夠提高AA肉雞、羅斯308肉雞、白羽肉雞和小鼠的生長性能及免疫器官指數和抗氧化能力^[3，9-11]，并且能夠提高荷斯坦雄性犢牛的攝食量，提高犢牛對酸性洗滌纖維、粗蛋白和干物質的消化率，進而促進犢牛增重^[12]；Wang等^[13]發現，在體外試驗中，桉葉精油能夠減少甲烷的釋放量，而對揮發性脂肪酸含量沒有影響。

在水產領域，相關研究大多集中于1，8-桉葉素對水產動物的影響。研究發現，1，8-桉葉素具有降低血脂、抗炎、抗氧化、緩解應激的作用^[14-15]，能夠緩解鯉（Cyprinus carpio）^[16]、大口黑鱸（Micropterus salmoides L.）^[17]、虹鱒（Oncorhynchus mykiss）^[18]受到的擁擠脅迫、氨氮脅迫和應激反應，提高動物的成活率。除此之外，桉葉素具有鎮靜、麻醉作用，作為麻醉劑，其對虹鱒的副作用低于丁香酚^[19]。

黃顙魚（Pelteobagrus fulvidracmbo）別名“黃辣丁”、“刺黃股”、“角角魚”等，是中國重要的優質水產養殖品種^[19]。其肉質細嫩，無肌間刺，味道鮮美，營養豐富，深受消費者的喜愛^[20]。為滿足市場需求，黃顙魚高密度集約化養殖模式迅速發展。然而，由于水環境污染加劇、病原微生物孳生，黃顙魚病害頻發，使黃顙魚養殖業遭受了巨大的損失。作為一種無鱗魚類，黃顙魚對藥物的耐受度較低，因此黃顙魚病害防治應以預防為主。桉葉精油是一種具有抗菌、抗氧化、抗炎等多種功能的新型飼料添加劑，具有良好的應用潛力，有助于促進水產養殖業的健康可持續發展。本研究擬在黃顙魚幼魚飼料中添加不同含量的桉葉精油，分析其對黃顙魚生長性能、腸道組織結構及抗氧化能力的影響，旨在為黃顙魚大規模養殖提供科學依據。

1 材料與方法

1.1 試驗飼料

基礎飼料組成如表1所示，其營養水平如表2所示。主要蛋白質源為秘魯魚粉、豆粕；主要脂肪源為大豆油。在基礎飼料中分別添加0 mL/kg、0.16 mL/kg、0.32 mL/kg、0.48 mL/kg、0.64 mL/kg桉葉精油。每種原料粉碎后過60目篩，按照飼料配方精確稱量，采用逐級擴大法混勻，加入豆油和適量水充分混合后，制成顆粒飼料，曬干后置于-20 ℃保存備用。乳化桉葉精油（1，8-桉葉素含量≥20%，薄荷腦含量≥0.5%）購自云南綠寶香精香料股份有限公司（產品批號：2023070904）。

1.2 試驗設計

試驗所用黃顙魚幼魚購自重慶市榮昌區雙河漁業養殖服務中心。購買的魚苗經3% NaCl溶液消毒后置于西南大學水產學院校內養殖基地的水泥池（2.35 m×1.20 m×0.70 m）中暫養14 d后，挑選規格相似、體質健壯、初始體重為（1.16±0.02） g的幼魚375尾，隨機分為5組，分別為飼喂基礎飼料的對照（CK）、基礎飼料+0.16 mL/kg桉葉精油處理（L16）、基礎飼料+0.32 mL/kg桉葉精油處理（L32）、基礎飼料+0.48 mL/kg桉葉精油處理（L48）、基礎飼料+0.64 mL/kg桉葉精油處理（L64），每處理3個重復，每個重復25尾魚，分別飼養于水族缸（0.90 m×0.40 m×0.40 m）中。

1.3 飼養管理

試驗在西南大學水產學院養殖基地蠡園進行，為期70 d。每日定時于8：00、12：00、18：00定點投喂飼料，及時清理殘餌和排泄物以保證水質清澈。記錄黃顙魚幼魚的攝食、健康狀況，每日換水1次，換水量約為總水量的1/3。定期測定水質、水溫。養殖試驗期間，保持水溶氧量高于6.5 mg/L，亞硝酸鹽質量濃度低于0.01 mg/L，水溫23.0～27.9 ℃，pH值7.0～8.0，氨氮含量低于0.05 mg/L。

1.4 樣品采集與分析

飼養試驗結束后，禁食24 h，對每缸魚進行計數、稱重。每缸隨機挑選3尾魚，用3-氮基苯甲酸乙酯甲基磺酸鹽（MS-222）麻醉后稱重，在冰盤上解剖，分離并稱取內臟團、肝臟以及腸道的重量。將腸道分為前、中、后腸3段，分別取樣并固定于4%多聚甲醛溶液中，用于制作石蠟切片。再取一部分腸道和肝臟樣品保存于-80 ℃冰箱中，用于肝臟、腸道內抗氧化酶活性和丙二醛含量的測定。

1.4.1 組織學分析 沖洗腸道組織24～48 h，脫水、透明、浸蠟、包埋并切片，采用蘇木精-伊紅（H.E）染色，中性樹膠封片。利用Image-Pro Plus 6圖像處理軟件對腸道切片圖像進行分析，測定前腸、中腸和后腸的絨毛長度、絨毛寬度和肌層厚度。

1.4.2 抗氧化能力 肝臟超氧化物歧化酶（SOD）活性、谷胱甘肽過氧化物酶 （GSH-Px） 活性、丙二醛（MDA）含量測定采用蘇州夢犀生物試劑盒測定；腸道SOD活性、GSH-Px活性、MDA含量以及總蛋白質（TP）濃度采用南京建成生物工程研究所的試劑盒測定。

1.5 計算公式

1.5.1 生長指標 生長指標包括增重率（WGR）、特定生長率（SGR）。

WGR=（W_t-W₀）/W₀×100%

SGR=（lnW_t-lnW₀）/ t×100%

式中，W_t為終末體重（g）；W₀為初始體重（g）；t為試驗周期（70 d）。

1.5.2 形體指標 形體指標包括臟體比（VSI）、肝體比（HSI）、腸體比（IWI）、肥滿度（CF）。

VSI=W_v/W_t×100%

HSI=W_h/W_t×100%

IWI= W_I/W_t×100%

CF=W_t/L³×100%

式中，W_v為內臟重（g）；W_t為終末體重（g）；W_h為肝臟重（g）；W_I為腸道重（g）；L為魚體長（cm）。

1.6 數據統計與分析

用 Excel 2018 初步統計和計算試驗數據，用 SPSS26.0軟件進行單因素方差分析（One-way ANOVA），并使用 Duncan’s法進行多重比較，試驗結果以平均值±標準差（mean±SD）表示，P＜0.05表示差異顯著。

2 結果與分析

2.1 桉葉精油對黃顙魚幼魚生長和形體指標的影響

如表3所示，經過70 d飼養后，各處理黃顙魚幼魚終末體重、增重率、特定生長率均無顯著差異（P＞0.05），各處理黃顙魚幼魚的臟體比、肝體比、腸體比及肥滿度也無顯著差異（P＞0.05）。

2.2 桉葉精油對黃顙魚幼魚腸道組織結構的影響

2.2.1 前腸腸道組織結構 如圖1所示，對照黃顙魚幼魚前腸腸絨毛細長且稀疏。L32和L48處理黃顙魚幼魚腸絨毛相對較緊密，充滿整個腸腔。如表4所示，各處理黃顙魚幼魚前腸絨毛長度和寬度均并無顯著性變化（P＞0.05），但添加桉葉精油的L16、L32、L48和L64處理黃顙魚幼魚肌層厚度均顯著高于對照（P＜0.05）。

2.2.2 中腸腸道組織結構 黃顙魚幼魚中腸的腸道組織結構如圖2所示，隨著飼料中桉葉精油添加量的升高，黃顙魚幼魚中腸腸絨毛長度、寬度和肌層厚度均增加。如表5所示，L48處理、L64處理黃顙魚幼魚中腸腸絨毛長度、寬度和肌層厚度均顯著高于對照（P＜0.05）。L48處理黃顙魚幼魚中腸腸絨毛長度顯著高于對照、L16處理、L32處理、L64處理（P＜0.05）。

2.2.3 后腸腸道組織結構 黃顙魚幼魚后腸的腸道組織結構如圖3所示，未添加桉葉精油的對照黃顙魚幼魚后腸絨毛短而稀疏。如表6所示，添加桉葉精油對腸道組織結構有改善作用，其中L64處理黃顙魚幼魚后腸腸絨毛長度、寬度和肌層厚度均顯著高于對照（P＜0.05）。

2.3 桉葉精油對黃顙魚幼魚抗氧化酶活性的影響

如表7所示，飼喂桉葉精油能提高黃顙魚幼魚肝臟的抗氧化力。L48處理黃顙魚幼魚肝臟中超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px）活性顯著高于對照（P＜0.05），各處理黃顙魚幼魚肝臟中丙二醛含量無顯著差異（P＞0.05）。L48處理和L64處理黃顙魚幼魚腸道中SOD、GSH-Px活性顯著高于對照（P＜0.05），各處理黃顙魚幼魚腸道中丙二醛含量無顯著差異（P＞0.05）。

3 討論

3.1 桉葉精油對黃顙魚幼魚生長性能的影響

動物生長性能與營養物質的攝入、消化吸收及機體的健康狀況密切相關。桉葉精油富含多種萜烯類芳香化合物，其獨特的氣味能夠刺激動物的食欲，改善飼料的適口性，從而提高動物對干物質的攝入量，提高生長性能^[21-22]。Nie等^[12]的研究結果表明，持續8周每天給雄性犢牛飼喂0.5 g桉樹精油，犢牛對日糧干物質、粗蛋白及酸性洗滌纖維的消化率顯著提高。目前，關于桉葉精油影響水產動物生長性能的研究較少。

已有研究結果表明，植物提取物能夠通過改善水產動物的健康狀況提高其生長性能^[23-24]。Hoseini等^[25]研究發現，持續50 d每天給虹鱒飼喂含0.05%～1.00% 1，8-桉葉素的日糧，可顯著提高虹鱒的生長性能，當桉葉素含量為0.84%～0.88%時效果最佳；同時，其血清總蛋白、球蛋白、血紅蛋白含量升高，甘油三酯含量、膽固醇含量、谷丙轉氨酶活性、谷草轉氨酶活性降低。桉葉素可以改善遭受擁擠脅迫的虹鱒生長性能，可能是因為桉葉素能夠降低虹鱒血清中皮質醇水平^[18，26]。本研究中，飼喂桉葉精油的黃顙魚幼魚的部分生長性能和形體指標沒有顯著提高，這可能與魚種類或魚的生理階段有關。

3.2 桉葉精油對黃顙魚幼魚腸道組織結構的影響

魚類的腸道是其主要的消化器官，腸道結構的完整性對魚類的消化吸收和生長發育至關重要。腸絨毛是腸黏膜表面的特殊結構，由黏膜上皮和固有膜突向腸腔形成，其作用在于增加腸道的內表面積，從而提高腸道對飼料的消化吸收效率。當腸絨毛長度和寬度增加時，腸道的吸收能力也隨之增強^[27]。目前，關于桉葉精油影響胃腸道組織結構及屏障完整性的研究較少。Caldas等^[28]發現，1，8-桉葉素能夠修復大鼠胃黏膜和黏膜下層，恢復腺細胞分泌黏液的功能，保護胃黏膜免受急性損傷并加速受損黏膜的愈合。Akinrinde等^[29]發現，口服桉葉精油能夠緩解黃曲霉毒素B₁引起的小鼠胃和十二指腸的損傷。

本研究結果表明，飼喂桉葉精油可以顯著提高黃顙魚幼魚腸絨毛長度和寬度。植物精油通過破壞腸道有害菌細胞結構，影響其代謝，從而抑制或殺滅有害菌，有助于改善腸道組織形態^[30-31]。此外，桉葉精油的抗氧化特性能夠減少自由基對機體組織的氧化損傷，從而維持腸道組織形態。Akinrinde等^[29]發現，小鼠口服桉葉精油后，其胃腸道抗氧化酶活性升高，丙二醛含量降低，這與本研究結論一致。肌層厚度是反映腸道收縮能力的重要指標，肌層厚度的增加有助于提高腸道對內容物的消化能力，從而提高生長性能^[32]。本研究發現，飼喂桉葉精油可以增加黃顙魚幼魚腸道肌層厚度，基礎飼料中添加桉葉精油的處理黃顙魚幼魚前腸肌層厚度均顯著高于對照。

3.3 桉葉精油對黃顙魚幼魚肝臟和腸道抗氧化能力的影響

抗氧化防御系統中的關鍵酶包括超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px）等^[11]。SOD能夠高效催化超氧負離子歧化反應^[18]，構筑生物體抗氧化防御的第一道防線，同時在免疫系統起到核心作用。GSH-Px廣泛存在于生物體內，特別是在動物的肝臟和紅細胞中，其酶活性可以催化H₂O₂轉化成水，對維持機體免疫功能和代謝活動具有重要意義。

研究結果表明，在肉雞、小鼠、犢牛的飼料或飲水中添加桉葉精油或桉葉提取物，可顯著提高血清、肝臟、腎臟中的抗氧化酶如GSH-Px、T-SOD、過氧化氫酶的活性，同時顯著降低丙二醛含量^[3，11-12]。Zhao等^[33]發現，通過脂多糖誘導炎癥反應時，小鼠機體內的氧化應激水平會升高，表現為超氧陰離子的增加和抗氧化酶活性的降低，而添加桉葉精油后可以顯著提高小鼠血清中的超氧化物歧化酶活性，增強機體清除活性氧的能力，同時桉葉精油能夠降低血清中NO含量。本研究中，添加桉葉精油的部分處理可以顯著提高黃顙魚幼魚肝臟和腸道的SOD活性和GSH-Px活性。

丙二醛（MDA）是脂質過氧化的終產物之一，其含量的高低可以反映機體脂質氧化的程度。丙二醛含量降低表明機體抗氧化能力增強。本研究中，添加桉葉精油對黃顙魚幼魚肝臟和腸道中MDA含量沒有明顯影響。桉葉精油的抗氧化作用與其主要成分1，8-桉葉素有關。在虹鱒、大口黑鱸中的研究發現，1，8-桉葉素能夠提高血清抗氧化酶如超氧化物歧化酶（SOD）、過氧化氫酶（CAT）、谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px）活性與總抗氧化能力（T-AOC）和谷胱甘肽（GSH）含量，降低丙二醛含量，從而緩解魚類在運輸過程中產生的應激反應。Chen等^[34]發現1，8-桉葉素能夠激活Nrf2/Keap1信號通路，誘導抗氧化酶如血紅素加氧酶、超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px）、過氧化氫酶（CAT）等酶基因的表達^[35]，降低丙二醛含量。除此之外，1，8-桉葉素還能夠捕獲自由基，螯合金屬離子，減少活性氧（ROS）的生成，保護細胞免受氧化損傷^[36]。

4 結論

本研究發現，在飼料中添加桉葉精油能夠改善黃顙魚幼魚腸道組織結構，提高肝臟和腸道抗氧化能力。L48處理黃顙魚幼魚前腸肌層厚度、中腸絨毛長度、中腸絨毛寬度、中腸肌層厚度均顯著高于對照（P＜0.05）。L64處理黃顙魚幼魚中腸和后腸的絨毛長度、絨毛寬度、肌層厚度均顯著高于對照（P＜0.05）。同時添加桉葉精油處理能夠提高黃顙魚幼魚肝臟和腸道超氧化物歧化酶和谷胱甘肽過氧化物酶活性，其中L48處理和L64處理效果較好。綜上，在黃顙魚基礎飼料中，桉葉精油較適宜的添加量為0.48～0.64 mL/kg。本研究結果可為黃顙魚高密度集約化養殖提供理論依據。

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（責任編輯：成紓寒）