重組禽流感病毒（H5+H7）三價滅活疫苗免疫肉鴨抗體水平監(jiān)測

摘要：本試驗(yàn)通過對重組禽流感病毒（H5+H7）三價滅活疫苗在肉鴨上接種后產(chǎn)生抗體效價情況的研究，來評價重組禽流感病毒三價滅活疫苗對肉鴨預(yù)防高致病性禽流感疫病的效果。試驗(yàn)將90只21日齡健康肉鴨隨機(jī)分成三組，設(shè)一免組、二免組和對照組，分別接種1～2次疫苗，檢測免疫前和免疫后21 d、28 d、60 d鴨血清中特異性抗體水平，評估重組禽流感病毒三價滅活疫苗的免疫效果。結(jié)果顯示：21日齡時母源抗體水平低于保護(hù)值，首免后抗體水平逐漸升高，且在免疫后21 d基本達(dá)到峰值，二免的抗體水平較一免升高速度更快且維持時間更長。本研究為制定和優(yōu)化禽流感免疫程序提供依據(jù)。

關(guān)鍵詞：禽流感；肉鴨；抗體；抗體效價

禽流感在中國被列為A類疫病[1]，該病由A型禽流感病毒（avian influenza virus，AIV）引起[2]。當(dāng)前，高致病性禽流感屬于禽類強(qiáng)制免疫病種，接種H5和H7亞型的高致病性禽流感疫苗是有效預(yù)防和控制禽流感的措施之一[3-4]。

為探究重組禽流感病毒（H5+H7）三價滅活疫苗的免疫效果，本研究分別在21日齡（一免）、42日齡（二免）對不同組別的試驗(yàn)鴨免疫重組禽流感病毒（H5+H7）三價滅活疫苗，并在一免日、一免后21 d、一免后28 d以及一免后60 d分別采集血清樣本，檢測H5型（Re-13株+Re-14株）和H7型（Re-4株）禽流感抗體水平，觀察疫苗的臨床效果，以期制訂更合理的免疫程序，為禽流感綜合防控提供參考。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

1.1.1試劑

重組禽流感病毒（H5+H7）三價滅活疫苗（H5N6 H5-Re 13株+H5N8 H5-Re 14株+H7N9 H7-Re 4株）來自肇慶大華農(nóng)生物藥品有限公司。

1.1.2 試驗(yàn)動物及

21日齡肉鴨90只。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 試驗(yàn)分組

試驗(yàn)肉鴨隨機(jī)分成 3 組，分別為對照組、一免組、二免組，每組30只。根據(jù)農(nóng)業(yè)農(nóng)村部的推薦，一免組、二免組在試驗(yàn)肉鴨21日齡時皮下注射免疫重組禽流感病毒（H5+H7）三價滅活疫苗，二免組在42日齡時進(jìn)行二免，首免劑量為0.5 mL/只，二免為1.0 mL/只，對照組不免疫。各組試驗(yàn)用鴨均在相同條件下飼養(yǎng)。

1.2.2 采樣方案

不同組別試驗(yàn)肉鴨分別在21日齡（一免日）、42日齡（一免后21 d）、49日齡（一免后28 d）以及71日齡（一免后60 d）隨機(jī)抽取15只，每只翅靜脈采血2～3 mL，分離血清后放置于-20 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.3 檢測方法

血清樣品應(yīng)用血凝試驗(yàn)（Hemagglutination test，HA）和血凝抑制試驗(yàn)（Hemagglutination inhibition test，HI）進(jìn)行H5亞型禽流感病毒抗體和 H7N9 亞型流感病毒抗體檢測，HI≥4 log2判為免疫合格。

2 結(jié)果與分析

2.1 H5-Re13株疫苗檢測結(jié)果與分析

結(jié)果（圖一）顯示，在21、42（一免后21 d）、49（一免后28 d）以及71日齡（一免后60 d），免疫組試驗(yàn)肉鴨禽流感H5-Re13平均抗體水平逐漸升高。其中，一免組各日齡的抗體滴度為3.47 log2、4.87 log2、5.40 log2、5.00 log2，二免組各日齡的抗體滴度為4.40 log2、6.13 log2、6.53 log2、5.87 log2，對照組的抗體滴度在不同日齡均低于保護(hù)臨界值（4 log2）。21日齡時對照組和一免組的抗體合格率分別為46.7 %、66.6 %，低于國家要求的70 %以上。

2.2 H5-Re14株疫苗檢測結(jié)果與分析

結(jié)果（圖二）顯示，AIV H5-Re14的抗體水平整體呈逐漸上升趨勢，21日齡時，隨著母源抗體水平下降，三個組的H5-Re14抗體水平均低于保護(hù)臨界值。二免組的整體抗體水平高于一免組。其中，一免組各日齡的抗體滴度為3.53 log2、4.80 log2、5.33 log2、4.80 log2，二免組的抗體滴度為3.87 log2、6.33 log2、6.80 log2、5.93 log2，對照組的抗體水平均低于臨界保護(hù)值。21日齡時抗體合格率分別為40 %、53.3 %和60 %，其他日齡抗體合格率除對照外均符合國家要求。

2.3 H7-Re4株疫苗檢測結(jié)果與分析

結(jié)果（圖三）顯示，AIV H7-Re4在21日齡時抗體水平較高，二免后抗體效價逐漸升高。其中，一免組各日齡的抗體滴度為5.93 log2、4.13 log2、4.67 log2、5.40 log2，二免組的抗體滴度分別為6 log2、6.33 log2、6 log2、6.47 log2，對照組的抗體水平均低于臨界保護(hù)值。抗體合格率在不同日齡均符合國家要求的70 %以上。

3 討論

3.1 母源抗體的對免疫效果的影響

母源抗體的高低與疫苗免疫后的抗體效價的變化密切相關(guān)[5]，其對不同病毒的影響有所區(qū)別，對于禽流感而言，母源抗體水平越高，免疫后抗體效價下降幅度和持續(xù)時間越長，中和抗體效價上升越慢[6]。在本研究中，21日齡時禽流感H5母源抗體平均水平低于4 log2，免疫重組禽流感病毒（H5+H7）三價滅活疫苗后抗體水平持續(xù)上升并且在免疫后的21 d基本達(dá)到峰值；而禽流感H7的母源抗體水平在21日齡時仍處于較高水平，這可能也是導(dǎo)致后續(xù)免疫抗體水平升高不顯著的原因之一。

3.2 免疫次數(shù)的選擇

免疫程序的選擇和優(yōu)化對于禽流感的防控至關(guān)重要。本試驗(yàn)中選擇21日齡進(jìn)行首免，一免產(chǎn)生的抗體效價雖然能夠有效保護(hù)鴨群，但是整體的抗體效價水平不高，若是6周齡左右出欄的肉鴨免疫一次即可，對于飼養(yǎng)周期較長的種鴨，可在一免后3～4周后進(jìn)行二免，二免可以更快速提升鴨群的抗體效價，使鴨群的抗體效價在更長時間段保持在一個較高水平，能夠更有效的保護(hù)鴨群，后期仍要重視抗體水平監(jiān)測，及時補(bǔ)免。

3.3 加強(qiáng)飼養(yǎng)管理

牢固樹立養(yǎng)重于防，防重于治的觀念，做好日常的飼養(yǎng)管理。在本研究中發(fā)現(xiàn)，出現(xiàn)極個別試驗(yàn)鴨抗體效價不合格，可能與該鴨自身體質(zhì)有關(guān)，也可能是對不良環(huán)境產(chǎn)生了應(yīng)激反應(yīng)引發(fā)，使得身體出現(xiàn)不適狀況。飼養(yǎng)人員應(yīng)在免疫后及時為鴨群提供所需攝入的營養(yǎng)成分，如維生素、蛋白質(zhì)、微量元素等，缺乏相應(yīng)的營養(yǎng)成分，可能會導(dǎo)致抗體合成受阻，造成免疫功能低下，最終導(dǎo)致免疫失敗[7]。

參考文獻(xiàn)

[1] XU H，ZHU S，GOVINDEN R，et al.Multiple Vaccines and Strategies for Pandemic Preparedness of Avian Influenza Virus [J].Viruses，2023，15（8）.

[2] 石瑜，王芳蕊，袁雪濤，楊愛華.近年高致病性禽流感流行特點(diǎn)及新型禽流感疫苗在天津地區(qū)的應(yīng)用 [J].上海畜牧獸醫(yī)通訊，2023，03.

[3] LEE D H，CRIADO M F，SWAYNE D E.Pathobiological Origins and Evolutionary History of Highly Pathogenic Avian Influenza Viruses [J].Cold Spring Harb Perspect Med，2021，11（2）.

[4] 陳建豪，買吾蘭·孜克牙，楊夷平，等.重組禽流感病毒（H5+H7）三價滅活苗免疫抗體消長規(guī)律研究與應(yīng)用.家禽科學(xué).2023，45（04）.

[5] 蔣玲艷，彭健波，張?jiān)冢?母源抗體對禽流感-新城疫疫苗免疫后抗體效價的影響規(guī)律研究 [J].家禽科學(xué)，2024，46（09）.

[6] 孫藝學(xué)，叢彥龍，李佳新，等.H9N2亞型禽流感嵌合病毒樣顆粒的免疫效果 [J].中國獸醫(yī)學(xué)報，2023，43（07）.

[7] 劉剛.重組禽流感病毒（H5+H7）三價滅活疫苗的櫻桃谷肉鴨免疫優(yōu)化試驗(yàn)[J].中國動物檢疫，2020，37（12）：124-127，140.