兒童支原體大葉性肺炎三種病原體檢測方法的對(duì)比分析

摘要：目的" 研究肺炎支原體感染所致大葉性肺炎的早期實(shí)驗(yàn)室檢查結(jié)果，探討相關(guān)指標(biāo)的疾病預(yù)測價(jià)值。方法" 回顧性分析南京醫(yī)科大學(xué)第二附屬醫(yī)院2023年1月-8月收治的疑似肺炎支原體感染致大葉性肺炎患兒的實(shí)驗(yàn)室檢測結(jié)果，分析三種支原體病原體和血清學(xué)檢測方法對(duì)兒童支原體大葉性肺炎的早期診斷意義。結(jié)果" 核酸檢測法的MP陽性檢出率最高，化學(xué)發(fā)光法、間接免疫熒光法和核酸檢測法的MP檢測陽性率分別為37.78%、28.89%和82.22%；三種檢測方法的一致性較差，兩兩比較的Kappa值分別為0.089、-0.444和-0.533。不同性別患兒化學(xué)發(fā)光法MP檢測結(jié)果比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；不同年齡、不同拷貝數(shù)三種檢測方法MP陽性檢出率比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。結(jié)論" 同步進(jìn)行核酸和抗體檢測有助于及早、準(zhǔn)確診斷兒童支原體肺炎，為該疾病的早期診斷和治療提供依據(jù)。

關(guān)鍵詞：肺炎支原體；大葉性肺炎；肺炎支原體DNA；肺炎支原體抗體

中圖分類號(hào)：R725.6" " " " " " " " " " " " " " " " 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A" " " " " " " " " " " " " " " " " DOI：10.3969/j.issn.1006-1959.2024.18.015

文章編號(hào)：1006-1959（2024）18-0083-05

Abstract：Objective" To study the early laboratory examination results of lobar pneumonia caused by Mycoplasma pneumoniae infection， and to explore the predictive value of related indicators.Methods" The laboratory test results of children with lobar pneumonia caused by suspected mycoplasma pneumoniae infection admitted to the Second Affiliated Hospital of Nanjing Medical University from January to August 2023 were retrospectively analyzed. The significance of three mycoplasma pathogens and serological detection methods in the early diagnosis of mycoplasma lobar pneumonia in children was analyzed.Results" The positive detection rate of MP by nucleic acid detection method was the highest， the positive detection rates of MP by chemiluminescence method， indirect immunofluorescence method and nucleic acid detection method were 37.78%， 28.89% and 82.22%， respectively， the consistency of the three detection methods was poor， and the Kappa values of pairwise comparison were 0.089， -0.444 and-0.533， respectively. There was a statistically significant difference in the results of MP detection by chemiluminescence in children of different genders （Plt;0.05）.Conclusion" Simultaneous nucleic acid and antibody detection is helpful for early and accurate diagnosis of mycoplasma pneumonia in children， and provides a basis for early diagnosis and treatment of the disease.

Key words：Mycoplasma pneumonia;Lobar pneumonia;Mycoplasma pneumoniae DNA;Mycoplasma pneumoniae antibody

肺炎支原體肺炎（mycoplasma pneumoniae pneumonia， MPP）是兒童時(shí)期常見的肺部嚴(yán)重感染性疾病，病變可累及肺段甚至全葉，一般具有起病急、病情進(jìn)展快、癥狀較嚴(yán)重、累及范圍較廣、病程較長等臨床特點(diǎn)[1-4]，可出現(xiàn)肺不張及大量胸腔積液、肺膿腫，以及肺外多器官系統(tǒng)功能損害等并發(fā)癥，甚至可導(dǎo)致呼吸衰竭，嚴(yán)重威脅兒童的健康[5-7]。如何早期發(fā)現(xiàn)重癥和危重癥病例、合理救治、避免死亡和后遺癥的發(fā)生是MPP診治的核心和關(guān)鍵問題。本研究比較了同一住院MPP患兒三種支原體病原學(xué)和血清學(xué)的首次檢查結(jié)果，分析相關(guān)指標(biāo)對(duì)兒童支原體大葉性肺炎的預(yù)測價(jià)值，以期為該疾病的早期診斷提供依據(jù)，現(xiàn)報(bào)道如下。

1資料與方法

1.1一般資料" 選擇2023年1月-8月在南京醫(yī)科大學(xué)第二附屬醫(yī)院確診為大葉性肺炎，且送檢深部呼吸道分泌物MP-DNA的住院患兒45例為研究對(duì)象。納入標(biāo)準(zhǔn)：所有患兒經(jīng)過確診，符合兒童支原體大葉性肺炎診斷標(biāo)準(zhǔn)；患兒有發(fā)熱和（或）咳嗽等呼吸道感染癥狀，肺部X線或CT呈肺葉或節(jié)段性片狀致密影或肺實(shí)質(zhì)浸潤性病變等癥狀。排除標(biāo)準(zhǔn)：細(xì)菌性肺炎、病毒性肺炎、衣原體肺炎、軍團(tuán)菌肺炎、肺結(jié)核、支氣管哮喘、先天免疫系統(tǒng)缺陷等[8]；臨床資料不全患兒。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，患兒家屬知情同意，并簽署同意書。

1.2方法" 所有患兒入院當(dāng)日采集靜脈血進(jìn)行化學(xué)發(fā)光法和間接免疫熒光檢測（MP-IgM），入院24 h內(nèi)采用咽拭子取痰法取深部呼吸道分泌物，進(jìn)行肺炎支原體DNA檢測，操作方法均按試劑說明書操作。化學(xué)發(fā)光法采用亞輝龍iFlash 3000-H化學(xué)發(fā)光免疫分析儀及配套試劑，試劑批號(hào)20230401，檢測結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)：COI≥1.1為陽性，＜0.9為陰性，0.9≤COI＜1.1為可疑。若檢測顯示可疑則重復(fù)檢測，并取兩次測量平均值判定。間接免疫熒光法使用德國歐蒙Sprinter XL全自動(dòng)間接免疫熒光/酶聯(lián)免疫一體機(jī)和試劑，批號(hào)F221207CC和批號(hào)F230616CG，檢測結(jié)果使用OLYMPUS BX43熒光顯微鏡嚴(yán)格規(guī)范判讀。核酸檢測使用美國ABI7300 Real Time PCR System和試劑，批號(hào)202306296，PCR拷貝數(shù)≥1.0×103 copies/ml為陽性。收集研究對(duì)象的性別、年齡、入院后同時(shí)接受三種檢測方法檢測的首次檢測結(jié)果等資料。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)方法" 采用SPSS 20.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)描述，計(jì)量資料采用（x±s）表示，計(jì)數(shù)資料采用[n（%）]來表示，使用？字2檢驗(yàn)和Fisher's確切概率法檢驗(yàn)來比較組間差異，P＜0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。使用Kappa系數(shù)分析比較兩種檢測方法的一致性。

2結(jié)果

2.1大葉性肺炎患兒的檢測結(jié)果" 45例大葉性肺炎患兒中，男19例，女26例，男女比0.73∶1；患兒年齡4個(gè)月～11歲，平均年齡（6.78±2.79）歲，0～3歲8例（17.78%），3～6歲9例（20.00%），7～11歲28例（62.22%）。其中有19例（42.22%），三種檢測方法的檢測結(jié)果完全相符。在所有8例（17.78%）核酸檢測結(jié)果為陰性的標(biāo)本中，化學(xué)發(fā)光法和間接免疫熒光法的檢測結(jié)果均為陰性；26例（57.78%）三種檢測方法的檢測結(jié)果不相符的結(jié)果中，核酸檢測結(jié)果均為陽性，化學(xué)發(fā)光法和間接免疫熒光法為陽性或?yàn)殛幮裕渲泻怂釞z測結(jié)果陽性，化學(xué)發(fā)光法陰性和間接免疫熒光法陰性的標(biāo)本18例（40.00%），核酸檢測結(jié)果陽性，化學(xué)發(fā)光法陽性和間接免疫熒光法陰性的標(biāo)本6例（13.33%），酸檢測結(jié)果陽性，化學(xué)發(fā)光法陰性和間接免疫熒光法陽性的標(biāo)本2例（4.44%）見表1。

2.2三種方法MP檢測陽性率比較" 三種方法MP檢測陽性率比較見表2。45例大葉性肺炎患兒中，化學(xué)發(fā)光法的MP檢測陽性例數(shù)為17例（37.78%），間接免疫熒光法為13例（28.89%），核酸檢測法為37例（82.22%）。三種檢測方法的兩兩比較中，化學(xué)發(fā)光法與間接免疫熒光法比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，一致性較差（？字2=0.800，P=0.371，Kappa=0.089）；化學(xué)發(fā)光法與核酸檢測法比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，不一致性中等（？字2=18.519，P=0.000，Kappa=-0.444）；間接免疫熒光法與核酸檢測法比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，不一致性中等（？字2=25.920，P=0.000，Kappa=-0.533），見表2。

2.3不同性別三種方法檢測MP陽性率比較" 不同性別化學(xué)發(fā)光法MP檢測結(jié)果比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；間接免疫熒光法和核酸檢測法不同性別MP檢測結(jié)果比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），見表3。

2.4不同年齡三種方法檢測MP陽性率比較" 三種方法在年齡＜3歲、3～6歲、＞6歲組MP檢測陽性率比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；不同年齡核酸檢測法MP檢測結(jié)果比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（？字2=15.423，P=0.000），化學(xué)發(fā)光法和間接免疫熒光法MP檢測組內(nèi)和組間陽性率比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），見表4。

2.5不同拷貝數(shù)三種方法檢測陽性率比較" 45例樣本中＜103拷貝數(shù)樣本8例（17.78%），103～106拷貝數(shù)樣本21例（46.67%），＞106拷貝數(shù)樣本16例（35.55%）。不同拷貝數(shù)三種檢測方法MP檢測陽性率比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；不同拷貝數(shù)化學(xué)發(fā)光法和核酸檢測法MP檢測比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.041、0.000），不同拷貝數(shù)間接免疫熒光法檢測MP檢測結(jié)果比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。三種方法的組間兩兩比較，化學(xué)發(fā)光法＜103組與103～106組、核酸檢測法＜103組與103～106組，以及＜103組、＞106拷貝數(shù)的MP檢測結(jié)果比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.000），見表5。

3討論

肺炎支原體可引起兒童上或下呼吸道感染，是社區(qū)獲得性肺炎的重要病原。10%～40%的兒童社區(qū)獲得性肺炎（CAP）由肺炎支原體所引起，早期如何準(zhǔn)確診斷并合理選擇抗菌藥物一直是臨床中診治兒童MPP亟需解決的難題。

支原體培養(yǎng)是鑒定MP感染的金標(biāo)準(zhǔn)[9]，但因?yàn)樯L營養(yǎng)要求高，生長時(shí)間緩慢，陽性率低，所以在臨床上不具備早期診斷價(jià)值。MP感染的潛伏期為2～3周，人體一般在感染MP后4～5 d才出現(xiàn)IgM類抗體，3～4周達(dá)高峰，以后逐漸降低，因此IgM抗體陽性可作為急性期感染的診斷指標(biāo)[10-12]。而lgG較IgM出現(xiàn)晚，無早期診斷價(jià)值，如顯著升高提示近期感染，顯著降低說明處于感染后期。嬰幼兒由于免疫功能不完善、產(chǎn)生抗體的能力較低，可能出現(xiàn)假陰性或低滴度的抗體，即使IgM抗體檢測陰性，也不能否定MP感染，需進(jìn)行MP核酸檢測或檢測lgG抗體，可結(jié)合患兒的病程及年齡綜合考慮；當(dāng)恢復(fù)期和急性期MP抗體滴度呈4倍或4倍以上增高或減低時(shí)，可確診支原體感染[8]。

血清學(xué)和核酸檢測是目前診斷MP感染的常規(guī)實(shí)驗(yàn)室手段[13-15]。化學(xué)發(fā)光法具有高靈敏度、高特異性、自動(dòng)化快速檢測和性價(jià)比高等特點(diǎn)，較間接免疫熒光法的靈敏度更高，費(fèi)用低，且操作簡便、耗時(shí)短等多種優(yōu)勢[16-18]。核酸擴(kuò)增診斷技術(shù)（RNA、DNA、高通量測序）靈敏度高、特異性強(qiáng)、快速，不受年齡、產(chǎn)生抗體的能力、病程早晚及用藥等因素的影響[19，20]，在MP感染早期的檢出率最高，可用于早期診斷；而血清學(xué)檢測具備簡便快速、重復(fù)性好的特點(diǎn)，因此核酸檢測與IgM同時(shí)測定，并將二者的結(jié)果聯(lián)合解讀，可提高兒童支原體肺炎的早期診斷率，達(dá)到指導(dǎo)用藥和提高療效的目的。本研究使用的三種檢測方法中，核酸檢測法的MP檢測陽性率最高，化學(xué)發(fā)光法次之，間接免疫熒光法最低，且核酸檢測法的MP檢測陽性率是后2種方法的2倍以上，能夠檢出化學(xué)發(fā)光法和間接免疫熒光法檢測為陰性的假陰性標(biāo)本，故核酸檢測法是MP早期實(shí)驗(yàn)室診斷首選的檢測方法。盡管MP的病原體核酸檢測對(duì)于MPP的早期診斷和早期治療干預(yù)非常重要，但MP的抗體檢測也是MPP早期診治非常必要的補(bǔ)充手段。通過對(duì)三種方法對(duì)MP檢測的一致性分析顯示，盡管三種檢測方法的一致性較差，從檢出率及不同性別組、不同年齡組和不同拷貝數(shù)組MP檢測結(jié)果的統(tǒng)計(jì)學(xué)分析結(jié)果看，化學(xué)發(fā)光法比間接免疫熒光法對(duì)患兒IgM類抗體的檢測更具優(yōu)勢。因此，化學(xué)發(fā)光法是本院特異性MP-IgM血清學(xué)檢測的推薦方法，對(duì)兒童支原體大葉性肺炎的早期診治具有重要作用。

綜上所述，以上三種方法對(duì)兒童支原體大葉性肺炎實(shí)驗(yàn)室早期診斷的一致性較差，其中核酸檢測法的陽性檢出率最高，間接免疫熒光法最低，化學(xué)發(fā)光法檢測MP-IgM優(yōu)于間接免疫熒光法。聯(lián)合以上三種方法對(duì)于兒童支原體大葉性肺炎的早期診斷不是必須的，核酸檢測法最具診治價(jià)值，同步進(jìn)行MP核酸和抗體檢測有助于及早、準(zhǔn)確診斷兒童支原體肺炎。如果沒有條件開展核酸檢測，利用化學(xué)發(fā)光法檢測特異性MP-IgM，對(duì)于降低兒童支原體大葉性肺炎的漏檢率，提高該疾病的診斷率具有一定的臨床應(yīng)用價(jià)值，是臨床優(yōu)先考慮使用的MP檢測方法。

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收稿日期：2023-09-20；修回日期：2023-10-10

編輯/肖婷婷

作者簡介：王琳（1974.4-），女，江蘇濱海縣人，本科，副主任技師，主要從事醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)工作

通訊作者：王筆金（1969.9-），男，江蘇南京人，本科，主任技師，主要從事醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)工作