慢性心力衰竭病人血清miR-181b-5p、lncRNA LUCAT1表達及其與心功能和預后的關系

摘要目的：探討慢性心力衰竭病人血清微小RNA-181b-5p（miR-181b-5p）、長鏈非編碼RNA（lncRNA）肺癌相關轉錄物1（LUCAT1）表達及其與心功能和預后的關系。方法：選取2020年1月—2021年1月在我院治療的慢性心力衰竭病人80例（觀察組），根據美國紐約心臟病協會（NYHA）心功能分級將病人分為Ⅱ級組（34例）、Ⅲ級組（28例）和Ⅳ級組（18例）；根據病人預后情況分為預后良好組（52例）和預后不良組（28例）。另選取同期門診健康體檢者40名作為對照組。比較各組血清miR-181b-5p、lncRNA LUCAT1表達水平及臨床資料；Pearson法分析miR-181b-5p水平與lncRNA LUCAT1水平的相關性；Logistic回歸分析慢性心力衰竭病人預后的影響因素；受試者工作特征（ROC）曲線分析血清miR-181b-5p、lncRNA LUCAT1水平對慢性心力衰竭病人預后的預測價值。結果：觀察組血清miR-181b-5p、lncRNA LUCAT1表達水平高于對照組，且隨著NYHA心功能分級的升高而升高（P＜0.05）。Pearson相關分析顯示，慢性心力衰竭病人血清miR-181b-5p水平與lncRNA LUCAT1水平呈正相關（r＝0.780，P＜0.001）。多因素Logistic回歸分析顯示，miR-181b-5p、lncRNA LUCAT1、N末端B型利鈉肽（NT-proBNP）、左室舒張末期內徑（LVEDD）、左室收縮末期內徑（LVESD）是慢性心力衰竭病人預后不良的危險因素（P＜0.05），左室射血分數（LVEF）是慢性心力衰竭病人預后的保護因素（P＜0.05）。血清miR-181b-5p、lncRNA LUCAT1二者聯合預測慢性心力衰竭病人預后的ROC曲線下面積（AUC）為0.950，敏感度為89.29%，特異度為98.08%，優于單獨預測（Z二者聯合 vs miR-181b-5p＝2.808，Z二者聯合 vs lncRNA LUCAT1＝3.602，P值分別為0.005，0.035）。結論：慢性心力衰竭病人血清miR-181b-5p、lncRNA LUCAT1水平與心功能及預后密切相關，二者聯合檢測對慢性心力衰竭病人預后有較好的臨床價值。

關鍵詞慢性心力衰竭；微小RNA-181b-5p；長鏈非編碼RNA；肺癌相關轉錄物1；預后

doi：10.12102/j.issn.1672-1349.2024.18.019

慢性心力衰竭是以心室重構、心肌炎癥、血流動力學異常、心臟功能障礙等多種心臟異常為特征的復雜臨床綜合征［1］。隨著人口進入老齡化，慢性心力衰竭發病率和死亡率不斷增加，給病人和社會帶來沉重的經濟負擔［2］。因此，尋找早期診斷及預測預后的生物標志物，對慢性心力衰竭的治療具有重要的臨床意義。微小RNA（miRNA）是一種內源性非編碼小RNA，在細胞增殖、分化、遷移、分泌和凋亡等不同生理條件下發揮著關鍵作用［3］。有研究表明，miR-181b-5p不僅參與細胞過程，且與炎癥反應、血管性疾病、腫瘤發生等眾多生物學進程有關［4-5］。長鏈非編碼RNA（lncRNA）是一種新型的非編碼RNA，通過與蛋白質、RNA和DNA相互作用調節基因表達［6］。lncRNA肺癌相關轉錄物1（LUCAT1）位于人類5號染色體q14.3區反義鏈，最早在吸煙的肺癌病人中發現，且與肺癌病人的不良預后有關［7］。有研究顯示，抑制lncRNA LUCAT1表達可減輕心肌細胞損傷，進而發揮保護心肌的作用［8］。目前，慢性心力衰竭病人血清miR-181b-5p、lncRNA LUCAT1表達水平及其與預后的關系研究報道較少。本研究通過檢測慢性心力衰竭病人血清miR-181b-5p、lncRNA LUCAT1表達水平，分析二者與慢性心力衰竭病人病情嚴重程度及預后的關系，以期為慢性心力衰竭病人的診治和預后改善提供參考。

1資料與方法

1.1研究對象

選取2020年1月—2021年1月在我院治療的慢性心力衰竭病人80例（觀察組），根據美國紐約心臟病協會（NYHA）心功能分級［9］將病人分為Ⅱ級組（34例）、Ⅲ級組（28例）和Ⅳ級組（18例）；以電話及門診復查的方式對慢性心力衰竭病人進行1年隨訪，觀察病人預后，根據病人預后情況分為預后良好組（52例）和預后不良組（28例）。納入標準：符合慢性心力衰竭的診斷標準［10］；年齡18～80歲；入院后經超聲心動圖進一步檢查并確診；所有研究對象對本研究內容知曉，并自愿簽署同意書。排除標準：伴有先天性心臟病、急性心肌炎等疾??；病例資料不完整；惡性腫瘤晚期；自身免疫性疾病等。本研究遵循《世界醫學協會赫爾辛基宣言》。另選取同期門診健康體檢者40名作為對照組。

1.2方法

1.2.1樣本收集

抽取慢性心力衰竭病人入院次日清晨、對照組體檢當天空腹靜脈血3～5 mL于干燥試管，以3 500 r/min離心10 min（離心半徑12 cm），分離血清后，分裝于無菌EP管中，于－20 ℃冰箱中保存，待檢。

1.2.2血清miR-181b-5p和lncRNA LUCAT1水平檢測

采用RNA提取試劑盒（上海生工生物有限公司）提取血清樣品總RNA，使用逆轉錄試劑盒（德國Qiagen公司）按說明書逆轉錄合成cDNA。實時熒光定量聚合酶鏈式反應（real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction，qRT-PCR）檢測血清miR-181b-5p和lncRNA LUCAT1相對表達量。根據ChamQ Universal SYBR qPCR Master Mix試劑盒（南京諾唯贊生物科技股份有限公司）說明書配制反應體系，反應程序：95 ℃預變性5 min，95 ℃變性10 s，60 ℃退火1 min，72 ℃延伸30 s，40個循環。在ABI 7500 Fast系統上進行qRT-PCR。以U6、GAPDH作為內參，根據2－△△Ct法計算miR-181b-5p、lncRNA LUCAT1基因的相對表達量?；蛞锝涇浖O計后由上海生工生物工程有限公司合成，引物序列見表1。

1.2.3觀察指標

慢性心力衰竭病人入院次日清晨、對照組體檢當天采用超聲心動圖測定左室射血分數（LVEF）、左室舒張末期內徑（LVEDD）、左室收縮末期內徑（LVESD）。采用酶聯免疫吸附法試劑盒（貨號：ml061452）檢測N末端B型利鈉肽（NT-proBNP），試劑盒購自上海酶聯生物科技有限公司。

1.3統計學處理

采用SPSS 25.0統計學軟件進行數據分析。符合正態分布的定量資料以均數±標準差（x±s）表示，兩組間比較采用獨立樣本t檢驗，多組間比較采用單因素方差分析，進一步兩兩比較行SNK-q檢驗；定性資料以例數、百分比（%）表示，采用χ2檢驗。Pearson法分析慢性心力衰竭病人血清miR-181b-5p水平與lncRNA LUCAT1水平的相關性；Logistic回歸分析慢性心力衰竭的影響因素；受試者工作特征（ROC）曲線分析血清miR-181b-5p和lncRNA LUCAT1水平對慢性心力衰竭病人預后的預測價值。以P＜0.05為差異有統計學意義。

2結果

2.1兩組臨床資料比較

與對照組比較，觀察組LVEF降低，NT-proBNP、LVEDD、LVESD升高，差異均有統計學意義（P＜0.001）。詳見表2。

2.2不同NYHA心功能分級的慢性心力衰竭病人血清miR-181b-5p、lncRNA LUCAT1表達水平比較

隨著NYHA心功能分級的升高，慢性心力衰竭病人血清miR-181b-5p、lncRNA LUCAT1表達水平逐漸升高（P＜0.05）。詳見表3。

2.3慢性心力衰竭病人血清miR-181b-5p水平與lncRNA LUCAT1水平的相關性分析

Pearson法分析顯示，慢性心力衰竭病人血清miR-181b-5p水平與lncRNA LUCAT1水平呈正相關（r＝0.780，P＜0.001）。詳見圖1。

2.4不同預后的慢性心力衰竭病人臨床資料比較

與預后良好組比較，預后不良組LVEF降低，NT-proBNP、LVEDD、LVESD升高，差異均有統計學意義（P＜0.001）。詳見表4。

2.5不同預后的慢性心力衰竭病人血清miR-181b-5p、lncRNA LUCAT1表達水平比較

與預后良好組比較，預后不良組miR-181b-5p、lncRNA LUCAT1表達水平增加（P＜0.001）。詳見表5。

2.6慢性心力衰竭病人預后的影響因素

以慢性心力衰竭病人預后為因變量（預后不良＝1，預后良好＝0），以血清miR-181b-5p、lncRNA LUCAT1、NT-proBNP、LVEF、LVEDD、LVESD為自變量進行多因素Logistic回歸分析。結果顯示：miR-181b-5p、lncRNA LUCAT1、NT-proBNP、LVEDD、LVESD是慢性心力衰竭病人預后不良的危險因素（P＜0.05），LVEF是慢性心力衰竭病人預后的保護因素（P＜0.05）。詳見表6。

2.7血清miR-181b-5p、lncRNA LUCAT1對慢性心力衰竭病人預后的預測價值

血清miR-181b-5p預測慢性心力衰竭病人預后的ROC曲線下面積（area under curve，AUC）為0.763；血清lncRNA LUCAT1預測慢性心力衰竭病人預后的AUC為0.882；二者聯合檢測預測慢性心力衰竭病人預后的AUC為0.950，聯合檢測優于血清miR-181b-5p、lncRNA LUCAT1單獨檢測（Z二者聯合 vs miR-181b-5p＝2.808，Z二者聯合 vs lncRNA LUCAT1＝3.602，P值分別為0.005，0.035）。詳見表7、圖2。

3討論

慢性心力衰竭為中老年人的常見心血管疾病，涉及不同的病理生理途徑，是多種心血管疾病發展到終末期的臨床表現［11］。慢性心力衰竭病人病情不斷發展，快速準確的疾病診斷、及時的醫療干預，對病人的臨床治療和預后改善具有重要的意義。因此，迫切需要尋找與慢性心力衰竭臨床和預后相關的新型血清標志物，準確識別病人病情變化，及時調整治療策略。

miRNA是由細胞分泌并在體液中廣泛存在，具有高度的序列保守性、時序性表達和組織特異度，使其成為有研究價值的生物標志物［12］。劉蓉芳等［13］研究顯示，miRNA在心肌中特異度表達，并參與慢性心力衰竭的發生發展。關于miR-181b-5p的研究，目前在腫瘤細胞生物學功能較多，參與胃癌、卵巢癌、前列腺癌、口腔鱗癌、肝癌等多種癌癥的發生發展［14］。Qin等［15］研究表明，miR-181b-5p在膽囊癌腫瘤組織中顯著上調，miR-181b-5p抑制劑加劇了膽囊癌細胞活力在缺氧條件下的降低。Chang等［16］研究證實，miR-181b-5p在心肌病引起的心力衰竭中表達顯著上調，促進了心肌細胞自噬和凋亡。本研究結果顯示，慢性心力衰竭病人血清miR-181b-5p高于對照組，且隨著NYHA心功能分級升高，其表達水平逐漸升高；預后不良組血清miR-181b-5p高于預后良好組，提示血清miR-181b-5p水平可初步判斷慢性心力衰竭病人的病情嚴重程度和預后。

lncRNA參與心肌肥大、心肌纖維化、心律失常、心臟炎癥和血管新生等病理變化，是控制心臟生理和病理調節網絡的核心樞紐［17］。lncRNA LUCAT1在腎癌、卵巢癌、胃癌等多種惡性腫瘤中表達上調，是潛在的腫瘤診斷和預后評估生物標志物［18］。Kuai等［19］研究顯示，成年克羅恩病血清lncRNA LUCAT1上調表達，且與疾病的嚴重程度呈正相關，可作為判斷該疾病嚴重程度和預后情況的生物標志物。陳婉斐等［20］研究顯示，lncRNA LUCAT1在糖尿病心肌病中高表達，敲除lncRNA LUCAT1可減輕高糖誘導的心肌細胞損傷。本研究結果顯示，慢性心力衰竭病人lncRNA LUCAT1表達水平隨著NYHA心功能分級的升高顯著上調，預后不良組lncRNA LUCAT1表達水平高于預后良好組，提示血清lncRNA LUCAT1水平可能成為慢性心力衰竭病人臨床和預后的潛在標志物；進一步研究顯示，血清miR-181b-5p水平與lncRNA LUCAT1水平呈正相關；ROC曲線顯示，miR-181b-5p、lncRNA LUCAT1二者聯合預測慢性心力衰竭病人預后的效能優于單獨預測，二者對慢性心力衰竭病人預后具有重要的臨床價值。

有研究表明，NT-proBNP可廣泛用于慢性心力衰竭的診斷、療效評估、預后預測和危險分層等，隨著NYHA心功能分級加重NT-proBNP水平升高［21］。本研究結果顯示，與對照組相比，慢性心力衰竭病人NT-proBNP升高（P＜0.05），預后不良組NT-proBNP水平高于預后良好組（P＜0.05）；多因素Logistic回歸分析結果顯示，miR-181b-5p、lncRNA LUCAT1、NT-proBNP、LVEDD、LVESD是慢性心力衰竭病人預后不良的危險因素（P＜0.05），LVEF是慢性心力衰竭病人預后的保護因素（P＜0.05）。提示應密切關注相關影響因素，及時采取干預措施，改善病人預后。

綜上所述，慢性心力衰竭病人血清miR-181b-5p、lncRNA LUCAT1水平與病情嚴重程度及預后密切相關，二者聯合檢測對慢性心力衰竭病人預后有較好的預測價值。然而miR-181b-5p、lncRNA LUCAT1參與慢性心力衰竭發生發展的具體機制仍需進一步深入探討。

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（收稿日期：2023-02-06）

（本文編輯薛妮）