羊奶改善糖尿病模型小鼠肝、腎病理變化的作用研究

摘 要：

本試驗(yàn)旨在研究綿羊奶、山羊奶對(duì)2型糖尿病小鼠肝、腎的影響，為臨床預(yù)防和治療糖尿病及其并發(fā)癥提供理論參考。采用乳品分析儀檢測(cè)綿羊奶和山羊奶營(yíng)養(yǎng)成分；通過高脂飲食聯(lián)合鏈脲佐菌素（streptozotocin，STZ，于第5周完成STZ注射）誘導(dǎo)構(gòu)建2型糖尿病（type 2 diabetes mellitus，T2DM）小鼠模型，糖尿病小鼠隨機(jī)分為糖尿病模型組（diabetes model control，DMC）、綿羊奶組（Sheep）和山羊奶組（Goat），每組10只，同時(shí)設(shè)立對(duì)照組（Con）。綿羊奶組和山羊奶組小鼠從第1周開始就飼喂羊奶，持續(xù)到第9周結(jié)束，每周稱量小鼠的體重和攝食量；在第4、9周末分別檢測(cè)小鼠葡萄糖耐量；第9周末收集小鼠血液和尿液，檢測(cè)血脂四項(xiàng)、尿素氮、肌酐、尿白蛋白及尿肌酐水平。Real time-PCR檢測(cè)肝、腎中IL-6、TNF-α、IL-1β、TGF-β1 mRNA的表達(dá)豐度。結(jié)果顯示，通過乳品分析儀發(fā)現(xiàn)，綿羊奶的脂肪、蛋白質(zhì)、乳糖、總干物質(zhì)含量均顯著高于山羊奶（Plt;0.01）；在注射STZ之前，與對(duì)照組相比，第2～4周DMC組小鼠的體重顯著上升（Plt;0.01），在第3、4周時(shí)，Sheep組小鼠的體重較DMC組體重顯著下降（Plt;0.01）；注射STZ之后，DMC組小鼠的體重較對(duì)照組顯著下降（Plt;0.05），而在第9周時(shí)，與DMC組相比，Sheep組小鼠的體重下降顯著減緩（Plt;0.01）。通過葡萄糖耐量試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，在第9周末，較DMC組，Sheep組和Goat組小鼠的葡萄糖耐受試驗(yàn)曲線下面積顯著下降（Plt;0.05）。對(duì)血清和尿液進(jìn)行分析發(fā)現(xiàn)，Sheep、Goat組血脂四項(xiàng)、尿白蛋白含量與DMC組相比有下降的趨勢(shì)（Pgt;0.05），但血清尿素氮、血肌酐以及尿肌酐含量顯著下降（Plt;0.05）。Sheep組和Goat組減輕了糖尿病小鼠肝脂肪變性以及腎小球病變和腎小管上皮細(xì)胞空泡變性。與DMC組相比，Sheep組小鼠肝和腎IL-6、TNF-α、IL-1β、TGF-β1 mRNA含量都呈顯著下降，Goat組小鼠除了腎中TNF-α含量無顯著變化外，其他炎癥因子的mRNA含量均顯著下降（Plt;0.05）。本研究發(fā)現(xiàn)，綿羊奶和山羊奶能夠顯著抑制T2DM小鼠的攝食量，延緩糖尿病小鼠的體重下降，提高葡萄糖耐受能力以及有效減輕肝、腎組織病理?yè)p傷、明顯抑制肝、腎炎癥，對(duì)糖尿病及其并發(fā)癥的治療發(fā)揮有效作用，且綿羊奶的緩解效果優(yōu)于山羊奶。

關(guān)鍵詞：

山羊奶；綿羊奶；糖尿病；肝；腎

中圖分類號(hào)：

S872 """"文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A """"文章編號(hào)： 0366-6964（2025）02-0870-13

收稿日期：2024-03-22

基金項(xiàng)目：合作共建金昌奶綿羊試驗(yàn)示范基地（K4030220448）；“十四五”國(guó)家重點(diǎn)研發(fā)計(jì)劃項(xiàng)目（2022YFD1600101）；陜西省畜禽育種“兩鏈”融合重點(diǎn)專項(xiàng)（2022GD-TSLD-46-0202）

作者簡(jiǎn)介：王曉飛（1999-），男，河北石家莊人，碩士，主要從事綿羊奶生物功能性研究，E-mail： 3292486551@qq.com；衛(wèi)夢(mèng)瑤（1999-），女，河南濟(jì)源人，碩士，主要從事綿羊奶的生物活性物質(zhì)開發(fā)研究，E-mail： 15928622407@163.com。王曉飛和衛(wèi)夢(mèng)瑤為同等貢獻(xiàn)作者

*通信作者：張 磊，主要從事奶羊的育種與繁殖研究，E-mail：zhanglei07dongke@163.com；宋宇軒，主要從事綿羊奶營(yíng)養(yǎng)與功能解析和奶羊產(chǎn)業(yè)發(fā)展關(guān)鍵技術(shù)研究，E-mail： yuxuan_song2016@163.com

Study on the Role of Ewe’s Milk in Ameliorating Pathological Changes in the Liver and

Kidney of Mice in a Diabetes Model

WANG" Xiaofei1， WANG" Bosen2， WEI" Mengyao1， JIANG" Luyao1， XU" Ganggang1， LIU" Jiaxin1， MA" Yingtian1， WANG" Li1， SONG" Yuxuan1*， ZHANG" Lei1*

（1.College of Animal Science and Technology， Northwest Aamp;F University， Yangling 712100，" China;

2.Animal Husbandry and Veterinary Technology Promotion Station of Mei County， Baoji 722300，" China）

Abstract：

The purpose of this study is to investigate the effects of sheep milk and goat milk on the liver and kidney of type 2 diabetic mice， and provide theoretical reference for clinical prevention and treatment of diabetes and its complications. Dairy analyzer was used to detect the nutritional components of sheep milk and goat milk. The type 2 diabetes mellitus（T2DM） mouse models were induced by high-sugar and high-fat diet combined with streptozotocin （STZ， STZ injection was conducted in week 5）. The diabetic mice were randomly divided into diabetes model control （DMC） group， sheep milk group （Sheep） and goat milk group （Goat） with 10 mice in each group. A control group （Con） was also set up. Mice in Sheep group and Goat group were fed sheep milk and goat milk respectively from the first week until the end of the ninth week， and the body weight of mice and their food intake were measured every week. Glucose tolerance of mice was measured at the end of the 4th and 9th week. At the end of the 9th week， blood and urine were collected from mice， and the levels of blood lipids， blood urea nitrogen， serum creatinine， urinary albumin， and urinary creatinine were determined. Using Real time-PCR to test the expression abundance of mRNA of IL-6， TNF-α， IL-1β and TGF-β1 in the liver and kidneys. It was found that the fat， protein， lactose and total solid content of sheep milk were significantly higher than those of goat milk （Plt;0.01） based on dairy analyzer analysis. Before the injection of STZ， the body weight of DMC mice at week 2 to week 4 increased significantly compared with the Con group （Plt;0.01）. At the 3rd and 4th week， the body weight of mice in Sheep group decreased significantly compared with

DMC group （Plt;0.01）. After STZ injection， the body weight of DMC mice decreased significantly （Plt;0.05） compored with Con group. However， at the end of the 9th week， compared with the DMC group， the weight loss rate of mice in Sheep group slowed down significantly （Plt;0.01）. In the glucose tolerance test， it was found that the area under the glucose tolerance test curve of mice in Sheep and Goat groups decreased significantly compared with the DMC group （Plt;0.05） at the end of the 9th week. Analysis of serum and urine samples showed that the blood lipid levels and urine albumin levels of mice in Sheep and Goat groups tended to decrease compared with the DMC group， but there was no significant difference （Pgt;0.05）. However， the serum urea nitrogen and blood creatinine levels， as well as the urine creatinine level， decreased significantly （Plt;0.05）. In addition， the HE staining results showed that sheep and goat milk could alleviate liver steatosis， glomerular lesions and renal tubular epithelial cell vacuolar degeneration in diabetic mice. Compared with the DMC group， the mRNA content of IL-6， TNF-α， IL-1β， and TGF-β1 in the liver and kidneys of the Sheep group mice showed a significant decrease，while in the Goat group mice， the content of other inflammatory factors also significantly decreased， except the TNF-α of kidney. In conclusion， sheep milk and goat milk can significantly inhibit the intake of T2DM mice， delay the weight loss of diabetic mice， improve glucose tolerance as well as effectively reduce the histopathological damage of liver and kidney， significantly inhibit the inflammation of liver and kidney， and play an effective role in the treatment of diabetes mellitus and its complications， and the mitigating effect of sheep milk is better than that of goat milk.

Key words：

goat milk; sheep milk; diabetes; liver; kidney

*Corresponding authors： ZHANG Lei，E-mail：zhanglei07dongke@163.com；SONG Yuxuan，E-mail： yuxuan_song2016@163.com

糖尿病是一種機(jī)體胰島素分泌不足或?qū)σ葝u素反應(yīng)異常，從而導(dǎo)致血糖水平異常升高的疾病［1］。糖尿病是全球最常見、增長(zhǎng)最快的疾病之一，預(yù)計(jì)糖尿病人群到2045年將增加至6.93億，比2017年增長(zhǎng)50%以上［2］。長(zhǎng)期高血糖會(huì)破壞體內(nèi)平衡，導(dǎo)致氧化應(yīng)激，誘發(fā)微血管、神經(jīng)和免疫系統(tǒng)損傷，因此，糖尿病會(huì)引起多種并發(fā)癥［3］。研究表明，肝組織病變是一種常見糖尿病并發(fā)癥，糖尿病引起的高血糖會(huì)增加肝損傷和纖維化的風(fēng)險(xiǎn)，如不及時(shí)、早期干預(yù)，會(huì)發(fā)展為不可逆的肝硬化和肝癌，嚴(yán)重影響患者健康［4］。一項(xiàng)對(duì)糖尿病患者的研究表明，約有66.6%的糖尿病患者患有非酒精性脂肪肝（non-alcoholic fatty liver disease，NAFLD）［5］。2型糖尿病（type 2 diabetes mellitus，T2DM）患病時(shí)間的延長(zhǎng)會(huì)增加NAFLD患者的肝病變和死亡率［6］。因此改善肝病理狀況可能有助于改善糖尿病。此外，糖尿病相關(guān)的代謝異常也會(huì)從結(jié)構(gòu)和功能上損害血管，導(dǎo)致微血管凋亡和纖維化，誘發(fā)糖尿病腎病（diabetic nephropathy，DN）、腎小球萎縮、腎纖維化、腎功能障礙和腎衰竭［7］。DN是T2DM的主要微血管并發(fā)癥之一，也是終末期腎病（end-stage kidney diseas，ESRD）的主要原因［8］。研究表明，約30%～40%的T2DM患者最終可能發(fā)展為DN［9］。可見改善糖尿病患者肝和腎病變具有重要意義。

羊奶營(yíng)養(yǎng)價(jià)值高，富含蛋白質(zhì)、脂肪、礦物質(zhì)、維生素等營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)和各種生物活性物質(zhì)，對(duì)人體健康有多種有益影響。早在明代就有對(duì)羊奶功效的記載：“羊乳無毒，補(bǔ)寒冷虛，潤(rùn)心肺，治消渴；療虛勞，益精氣，補(bǔ)肺、腎氣和小腸氣”［10］。目前也有大量研究表明，羊奶有減輕炎癥、緩解氧化應(yīng)激、改善腸道功能、調(diào)控機(jī)體葡萄糖穩(wěn)態(tài)等功能［11］。羊奶在改善糖尿病方面表現(xiàn)出強(qiáng)大的潛力，Delgadillo-Puga等［12］發(fā)現(xiàn)，攝入山羊奶可以減少炎癥標(biāo)志物和增加骨骼肌中的能量消耗和線粒體含量，起到預(yù)防高脂肪飲食小鼠的肥胖、肝脂肪變性和胰島素抵抗的作用。Liu等［13］也發(fā)現(xiàn)，山羊奶通過增強(qiáng)肝和骨骼肌AMP激活的蛋白激酶活化和調(diào)節(jié)STZ誘導(dǎo)的糖尿病大鼠腸道微生物群來改善葡萄糖穩(wěn)態(tài)。此外，綿羊奶也能增加胰島素抵抗模型小鼠結(jié)腸內(nèi)容物中的阿克曼菌豐度，同時(shí)減緩結(jié)腸損傷；并影響肝組織中有關(guān)糖異生和糖酵解酶的表達(dá)量，以此調(diào)節(jié)小鼠的糖代謝情況［14］。然而關(guān)于羊奶對(duì)糖尿病并發(fā)癥的作用鮮有報(bào)道，因此本文以高脂飲食聯(lián)合STZ誘導(dǎo)構(gòu)建T2DM模型，探究綿羊奶、山羊奶對(duì)糖尿病小鼠肝、腎的影響。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

1.1.1 綿羊奶、山羊奶的采集

綿羊奶和山羊奶分別采集自金昌奶綿羊試驗(yàn)示范基地的東弗里生奶綿羊和西北農(nóng)林科技大學(xué)薩能奶山羊原種場(chǎng)的西農(nóng)薩能奶山羊。在秋季的早7：00同時(shí)采集兩種奶樣，儲(chǔ)存于無菌的50 mL離心管中，置于-20℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

1.1.2 試驗(yàn)動(dòng)物

選用健康7周齡雄性C57BL/6J小鼠40只，購(gòu)自斯貝福北京生物技術(shù)有限公司，許可證號(hào)：SCXK（京）2019-0010。

1.1.3 動(dòng)物日糧

生長(zhǎng)繁殖飼料購(gòu)自江蘇協(xié)同生物，高脂日糧購(gòu)自戴茨生物科技（無錫）有限公司（HF60）。

1.1.4 試驗(yàn)試劑

鏈脲佐菌素（STZ，索萊寶，S8050）；葡萄糖、生理鹽水、0.5 mL肝素抗凝離心管（江蘇康健醫(yī)療用品有限公司）；SYBR PCR定量mix（康為世紀(jì)）；Primer Script RT Reagent Kit with gDNA Eraser試劑盒（TaKaRa，大連）；TRIzol Reagent（TaKaRa）。

1.1.5 試驗(yàn)設(shè)備

乳品分析儀（Lactoscan LWA，保加利亞）；小鼠限位器（GDQ-2，恒奧生物）；血糖檢測(cè)儀（580，魚躍）；小鼠代謝籠（DXL-XS，蘇州市馮氏實(shí)驗(yàn)動(dòng)物設(shè)備有限公司）；血清全自動(dòng)生化分析儀（Chemray 800，雷杜）；尿液全自動(dòng)生化分析儀（BS200，邁瑞生物）；組織研磨儀（MP Fastprep-2，美國(guó)MP生物醫(yī)療公司）；PCR擴(kuò)增儀（9902，美國(guó)ABI公司）；Votex振蕩器（QT-1，上海琪特分析儀器有限公司）；實(shí)時(shí)定量PCR儀器（IQ5，美國(guó)Bio-rad公司）；酶標(biāo)儀（Multiskcan FC，Thermo Scientific）。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 乳品質(zhì)分析

取新鮮綿羊奶置于50 mL無菌離心管中，使用乳品分析儀檢測(cè)綿羊奶中的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)并記錄。新鮮綿羊奶、山羊奶參考劉佳欣［14］的計(jì)算方法：新鮮綿羊奶按照250 mL/60 kg人每日飲用乳量，換算成小鼠體重后并按照人和小鼠基礎(chǔ)代謝率的差異倍數(shù)（按10倍計(jì)算）折合成乳中干物質(zhì)的量（每日0.22g·只－1）飼喂給小鼠，并且每天更換奶樣以保證攝入始終是新鮮奶樣。綿羊奶和山羊奶的飼喂量分別為1.25 mL、1.8 mL。

1.2.2 模型建立、分組與處理

根據(jù)Qiao等［15］的方法構(gòu)建糖尿病模型，小鼠先以60%脂肪供能的高脂鼠糧（high-fat diet，HFD）喂養(yǎng)4周，然后連續(xù)7 d腹腔注射80 mg·kg－1 STZ（溶解于新鮮制備的枸櫞酸緩沖液（0.1 mol·L－1，pH 4.5）），隨后再高脂飼喂4周誘導(dǎo)糖尿病模型。動(dòng)物在第一次給藥前過夜禁食，注射后允許再次進(jìn)食。第一次注射STZ后第7天，測(cè)定尾靜脈血葡萄糖水平，血糖濃度在11.1 mmol·L－1以上的小鼠，則認(rèn)為造模成功。

試驗(yàn)分組情況如下：1）對(duì)照組（Con）：飼喂正常日糧+注射生理鹽水；2）糖尿病模型組（DMC）：飼喂高脂日糧+注射STZ；3）綿羊奶組（Sheep）：飼喂高脂日糧+注射STZ+1.25 mL綿羊奶；4）山羊奶組（Goat）：飼喂高脂日糧+注射STZ+1.8 mL山羊奶。每組10只小鼠，每籠2只飼養(yǎng)在西北農(nóng)林科技大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院鼠房［溫度（23℃±3℃）］。

1.2.3 靜脈葡萄糖耐量試驗(yàn)（IGTT）

小鼠第4、9周末，禁食不禁水12 h，按照小鼠體重腹腔注射10%的葡萄糖（注射量為每1 g小鼠10 μL的10%葡萄糖）。分別在腹腔注射0、15、30、45、60、90和120 min后通過尾靜脈測(cè)量小鼠血糖。用Graph Pad 9.0軟件計(jì)算出曲線下面積（area under curve，AUC），根據(jù)AUC分析小鼠對(duì)葡萄糖的耐受性。

1.2.4 樣品采集

試驗(yàn)結(jié)束前，于代謝籠收集小鼠新鮮的尿液，過濾后于-80℃保存待測(cè)。采集樣品前一天晚，小鼠禁食不禁水12 h，乙烯麻醉后，眼眶采血收集血液樣本于含有肝素的抗凝管中，以3 000 r·min－1離心15 min后吸取上層清液，-80℃保存待測(cè)。血液采集完畢后迅速解剖并剝離肝、腎，并稱重，之后將一部分肝和左腎放于4%多聚甲醛溶液中固定，剩余肝與右腎經(jīng)液氮速凍后放于-80℃保存以待RNA檢測(cè)。

1.2.5 血液和尿液指標(biāo)的測(cè)定

血清尿素氮（blood urea nitrogen，BUN）、肌酐（serum creatinine，SCR）、總膽固醇（cholesterol，CHO）、甘油三酯（triglyceride，TG）、高密度脂蛋白膽固醇（high-density lipoprotein，HDL）、低密度脂蛋白膽固醇（low-density lipoprotein，LDL）使用血清全自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)。

尿液白蛋白和肌酐水平使用尿液全自動(dòng)生化分析儀進(jìn)行測(cè)定。

1.2.6 肝、腎病理組織切片觀察

將經(jīng)多聚甲醛固定的肝和腎進(jìn)行常規(guī)脫水，石蠟包埋，切片，經(jīng)HE染色后，中性樹膠封片，光鏡下觀察組織病變。

1.2.7 RNA提取及RT-PCR檢測(cè)

利用TRIzol試劑提取肝、腎組織總RNA，用超微量分光光度計(jì)檢測(cè)RNA質(zhì)量，使用Primer Script RT Reagent Kit with gDNA Eraser試劑盒（TaKaRa，大連）將RNA反轉(zhuǎn)錄為cDNA。利用Primer Premier 5.0設(shè)計(jì)引物（表1），由生工生物公司合成，以GAPDH為內(nèi)參進(jìn)行實(shí)時(shí)定量試驗(yàn)。

RT-qPCR反應(yīng)體系（20 μL）：模板cDNA 20 ng，正反向引物（10 μmol·L－1）各0.8 μL，2×Es Taq Master-Mix 10 μL，用滅菌雙蒸水補(bǔ)足20 μL。PCR反應(yīng)條件：94℃預(yù)變性3 min；94℃ 30 s，59℃ 30 s，72℃ 60 s，29個(gè)循環(huán)；72℃延伸5 min；4℃保溫。每個(gè)樣品均3次重復(fù)，反應(yīng)結(jié)束后，觀察熒光擴(kuò)增曲線和熔解曲線，相對(duì)定量結(jié)果采用2-△△Ct方法進(jìn)行計(jì)算。

1.2.8 數(shù)據(jù)處理與分析

所有數(shù)據(jù)采用GraphPad Prism 9計(jì)算分析，采用“均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）”表示，多組間比較和兩兩比較分別采用單因素方差分析和LSD檢驗(yàn)。P值小于0.05認(rèn)為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 綿羊奶和山羊奶營(yíng)養(yǎng)成分分析

如表2所示，平均100 g綿羊奶中脂肪占5.71%，蛋白質(zhì)占5.52%，乳糖占5.34%，灰分占0.87%，非脂固形物含量占11.80%，總干物質(zhì)含量占18.06%。而平均100 g山羊奶中脂肪占4.23%，蛋白質(zhì)占3.92%，乳糖占3.73%，灰分占0.61%，非脂固形物含量占8.28%，總干物質(zhì)含量占12.51%。綿羊奶的脂肪、蛋白質(zhì)、乳糖、總干物質(zhì)含量均顯著高于山羊奶（Plt;0.01），是良好的能量來源。

2.2 綿羊奶、山羊奶對(duì)糖尿病小鼠體重和攝食量的影響

由表3可得，在2～4周，與Con組相比，DMC組小鼠的體重顯著上升（Plt;0.01）；在第3、4周時(shí)，Sheep組小鼠的體重較DMC組體重顯著下降（Plt;0.01）。注射STZ之后（第4周之后），與Con組相比，DMC組小鼠的體重均顯著下降（Plt;0.05或Plt;0.01）；在第9周時(shí)，與DMC組相比，Sheep組小鼠的體重下降顯著減緩（Plt;0.01）。

由表4可得，試驗(yàn)過程中與Con組相比，DMC組小鼠的攝食量無顯著差異（Pgt;0.05）。與DMC組相比，在第1、2、3、9周時(shí)Sheep組小鼠的攝食量顯著下降（Plt;0.05）；Goat組小鼠的攝食量在第2、9周時(shí)顯著下降（Plt;0.05）。

2.3 綿羊奶、山羊奶對(duì)糖尿病小鼠血糖的影響

由圖1可知，在第4周末通過尾靜脈檢測(cè)小鼠葡萄糖耐量結(jié)果表明，與Con組相比，DMC組小鼠葡萄糖耐受試驗(yàn)曲線下面積極顯著升高（Plt;0.01），表明其葡萄糖耐受能力下降，而DMC、Sheep、Goat三組無顯著差異（Pgt;0.05），但Sheep、Goat組有下降的趨勢(shì)（圖1A、1B）。

圖1C、1D結(jié)果表明，在第9周末，與Con組相比，DMC組小鼠葡萄糖耐受試驗(yàn)曲線下面極顯著升高（Plt;0.01），然而與DMC組相比，Sheep、Goat組小鼠葡萄糖耐受試驗(yàn)曲線下面積顯著下降（Plt;0.05），表明Sheep、Goat組小鼠葡萄糖耐受能力比DMC組小鼠高。

2.4 綿羊奶、山羊奶對(duì)糖尿病小鼠血清指標(biāo)和尿液指標(biāo)的影響

在第9周末采集各組小鼠的血液和尿液，由圖2可知，與Con組相比，DMC組小鼠的血脂（總膽固醇、甘油三酯、高密度脂蛋白膽固醇、低密度脂蛋白膽固醇）極顯著升高（Plt;0.01，圖2A～2D），血清肌酐和尿素氮含量也極顯著升高（Plt;0.01，圖2E、2F），此外，尿白蛋白含量顯著下降（Plt;0.01，圖2G），尿肌酐含量顯著升高（Plt;0.01，圖2H）。Sheep、Goat組血脂四項(xiàng)、尿白蛋白含量與DMC組相比有下降的趨勢(shì)但無顯著差異（Pgt;0.05），然而血清尿素氮、血肌酐以及尿肌酐含量顯著下降（Plt;0.05或Plt;0.01）。

2.5 綿羊奶、山羊奶對(duì)糖尿病小鼠肝組織病理切片的影響

肝HE染色結(jié)果表明，Con組小鼠肝組織結(jié)構(gòu)完整，外觀整齊，細(xì)胞質(zhì)中無明顯脂肪空泡。相反，在DMC組小鼠中，肝細(xì)胞紊亂，可見明顯空泡變化（圖3）。而Sheep組、Goat組小鼠肝的脂肪空泡明顯減少。

2.6 綿羊奶、山羊奶對(duì)糖尿病小鼠腎組織病理切片的影響

由圖4可見，Con組小鼠腎組織結(jié)構(gòu)清晰， 腎小球囊腔間隙正常， 毛細(xì)血管基底膜均勻無增厚， 腎小管排列規(guī)則， 腎小管上皮細(xì)胞結(jié)構(gòu)正常；而DMC組小鼠腎小管上皮細(xì)胞出現(xiàn)明顯的空泡化，腎小管上皮細(xì)胞結(jié)構(gòu)異常，此外腎小球囊腔間隙有所增大，腎小球與囊腔部分黏連，而Sheep組和Goat組小鼠的腎病變程度有所減少，腎小球囊腔間隙較正常且腎小管的空泡化有所減少。

2.7 綿羊奶、山羊奶對(duì)糖尿病小鼠肝、腎炎癥的影響

由圖5可見，與Con組相比，DMC組小鼠的肝、腎炎癥相關(guān)因子（IL-6、TNF-α、IL-1β、TGF-β1）mRNA含量呈極顯著上升（Plt;0.01）；與DMC組相比，Sheep組小鼠肝IL-6、TNF-α、IL-1β、TGF-β1 mRNA含量都呈極顯著下降（Plt;0.01），腎IL-6、IL-1β、TGF-β1 mRNA含量極顯著下降（Plt;0.01），TNF-α mRNA含量顯著下降（Plt;0.05）。此外，與DMC組相比，Goat組小鼠肝IL-6 mRNA含量顯著下降（Plt;0.05），TNF-α、IL-1β、TGF-β1 mRNA含量都極顯著下降（Plt;0.01），腎IL-6、IL-1β、TGF-β1 mRNA含量都極顯著下降（Plt;0.01）。

3 討 論

奶制品中含有多種具有生物活性的物質(zhì)，對(duì)人類健康具有多種益處，因此，深入研究奶制品及其活性成分已成為當(dāng)前研究的熱點(diǎn)［11］。羊奶是世界上第三大乳源，僅次于牛奶和水牛奶，是最接近母乳的乳制品。羊奶具有高營(yíng)養(yǎng)價(jià)值，富含蛋白質(zhì)、脂肪酸、礦物質(zhì)和維生素等多種營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，同時(shí)還含有豐富的生物活性物質(zhì)［16］。其中乳鐵蛋白（lactoferrin，LF）作為羊奶中重要的乳清蛋白，在先天免疫系統(tǒng)中起重要作用［17］，被認(rèn)為是重要的宿主防御分子，并具有廣泛的生理功能，如抗病毒［18］、抗菌［19］、抗炎［20］和抗氧化等活性［21］。Zheng等［22］的研究證明了LF具有緩解海馬區(qū)氧化應(yīng)激的能力。磷脂是乳脂肪的重要成分，可以通過降低脂蛋白膽固醇水平和炎癥因子來改善人體健康，調(diào)節(jié)腸道微生物群，減輕肝組織炎癥［23］；寡糖可以調(diào)節(jié)高脂飲食誘導(dǎo)的肥胖小鼠的腸道菌群，并改善腸道屏障功能［24］。α-酮戊二酸與許多健康益處相關(guān)，包括降低大鼠的膽固醇水平、保護(hù)腸道黏膜和改善腎功能等［25］。

糖尿病是影響全球人類的一種常見慢性疾病。在過去的幾年中，糖尿病的發(fā)病率有所增加，并受到越來越多的關(guān)注［26］。除了糖尿病人群不斷增加外，糖尿病并發(fā)癥還涉及更多組織器官的損傷，如心、腦血管損傷，腎、肝損傷等。肝參與身體的代謝過程，具有重要的功能，特別是在葡萄糖穩(wěn)態(tài)方面。肝中的胰高血糖素通過一系列反應(yīng)促進(jìn)糖原分解。糖原合成主要受胰島素調(diào)節(jié)［27］。近年來，越來越多的研究報(bào)道了糖尿病與慢性肝病、肝硬化、肝癌甚至結(jié)直腸癌、胰腺癌、腎癌的關(guān)系［28］。最近，已有研究報(bào)道綿羊奶和山羊奶對(duì)糖尿病具有緩解作用［12-14］。

本研究中，DMC組小鼠體重在喂食HFD飲食期間逐漸增加，而在注射STZ之后迅速下降，這與報(bào)道結(jié)果一致［29］。而在第3、4周Sheep組小鼠體重較DMC組顯著下降，可能是因?yàn)榫d羊奶營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)豐富，滿足了小鼠的一部分營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)需求抑制了小鼠的攝食量；在第9周小鼠的體重上升可能是因?yàn)榫d羊奶緩解了糖尿病小鼠的損傷從而緩解了糖尿病小鼠的體重下降。

在糖尿病患者中，胰島素抵抗是主要的特征。胰島素抵抗會(huì)導(dǎo)致機(jī)體葡萄糖代謝紊亂，IGTT試驗(yàn)可以反映機(jī)體對(duì)葡萄糖的調(diào)節(jié)能力，其曲線下面積越低證明機(jī)體對(duì)葡萄糖的耐受程度越高，機(jī)體越健康［14］。本試驗(yàn)結(jié)果表明，綿羊奶和山羊奶可以改善小鼠的葡萄糖耐受能力。這與先前研究中山羊奶粉可以改善糖尿病小鼠葡萄糖耐受能力的結(jié)果一致［30］。羊奶改善小鼠葡萄糖耐受能力的作用可能與羊奶富含多酚、細(xì)菌脂肪酸（FA）、單不飽和脂肪酸（MUFA）、二十二碳六烯酸（DHA）、二十碳五烯酸（EPA）等具有調(diào)節(jié)血糖的生物活性物質(zhì)相關(guān)［12，31］。

T2DM會(huì)導(dǎo)致肝發(fā)生脂肪變性、血脂異常升高等。糖尿病血脂異常患者通常表現(xiàn)為TC、TG和LDL水平顯著升高，HDL水平降低［32］。然而也有研究報(bào)道HDL水平在糖尿病患者體內(nèi)顯著升高［14］。劉鑫等［33］通過高脂飲食聯(lián)合STZ成功構(gòu)建了糖尿病模型，結(jié)果發(fā)現(xiàn)糖尿病小鼠血脂含量顯著升高，肝出現(xiàn)肝細(xì)胞腫脹，肝小葉結(jié)構(gòu)紊亂，脂肪變性，有炎性細(xì)胞浸潤(rùn)等現(xiàn)象。本試驗(yàn)的結(jié)果與其結(jié)果類似：與Con組相比，DMC小鼠血清中TC、TG、HDL、LDL水平均顯著升高，HE染色結(jié)果表明DMC組小鼠肝出現(xiàn)明顯的脂肪變性、肝細(xì)胞結(jié)構(gòu)紊亂、肝臟發(fā)生炎癥等現(xiàn)象，表明本試驗(yàn)?zāi)Ｐ蜆?gòu)建成功。而與DMC組相比，Sheep組和Goat組小鼠都不同程度的緩解了肝損傷，表明綿羊奶和山羊奶可以緩解糖尿病小鼠的肝損傷。

DN是糖尿病嚴(yán)重的微血管并發(fā)癥，是一種慢性進(jìn)行性疾病，是終末期腎病的常見病因，具有較高的發(fā)病率和死亡率［34］。腎的主要功能是過濾和排泄血液中的代謝廢物，調(diào)節(jié)電解質(zhì)、酸度和血容量以及促進(jìn)血細(xì)胞的產(chǎn)生［35］。糖尿病患者腎的主要組織學(xué)改變位于腎小球，包括腎小球硬化、基底膜增厚和腎小球系膜擴(kuò)張。腎小管間質(zhì)和小動(dòng)脈病變通常被描述為1型糖尿病患者的晚期病變。然而，一些T2DM患者可以表現(xiàn)為小管間質(zhì)和/或小動(dòng)脈病變，并保留腎小球結(jié)構(gòu)［36］。在本研究中，DMC組小鼠腎表現(xiàn)為腎小球硬化、基底膜增厚以及腎小管上皮細(xì)胞發(fā)生空泡化，與上述報(bào)道結(jié)果一致。而Sheep組和Goat組小鼠的腎組織病理情況有一定的緩解。

此外，在肥胖人群中，高瘦素和低脂聯(lián)素濃度導(dǎo)致幾種炎癥因子（即TNF-α、IL-6、IL-1β）的分泌增加，從而促進(jìn)炎癥狀態(tài)，也導(dǎo)致細(xì)胞外基質(zhì)積累和腎纖維化［37］。在本試驗(yàn)中，DMC組腎組織發(fā)生了嚴(yán)重的炎癥反應(yīng)，與上述報(bào)道一致，Sheep組和Goat組與DMC組相比，肝、腎炎癥因子顯著下降，表明綿羊奶和山羊奶有較好的抗炎作用。羊奶良好的抗炎作用可能與其獨(dú)特成分如LF、生物活性肽有關(guān)［38］。LF具有抑制單核細(xì)胞產(chǎn)生促炎細(xì)胞因子和趨化因子的作用。多項(xiàng)臨床研究證實(shí)，乳鐵蛋白是一種免疫調(diào)節(jié)劑，可以刺激多核白細(xì)胞的吞噬活性，調(diào)節(jié)細(xì)胞因子和腫瘤壞死因子的產(chǎn)生和釋放，并減少細(xì)胞培養(yǎng)中IL-6和TNF-α的產(chǎn)生［39］。羊奶發(fā)酵產(chǎn)生的KGL3A生物活性肽具有抗氧化和抗菌活性，乳酸菌發(fā)酵的羊奶是抗氧化和抗菌蛋白質(zhì)的來源［40］。

雖然綿羊奶和山羊奶已經(jīng)表現(xiàn)出可以改善T2DM相關(guān)的肝、腎病變，但其對(duì)2型糖尿病具體作用機(jī)理還不完全清楚，需要進(jìn)一步研究闡明且綿羊奶和山羊奶組成復(fù)雜，具體是哪種物質(zhì)發(fā)揮作用尚不清楚，有待于進(jìn)一步研究。

4 結(jié) 論

綿羊奶和山羊奶能夠顯著抑制T2DM小鼠的攝食量，延緩糖尿病小鼠的體重下降，提高葡萄糖耐受能力以及有效減輕肝、腎組織病理?yè)p傷、明顯抑制肝、腎炎癥，對(duì)糖尿病及其并發(fā)癥的治療發(fā)揮有效作用，且綿羊奶的緩解效果優(yōu)于山羊奶。

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（編輯 范子娟）