中圖分類號：S666.1 文獻標識碼：A 文章編號：1000-4440（2025）05-0960-17

Abstract： This study aims to investigate the changes inthe composition and content of flavonoid compounds in Orahmandarin grafted onto different rootstocks during the

fruitdevelopment process，andtoprovideacomprehensiveevaluation.Thiswilloferatheoreticalbasis forcomprehensively utilizingOrahmandarinfruitresourcesfromdiffrentrotstocksanddeterminingtheoptimalharvestperiod.Orahmandarin withPoncirustrifoliateRaf，CitrusXjunosSieboldexTanakaandCitrusreticulataBlancorotstockswereselectedassearch subjectsto investigate thedynamicchanges in15flavonoidcomponents of thepeelandpulpfromJuly2O22 toApril2O23，and thefruitqualitywascomprehensivelyevaluatedusing principal componentanalysis.Theresultsshowed thatthe typesofflavonoidcompoundspresent inboth thepeelandpulpofOrah fruitswerethesame，primarilyincluding hesperidin，neohesperidin，andnaringin.However，teontentdieredsigificantly.econtentsofhesperidinnohesperidin，obiletindiosm tin，tangeretin，sinensetin，rutin，andquercetininthepeelwere higherthanthoseinthepulp.During fruitdevelopment，the overallcontentof variousflavonoidcompoundsinbothtepelandpulpgenerallydecreased.Throughout thedevelopmentperiod，theflavonoidcompoundsinthepulpofOrahgraftedontoPoncirustrifoliateRafrootstockhadthehighestcomprehensive evaluationscoreinJuly，whiletheflavonoidcompoundsinthepeelhadthehighestcomprehensiveevaluationscoreinAugust. Theflavonoidcompounds inthepeelandpulpofOrah graftedonto CitrusXjunos Siebold ex Tanakaand Citrus reticulata Blancorotstocks hadthehighestcomprehensiveevaluationscore inJuly.During theharvestperiod（JanuarytoApril），the highestcomprehensiveevaluationscoreofflavonoidcompounds wasobservedinFebruaryforthe pulpand pelofOrahgraftedontoCitrusreticulataBlancorotstock.ForOrahgraftedontoPoncirus trifoliateRafrotstock，thehighestcomprehensiveevaluationscoreofflavonoidcompoundswasobtainedinJanuaryforboth thepulpandpeel.Theflavonoidcompoundsinthepulpof Orah graftedonto CitrusXjunos Siebold ex Tanaka rotstock hadthe highestcomprehensive evaluationscore inFebruary，while theflavonoidcompounds inthepeehadthehighestscoreinJanuary.Theflavonoidcompounds inthepelofOrahgraftedontoCitrusreticulata Blancorootstock hadahighercomprehensiveevaluationthanotherrotstocks throughoutthedevelopment period，andflavonoidcompounds inthepulp hadahighercomprehensiveevaluationthanotherrotstocks during themature period inJanuary，F(xiàn)ebruary，andApril.Basedonthecomprehensiveevaluationofflavonoidcompounds，theoptimal harvest periodswere Januaryfor Orah mandarin graftedonto Poncirus trifoliateRaf rotstock，F(xiàn)ebruaryfor Orah mandarin graftedonto Citrus reticulata Blancorootstock，and JanuaryorFebruaryforOrah mandaringraftedonto CitrusXjunos SieboldexTanaka rootstock.Forthedevelopmentoffunctionalfoodsrichinflavonoids，OrahmandaringraftedontoCitrusreticulataBlancorootstock is recommended.

Key Words：Orah mandarin；rootstock；fruit；flavonoid compounds；comprehensive evaluati

沃柑是由坦普爾橘橙與丹西紅橘雜交而成的品種，屬于晚熟雜交柑橘品種，具有早結高產(chǎn)、外形美觀、品質(zhì)優(yōu)良、適應性強、抗病能力突出等優(yōu)點。據(jù)不完全統(tǒng)計，截至2023年，廣西沃柑的種植面積已超過 1.133×10⁵hm² ，年產(chǎn)值高達 1×10¹⁰ 元[]。類黃酮是沃柑果實中含量豐富的一類次生代謝物質(zhì)，對果實的色澤和風味有顯著影響，并能提高植物的抗逆性和抗病蟲害能力[。此外，類黃酮化合物還具有抗氧化、抗癌、抗炎抑菌、抗衰老等多種對人體有益的生理功能[3]。某些類黃酮化合物具有明顯的苦味、甜味和鮮艷的顏色，因此被廣泛應用于食品加工行業(yè)。據(jù)不完全統(tǒng)計，目前柑橘中已鑒定出的生物類黃酮化合物種類已超過80種，主要分為黃烷酮類化合物、黃酮類化合物和黃酮醇類化合物[2。黃烷酮類化合物大多以7-0-糖苷形式存在，含量最為豐富。黃酮類化合物除了以0-糖苷形式存在，還含有一類特殊的多甲氧基黃酮。它們是柑橘屬植物中特有的成分，可用作柑橘分類的標識物。黃酮醇類化合物主要以3-O-糖苷和7-O-糖苷形式存在。隨著人們生活水平的不斷提升和對健康的日益關注，富含生物活性成分的高品質(zhì)沃柑及其功能食品具有廣闊的開發(fā)前景。由于不同砧木類型和不同發(fā)育期的果實類黃酮化合物含量具有較大差異，因此，研究不同砧木沃柑果實在各個發(fā)育期的類黃酮化合物組分及含量，并進行綜合評價，獲得類黃酮化合物綜合評價高的砧木類型和果實發(fā)育期，對于制訂科學的沃柑營養(yǎng)品質(zhì)評價體系，促進以沃柑為原料的功能食品開發(fā)，推動沃柑加工產(chǎn)業(yè)向高質(zhì)量發(fā)展具有重要意義。

不同砧木對果實次生代謝產(chǎn)物的影響廣泛存在于嫁接繁殖的果樹中[4]。例如，對蘋果果實的研究結果顯示，不同砧木會導致相同發(fā)育階段果皮和果肉中總酚、類黃酮化合物、花青苷和類胡蘿卜素含量的差異[5]。對葡萄的研究結果表明，101-14砧木促進了丹娜葡萄果皮中黃酮醇、黃烷醇和花色苷的積累，而5A砧木促進了赤霞珠葡萄中花青素的積累[67]。101-14MGt和1103P砧木促進PetitVerdot葡萄中黃酮醇的合成，而Beta砧木則抑制除紫丁香苷外的黃酮醇合成[8]。對歐洲李的研究結果表明，Wavit砧木上的李子果實含有較高含量的芍藥素-3-0-蕓香糖苷、矢車菊素-3-0-蕓香糖苷和新綠原酸[9]。Zhou等[10]研究發(fā)現(xiàn)，La-koocha砧木可促進面包果接穗中類黃酮化合物的合成。砧木對果實次生代謝產(chǎn)物的影響在柑橘中也有研究。比如，對血橙的研究發(fā)現(xiàn)，不同砧木和接穗的組合可顯著影響其果實中花青素、維生素C及有機酸的含量[1]。應用C35砧木的血橙品種 Moro 果實中橙皮苷含量最高，而應用FA13砧木的果實中橙皮苷含量最低[12]。應用香橙砧和枳砧的塔羅科血橙果實總黃酮含量低于紅橘砧[13]；香橙砧紅江橙果實中總黃酮含量、氨基酸含量以及固酸比顯著低于卡里佐枳橙砧[14]。Li等[15]對Newhall甜橙的研究結果表明，Poncirustrifoli-ate砧木嫁接的甜橙果皮總黃酮含量較高。有關不同砧木對果實類黃酮化合物含量的影響可能與砧木和接穗間的親和性有關。親和性較差時，產(chǎn)生的脅迫可能會刺激植物次生代謝產(chǎn)物的合成[16]。此外，砧木還可能通過調(diào)節(jié)根系的水分吸收、葉片的光合速率及光合產(chǎn)物的分配，進一步影響柑橘營養(yǎng)成分含量[17]

類黃酮化合物作為沃柑果實中主要的功能性營養(yǎng)物質(zhì)，其種類和含量是評價沃柑營養(yǎng)品質(zhì)的重要指標。以往對柑橘類黃酮化合物的研究主要集中于柚子、甜橙、金柑、檸檬等上，在沃柑上的研究較少。目前，尚缺乏對不同砧木沃柑在果實發(fā)育過程中類黃酮化合物組分及含量的動態(tài)系統(tǒng)研究。而且，柑橘中類黃酮化合物種類繁多，功能和含量各異，使用總黃酮含量對果實品質(zhì)進行評價并不科學，需要建立不同類黃酮化合物的綜合評價方法。枳殼、酸橘、香橙是生產(chǎn)上沃柑嫁接最常用的砧木，以此為試驗材料，揭示不同砧木沃柑在各個發(fā)育階段果肉和果皮中15種類黃酮化合物含量的動態(tài)變化規(guī)律。利用主成分分析法（PCA）構建沃柑類黃酮化合物綜合評價體系；明確不同砧木間和不同生長發(fā)育期類黃酮化合物組分及含量的差異，充實沃柑功能成分數(shù)據(jù)庫，為沃柑功能性產(chǎn)品的開發(fā)利用提供數(shù)據(jù)支撐。根據(jù)不同生產(chǎn)目的，選擇適宜的采收期，充分利用果實有效成分，為沃柑采收后資源綜合利用和保健品開發(fā)提供方向。

1材料與方法

1.1 試驗材料

試驗地點位于廣西壯族自治區(qū)市武鳴區(qū)雙橋鎮(zhèn)騰翔村沃柑果園，東經(jīng) 108^°17^′50.10^′′ 北緯23^°06^′9.56\" 。在同一地塊選取長勢和結果情況基本一致的植株，分別以枳殼、香橙、酸橘為砧木，樹齡6年，植株的田間管理水平相同。

1.2 試劑與儀器

圣草次苷、蕓香柚皮苷、柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷、野漆樹苷、香風草苷、枸橘苷、柚皮素、香葉木素、槲皮素、蘆丁、川陳皮素、橘皮素、甜橙黃酮、二氫槲皮素、圣草酚、木犀草素、山柰酚、根皮素、槲皮苷共計21種類黃酮化合物標準品（純度 95% 以上，由上海安譜璀世標準技術服務有限公司提供）。LC-20ADXR高效液相色譜儀（日本島津公司產(chǎn)品），ABSCIEXQTRAP3200三重四極桿質(zhì)譜聯(lián)用儀（美國ABSCIEX公司產(chǎn)品），WatersACQUITYUPLCHSST3C18色譜柱（美國Waters科技有限公司產(chǎn)品），TGL-20M醫(yī)用離心機（湖南湘儀實驗室儀器開發(fā)有限公司產(chǎn)品）。

1.3 試驗方法

1.3.1試驗設計每種砧木沃柑選取2棵果樹作為1個處理，每個處理設3個重復。在2022年7月到2023年4月期間，于每個月的第1d采集沃柑果實。采樣時，每個處理從東、南、西、北4個方向選取大小均勻、表面完好、無病蟲害的果實30個。果實采下后立即運回實驗室，將果皮和果肉分開，分別用勻漿機攪拌均勻（果肉去核），保存于 -20^°C 冰箱待測。

1.3.2類黃酮化合物測定方法果肉和果皮的前處理方法參考張念等[18]的方法，上機測定使用高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法（LC-MS/MS）。色譜條件： Wa. ters ACQUITY UPLC HSS T3（ 100.0mm×2. 1mm 1.8μm ）色譜柱和同款保護柱；柱溫 40°C ;進樣量為 5μL ;流動相A為 0.1% 甲酸水（體積百分數(shù)）溶液，流動相B為乙腈;梯度洗脫程序： 0～1.0min ，10% B;1.0＼～9.0 min， 10%～90% B;9.0＼～11.0 min，90%～100% B； 11.0～11.1min ， 100%～10% B;11.1～13.0min 10% B;流速為 0.30mL/min 。質(zhì)譜條件：采用多反應監(jiān)測，電噴霧離子源（ESI）溫度550^°C ，正離子模式下質(zhì)譜電壓為 5500V ，負離子模式下質(zhì)譜電壓為 -4500V ，氣簾氣（CUR） 2.068× 10⁵Pa ，霧化氣GS1和輔助氣GS2均為 3.45×10⁵ Pao

1.4 統(tǒng)計分析

用SPSS22.0軟件和Origin Pro2021 軟件對數(shù)據(jù)進行計算和統(tǒng)計分析，采用F檢驗，多重比較用Duncan's法。類黃酮化合物綜合評價方法參考李可等[19]的方法。

2 結果與分析

2.1 沃柑果肉和果皮中類黃酮化合物組成

在檢測的21種類黃酮化合物中，沃柑果肉和果皮中檢測到15種，未檢測到二氫槲皮素、圣草酚、木犀草素、山柰酚、根皮素和槲皮苷。3種砧木果肉中含量最高的類黃酮化合物為新橙皮昔，占15種類黃酮化合物之和的 21.24%～32.87% ，其次為橙皮苷和蕓香柚皮苷，含量較豐富的還有柚皮苷、香風草苷、枸橘昔和蘆丁，此外，還含有少量野漆樹苷、圣草次苷、川陳皮素、橘皮素、甜橙黃酮、柚皮素、香葉木素和槲皮素。3種砧木果皮中含量最高的類黃酮化合物為橙皮苷，占15種類黃酮化合物之和的 27.06% 237.83% ，其次為新橙皮苷，含量較豐富的還有蕓香柚皮苷、川陳皮素、蘆丁、香風草苷、柚皮苷、枸橘苷、橘皮素和甜橙黃酮，此外，還含有少量野漆樹苷、圣草次昔、柚皮素、香葉木素和槲皮素。

2.2不同砧木沃柑果實發(fā)育過程中黃烷酮類化合物含量變化

由圖1A可知，沃柑果肉中的圣草次苷含量在2022年7-12月快速下降，2023年1-4月保持相對穩(wěn)定。同一月份不同砧木沃柑果肉中圣草次苷含量表現(xiàn)為：2022年10月和2023年1月、2月、4月酸橘砧沃柑顯著高于枳殼砧沃柑，2022年12月香橙砧沃柑顯著高于枳殼砧沃柑，枳殼砧沃柑顯著高于酸橘砧沃柑，2023年3月枳殼砧沃柑顯著高于香橙砧沃柑，香橙砧沃柑顯著高于酸橘砧沃柑。由圖1B可知，果皮中圣草次苷含量在2022年7月至2023年4月整體呈現(xiàn)逐步下降的趨勢。同一月份3種砧木沃柑果皮中圣草次苷含量均表現(xiàn)為酸橘砧沃柑gt;香橙砧沃柑 gt; 積殼砧沃柑，且酸橘砧沃柑和枳殼砧沃柑之間的差異均達顯著水平。

由圖1C可知，沃柑果肉中蕓香柚皮昔含量在2022年7-12月整體呈下降趨勢，2023年1-4月不同砧木沃柑變化趨勢不一。同一月份不同砧木沃柑果肉中蕓香柚皮苷含量表現(xiàn)為：2022年10月酸橘砧沃柑顯著高于香橙砧沃柑，2022年11月和2023年1月、3月枳殼砧沃柑顯著高于香橙砧沃柑，2022年12月和2023年2月、4月香橙砧沃柑顯著高于另外2種砧木沃柑。由圖1D可知，沃柑果皮中蕓香柚皮苷含量在2022年7月至2023年4月整體呈波動下降趨勢。同一月份3種砧木沃柑果皮中蕓香柚皮昔含量均表現(xiàn)為酸橘砧沃柑gt;香橙砧沃柑gt;枳殼砧沃柑，且除2022年9月外酸橘砧沃柑與另外2種砧木沃柑之間的差異均達顯著水平。

由圖2A可知，沃柑果肉中柚皮苷含量在2022年7-12月整體呈下降趨勢，2023年1-4月枳殼砧沃柑果肉中柚皮苷含量變化幅度較大，并在2023年2月含量達到最低。同一月份3種砧木沃柑果肉中柚皮苷含量表現(xiàn)為：2022年9月和12月香橙砧沃柑顯著高于枳殼砧沃柑，2023年2月和4月枳殼砧沃柑顯著低于另外2種砧木沃柑，2023年3月酸橘砧沃柑顯著低于另外2種砧木沃柑。由圖2B可知，沃柑果皮中柚皮苷含量在2022年7至2023年4月整體呈現(xiàn)波動下降趨勢，枳殼砧沃柑和酸橘砧沃柑果皮中柚皮昔含量在2023年4月達最低值，香橙砧沃柑在2023年1月達最低值。同一月份3種砧木沃柑果皮中柚皮苷含量均表現(xiàn)為酸橘砧沃相 gt; 香橙砧沃柑 gt; 積殼砧沃柑，且酸橘砧沃柑與另外2種砧木沃柑間的差異均達顯著水平。

由圖2C可知，隨著果實生長發(fā)育，沃柑果肉中橙皮苷含量前4個月高于后6個月，枳殼砧沃柑和香橙砧沃柑果肉橙皮昔含量在2022年11月快速下降，酸橘砧沃柑在2022年12月快速下降。同一月份不同砧木沃柑果肉中橙皮苷含量表現(xiàn)為：2022年8月酸橘砧沃柑顯著高于香橙砧沃柑，2022年12月積殼砧沃柑和香橙砧沃柑顯著高于酸橘砧沃柑，2023年1月、2月、4月酸橘砧沃柑顯著高于積殼砧沃柑和香橙砧沃柑。由圖2D可知，沃柑果實生長發(fā)育過程中果皮中橙皮昔含量變化不大，同一月份3種砧木沃柑果皮中橙皮苷含量差異僅2022年12月酸橘砧沃柑顯著高于香橙砧沃柑，2023年2月酸橘砧沃柑顯著高于枳殼砧沃柑，其余月份無顯著差異。在各個發(fā)育期，3種砧木沃柑果皮中的橙皮苷含量是果肉的 12.3～5.0 倍，遠高于果肉。

由圖3A可知，隨著果實生長發(fā)育，沃柑果肉中新橙皮苷含量前4個月高于后6個月，積殼砧沃柑果肉中新橙皮昔含量在2022年12月和2023年2-4月顯著下降，香橙砧沃柑在2023年1月與2022年12月相比顯著下降，之后的幾個月相對平穩(wěn)，酸橘砧沃柑在2022年12月和2023年3月分別與上個月相比顯著下降。同一月份不同砧木沃柑果肉中新橙皮苷含量表現(xiàn)為：2022年12月香橙砧沃柑顯著高于枳殼砧沃柑和酸橘砧沃柑，2023年1月枳殼砧沃柑和酸橘砧沃柑顯著高于香橙砧沃柑，2023年2月和4月酸橘砧沃柑顯著高于枳殼砧沃柑和香橙砧沃柑。由圖3B可知，沃柑果實生長發(fā)育過程中果皮中新橙皮苷含量變化不大，同一月份3種砧木沃柑果皮中新橙皮苷含量無顯著差異。在各個發(fā)育期，3種砧木沃柑果皮中的新橙皮苷含量是果肉的2.2～3.8倍，遠高于果肉。

A：3種砧木沃柑果肉中圣草次苷含量;B：3種砧木沃柑果皮中圣草次苷含量;C：3種砧木沃柑果肉中蕓香柚皮苷含量;D：3種砧木沃柑果皮中蕓香柚皮苷含量。圖柱上不同小寫字母表示同一發(fā)育期不同砧木沃柑果肉或者果皮中黃烷酮類化合物含量存在顯著差異（ Plt;0.05， 。

由圖3C可知，隨著果實生長發(fā)育，沃柑果肉中香風草苷含量前4個月均高于后6個月，積殼砧沃柑和酸橘砧沃柑果肉香風草昔含量在2022年11月快速下降，香橙砧沃柑在2022年8月快速下降。同一月份不同砧木沃柑果肉中香風草苷含量表現(xiàn)為：2022年7月和12月香橙砧沃柑顯著高于積殼砧沃

A：3種砧木沃柑果肉中柚皮苷含量;B：3種砧木沃柑果皮中柚皮苷含量;C：3種砧木沃柑果肉中橙皮苷含量;D：3種砧木沃柑果皮中橙皮苷含量。圖柱上不同小寫字母表示同一發(fā)育期不同砧木沃柑果肉或者果皮中黃烷酮類化合物含量存在顯著差異（ ?ΔPlt;0.05 ）°

柑和酸橘砧沃柑，2022年8月和10月酸橘砧沃柑顯著高于香橙砧沃柑，2022年9月和11月酸橘砧沃柑顯著高于枳殼砧沃柑和香橙砧沃柑，2023年1月酸橘砧沃柑和枳殼砧沃柑顯著高于香橙砧沃柑，2023年2月和4月酸橘砧沃柑顯著高于枳殼砧沃柑和香橙砧沃柑。由圖3D可知，沃柑果實生長發(fā)育過程中果皮中香風草昔含量變化不大。同一月份不同砧木沃柑果皮中香風草苷含量表現(xiàn)為：2022年7月、9月、10月和11月酸橘砧沃柑顯著高于積殼砧沃柑，2022年12月及2023年1-4月酸橘砧沃柑顯著高于枳殼砧沃柑和香橙砧沃柑。

由圖4A可知，沃柑果肉中枸橘昔含量在2022年7-12月整體呈下降趨勢，2023年1-4月不同砧木沃柑變化趨勢不一。同一月份不同砧木沃柑果肉中枸橘苷含量表現(xiàn)為：2022年12月香橙砧沃柑顯著高于枳殼砧沃柑和酸橘砧沃柑，2022年11月和2023年1月、2月、4月酸橘砧沃柑顯著高于枳殼砧沃柑和香橙砧沃柑。由圖4B可知，沃柑果實生長發(fā)育過程中不同砧木沃柑果皮中枸橘苷含量變化不一。同一月份不同砧木沃柑果皮中枸橘苷含量表現(xiàn)為：2022年7月、10-12月和2023年1-3月酸橘砧沃柑顯著高于枳殼砧沃柑和香橙砧沃柑，2022 年9月酸橘砧沃柑顯著高于枳殼砧沃柑，2023年4月酸橘砧沃柑和香橙砧沃柑顯著高于枳殼砧沃柑。

由圖4C可知，隨著果實生長發(fā)育，沃柑果肉中柚皮素含量前2個月顯著高于后8個月，3種砧木沃柑果肉中柚皮素含量均在2022年9月急速下降，之后呈現(xiàn)波動變化。同一月份不同砧木沃柑果肉中的柚皮素含量表現(xiàn)為：2022年7月和12月香橙砧沃柑顯著高于酸橘砧沃柑，2022年8月酸橘砧沃柑和香橙砧沃柑顯著高于枳殼砧沃柑，2022年11月和2023年1月枳殼砧沃柑顯著高于香橙砧沃柑和酸橘砧沃柑，2023年2月酸橘砧沃柑顯著高于枳殼砧沃柑和香橙砧沃柑。由圖4D可知，沃柑果皮中柚皮素含量在2022年7-11月整體呈現(xiàn)快速下降趨勢，之后保持相對穩(wěn)定。同一月份不同砧木沃柑果皮中柚皮素含量表現(xiàn)為：2022年7月和2023年3-4月酸橘砧沃柑顯著高于枳殼砧沃柑，2022年8-12月和2023年1-2月酸橘砧沃柑顯著高于枳殼砧沃柑和香橙砧沃柑。

2.3不同砧木沃柑果實發(fā)育過程中黃酮類化合物含量變化

由圖5A可知，沃柑果肉中野漆樹昔含量在2022年7-12月整體呈下降趨勢，2023年1-4月不同砧木沃柑變化趨勢不一。同一月份不同砧木沃柑果肉中野漆樹苷含量表現(xiàn)為：2022年9月積殼砧沃柑顯著高于香橙砧沃柑，2022年10月酸橘砧沃柑顯著高于香橙砧沃柑，2022年12月香橙砧沃柑顯著高于另外2種砧木沃柑，2022年11月和2023年1-4月，酸橘砧沃柑顯著高于另外2種砧木沃柑。由圖5B可知，沃柑果皮中野漆樹苷含量在2022年7-12月逐步下降，2023年1-4月積殼砧果皮中野漆樹苷含量繼續(xù)下降，2023年4月達最低值。同一月份不同砧木沃柑果皮中野漆樹昔含量表現(xiàn)為：2022年7月、9月、10月和2023年1-4月積殼砧沃柑顯著低于另外2種砧木沃柑，2022年10-12月和2023年1-2月，酸橘砧沃柑顯著高于另外2種砧木沃柑。

由圖5C可知，沃柑果肉中香葉木素含量在2022年8-12月整體呈快速下降趨勢，2023年1-4月未檢出。同一月份不同砧木沃柑果肉中香葉木素含量表現(xiàn)為：2022年7月積殼砧沃柑顯著高于酸橘砧沃柑，2022年9月積殼砧沃柑和香橙砧沃柑顯著高于酸橘砧沃柑，2022年10月香橙砧沃柑顯著高于另外2種砧木沃柑。由圖5D可知，沃柑果皮中香葉木素含量在2022年7-12月高于2023年1-4月，不同砧木沃柑果皮中香葉木素含量變化趨勢不一。同一月份不同砧木沃柑果皮中香葉木素含量表現(xiàn)為：2022年8-10月枳殼砧沃柑顯著高于另外2種砧木沃柑，2022年11-12月，酸橘砧沃柑顯著低于另外2種砧木沃柑，2023年1-4月，香橙砧沃柑顯著低于另外2種砧木沃柑。各個發(fā)育期，3種砧木果皮中的香葉木素含量遠高于果肉。

由圖5E可知，沃柑果肉中川陳皮素含量在2022年7-12月急速下降，2023年1-4月保持相對穩(wěn)定。同一月份不同砧木沃柑果肉中川陳皮素含量表現(xiàn)為：2022年7月酸橘砧沃柑顯著高于另外2種砧木沃柑，2022年8月、10月、11月和2023年2月香橙砧沃柑顯著高于另外2種砧木沃柑，2022年9月和12月枳殼砧沃柑顯著高于另外2種砧木沃柑，2023年1月和3月酸橘砧沃柑顯著低于另外2種砧木沃柑，2023年4月枳殼砧沃柑顯著低于另外2種砧木沃柑。由圖5F可知，沃柑果皮中川陳皮素含量在2022年7-11月相對穩(wěn)定，2022年12月到2023年4月期間緩慢下降。同一月份不同砧木沃柑果皮中川陳皮素含量表現(xiàn)為：2022年7月和9月酸橘砧沃柑顯著高于枳殼砧沃柑，2022年11-12月枳殼砧沃柑顯著高于酸橘砧沃柑，2023年1月、3月、4月香橙砧沃柑顯著低于枳殼砧沃柑和酸橘砧沃柑，2023年2月香橙砧沃柑顯著低于積殼砧沃柑。在各個發(fā)育期，3種砧木沃柑果皮中川陳皮素含量遠高于果肉。

由圖6A可知，沃柑果肉中橘皮素含量在2022年7-11月急速下降，2022年12月到2023年4月期間保持穩(wěn)定。同一月份不同砧木沃柑果肉中橘皮素含量表現(xiàn)為：2022年10-11月香橙砧沃柑顯著高于另外2種砧木沃柑，2022年9月、12月和2023年1月枳殼砧沃柑顯著高于酸橘砧沃柑，2023年2月酸橘砧沃柑顯著高于積殼砧沃柑，2023年3月酸橘砧沃柑顯著低于另外2種砧木沃柑，2023年4月枳殼砧沃柑顯著低于另外2種砧木沃柑。由圖6B可知，沃柑果皮中橘皮素含量在2022年7-11月期間呈先下降再升高的趨勢，2022年12月到2023年4月期間逐漸下降。同一月份不同砧木沃柑果皮中橘皮素含量表現(xiàn)為：2022年8月枳殼砧沃柑顯著高于酸橘砧沃柑，2022年10月香橙砧沃柑顯著高于另外2種砧木沃柑，2022年11月到2023年3月枳殼砧沃柑顯著高于另外2種砧木沃柑，2023年1月、3月、4月香橙砧沃柑顯著低于另外2種砧木沃柑。

在各個發(fā)育期，3種砧木沃柑果皮中橘皮素含量遠高于果肉。

由圖6C可知，沃柑果肉中甜橙黃酮含量在2022年7-11月急速下降，2022年12月到2023年4月期間保持穩(wěn)定。同一月份不同砧木沃柑果肉中甜橙黃酮含量表現(xiàn)為：2022年8月香橙砧沃柑顯著高于酸橘砧沃柑，2022年9月、12月和2023年1月積殼砧沃柑顯著高于另外2種砧木沃柑，2022年10-11月香橙砧沃柑顯著高于枳殼砧沃柑和酸橘砧沃柑，2023年2月和4月積殼砧沃柑顯著低于另外2種砧木沃柑，2023年3月酸橘砧沃柑顯著低于另外2種砧木沃柑。由圖6D可知，沃柑果皮中甜橙黃酮含量在2022年7-11月期間小幅波動，2022年12月到2023年4月期間逐漸下降。同一月份不同砧木沃柑果皮中甜橙黃酮含量表現(xiàn)為：2022年10月香橙砧沃柑顯著高于酸橘砧沃柑，2022年11-12月和2023年1月枳殼砧沃柑顯著高于酸橘砧沃柑，2022年12月和2023年1-2月枳殼砧沃柑顯著高于香橙砧沃柑，2023年3-4月香橙砧沃柑顯著低于另外2種砧木沃柑。在各個發(fā)育期，3種砧木沃柑果皮中的甜橙黃酮含量是果肉的4.8～1404.2倍，遠高于果肉。

2.4不同砧木沃柑果實發(fā)育過程中黃酮醇類化合物含量變化

由圖7A可知，隨著果實生長發(fā)育，不同砧木沃柑果肉中蘆丁含量變化趨勢不同，整體呈現(xiàn)先升高后波動下降趨勢。同一月份不同砧木沃柑果肉中蘆丁含量表現(xiàn)為：2022年9月和2023年1月、2月、4月酸橘砧沃柑顯著高于另外2種砧木沃柑，2022年12月香橙砧沃柑顯著高于另外2種砧木沃柑，2023年3月香橙砧沃柑顯著低于另外2種砧木沃柑。由圖7B可知，沃柑果皮中蘆丁含量隨著果實生長發(fā)育變化幅度不大。同一月份不同砧木沃柑果皮中蘆丁含量表現(xiàn)為：2022年7月積殼砧沃柑顯著低于另外2種砧木沃柑，2022年10月和2023年1月、4月香橙砧沃柑顯著高于枳殼砧沃柑，2022年12月和2023年2月酸橘砧沃柑顯著高于香橙砧沃柑。在各個發(fā)育期，3種砧木沃柑果皮中蘆丁含量高于果肉。

由圖7C可知，沃柑果肉中槲皮素含量在2022年7-11月快速下降，2022年12月至2023年4月積殼砧沃柑果肉中槲皮素含量變化幅度較大，香橙砧沃柑和酸橘砧沃柑變化幅度較小。同一月份不同

A：3 種砧木沃柑果肉中野漆樹苷含量;B：3種砧木沃柑果皮中野漆樹苷含量;C：3種砧木沃柑果肉中香葉木素含量;D：3種砧木沃柑果皮中香葉木素含量;E：3種砧木沃柑果肉中川陳皮素含量;F：3種砧木沃柑果皮中川陳皮素含量。圖柱上不同小寫字母表示同一發(fā)育期不同砧木沃柑果肉或者果皮中黃酮類化合物含量存在顯著差異（ Plt;0.05） 。

砧木沃柑果肉中槲皮素含量表現(xiàn)為：2022年7月酸橘砧沃柑顯著低于另外2種砧木沃柑，2022年9月香橙砧沃柑顯著高于酸橘砧沃柑，2022年10月枳殼砧沃柑顯著高于酸橘砧沃柑，2022年12月和2023年1月枳殼砧沃柑顯著高于另外2種砧木沃柑，2023年2月枳殼砧沃柑顯著低于另外2種砧木沃柑。由圖7D可知，隨著果實生長發(fā)育，沃柑果皮中槲皮素含量前4個月顯著高于后6個月，2022年11月至2023年4月期間果皮中槲皮素含量相對穩(wěn)定。同一月份不同砧木沃柑果皮中槲皮素含量表現(xiàn)為：2022年7-9月和2023年2月香橙砧沃柑顯著低于另外2種砧木沃柑，2022年10月酸橘砧沃柑顯著高于香橙砧沃柑，2023年1月酸橘砧沃柑顯著高于另外2種砧木沃柑。

2.5不同砧木沃柑果實中類黃酮化合物的綜合評價

2.5.1果肉中類黃酮化合物的綜合評價對果肉中15種類黃酮化合物進行PCA分析（表1）。結果表明，PCA分析得到的前2個主成分的特征值均大于1，且累計方差貢獻率達 92.330% ，說明這2個主成分能反映15種化合物的絕大部分信息，因此選取前2個主成分信息進行后續(xù)分析計算。主成分1的方差貢獻率達到了79.681% ，特征值為11.952，主要與圣草次昔、蕓香柚皮苷、柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷、野漆樹苷、香風草苷、枸橘苷、香葉木素、川陳皮素、橘皮素、甜橙黃酮等表現(xiàn)為較高正相關性，這些指標在果肉綜合評價中起主導作用。主成分2的方差貢獻率為 12.649% ，特征值為1.897，與柚皮素、槲皮素、蘆丁相關程度高，其中與柚皮素、槲皮素呈正相關，與蘆丁呈負相關。

利用PCA分析中的2個主成分對果肉進行綜合評價。將表1中各指標的主成分載荷值除以主成分相對應的特征值的平方根作為特征向量，以特征向量為權重建立綜合評價模型： F= 0.863F_?1+ 0.137F₂（F 表示綜合得分， F₁，F(xiàn)₂ 分別表示主成分1的得分、主成分2的得分），獲得不同砧木沃柑果肉在各個發(fā)育期的綜合得分，得分高低反映果肉綜合品質(zhì)的高低。以果實發(fā)育期為橫坐標，綜合得分為縱坐標進行繪圖（圖8）。由圖8可知，3種砧木沃柑果肉均在2022年7月綜合得分最高，隨著果實發(fā)育（2022年7-12月），果肉綜合得分逐漸下降；果實成熟后（2023年1-4月），果肉綜合得分呈現(xiàn)出波動變化。同一月份不同砧木沃柑果肉綜合得分情況：2022年7-8月和12月香橙砧沃柑果肉的綜合得分最高，2022年9-11月香橙砧沃柑果肉的綜合得分最低。2023年1月，酸橘砧沃柑果肉的綜合得分最高，枳殼砧沃柑次之，香橙砧沃柑最低。2023年2月和4月，酸橘砧沃柑果肉的綜合得分最高，香橙砧沃柑次之，枳殼砧沃柑最低。2023年3月，枳殼砧沃柑果肉的綜合得分略高于酸橘砧沃柑和香橙砧沃柑。在果實成熟期內(nèi)（2023年1-4月），所有砧木沃柑中酸橘砧沃柑果肉的綜合得分2月最高、品質(zhì)最好，積殼砧沃柑果肉的綜合得分1月最高、品質(zhì)最好，香橙砧沃柑果肉的綜合得分2月最高、品質(zhì)最好。因此以果肉為主要目的時枳殼砧沃柑果實的最佳采收期為1月，香橙砧沃柑和酸橘砧沃柑果實的最佳采收期為2月。

2.5.2果皮中類黃酮化合物的綜合評價對果皮中15種類黃酮化合物進行PCA分析（表2）。分析結果表明，PCA分析得到的前3個主成分的特征值均大于1，且累計方差貢獻率達 88.994% ，說明這3個主成分能反映15種化合物的絕大部分信息，因此選取前3個主成分信息進行后續(xù)分析計算。主成分1的方差貢獻率達到了 63.088% ，特征值為9.463，主要與圣草次苷、蕓香柚皮苷、柚皮苷、野漆樹苷、香風草苷、枸橘苷、蘆丁、川陳皮素等表現(xiàn)為較高正相關性，這些化合物在果皮綜合評價中起主導作用。

主成分2的方差貢獻率為 14.884% ，特征值為2.233，與橘皮素、甜橙黃酮呈正相關。主成分3的方差貢獻率為 11.022% ，特征值為1.653，與橙皮苷、新橙皮昔、柚皮素相關程度高，其中與橙皮苷、新橙皮苷呈正相關，與柚皮素呈負相關。

利用PCA分析中的3個主成分對果皮進行綜合評價。建立果皮綜合評價模型： 0.167F₂+ 0.124F₃（F 表示綜合得分， F₁、F₂、F₃ 分別表示主成分1的得分、主成分2的得分、主成分3的得分），獲得不同砧木沃柑果皮在各個發(fā)育期的綜合得分，得分高低反映果皮綜合品質(zhì)的高低。以果實發(fā)育期為橫坐標，綜合得分為縱坐標進行繪圖（圖9）。由圖9可知，香橙砧沃柑和酸橘砧沃柑果皮在2022年7月綜合得分最高，積殼砧沃柑果皮在2022年8月綜合得分最高，隨著果實發(fā)育，3種砧木果皮綜合得分均呈下降趨勢。在整個發(fā)育期，同一月份中酸橘砧沃柑果皮的綜合得分均高于另外2種砧木沃柑。2022年7-11月和2023年4月，香橙砧沃柑果皮的綜合得分高于枳殼砧沃柑；而2022年12月和2023年1-3月，積殼砧沃柑果皮的綜合得分高于香橙砧沃柑。在果實成熟期，即2023年1-4月，酸橘砧沃柑果皮的綜合得分在2月最高；積殼砧沃柑和香橙砧沃柑果皮在1月綜合得分最高，因此以果皮為目的時酸橘砧沃柑果實的最佳采收期為2月，積殼砧沃柑和香橙砧沃柑果實的最佳采收期為1月。

3討論

3.1沃柑果實發(fā)育過程中類黃酮化合物組成和含 量的變化

在果實發(fā)育過程中，沃柑果肉和果皮中各類黃酮化合物的含量總體呈下降趨勢，與張念等[18]在琯溪蜜柚和尹會平等[20]在金柑中的研究結果一致。類黃酮化合物含量的下降可能與果實增大產(chǎn)生的生理稀釋作用有關。Moriguchi等[21研究結果表明，柑橘類果實在發(fā)育初期會大量積累類黃酮化合物，隨著果實增大，類黃酮化合物的合成逐漸減少。韓寒冰等[22研究了化橘紅果實生長發(fā)育過程中類黃酮化合物的動態(tài)變化，結果顯示果齡在 15～60d 的化橘紅果實中野漆樹苷、柚皮素、柚皮昔和芹菜素的含量隨著果實增大而下降。Li等[23在連續(xù)3個生長季節(jié)測定了國慶1號溫州蜜柑果實發(fā)育過程中的檸檬苦素、諾米林和柚皮苷的含量，結果顯示，這些化合物在果實組織中的含量總體上呈現(xiàn)下降趨勢。

Chen等[24]研究了香柑素苷、柚皮苷、橙皮苷、雙甲苷、橙皮素、川陳皮素和橘皮素7種類黃酮化合物在4種甜橙果實發(fā)育過程中的含量變化，結果發(fā)現(xiàn)不同種質(zhì)果實的不同組織中各類黃酮化合物總體呈下降趨勢。果實發(fā)育過程中類黃酮化合物含量的下降還可能與基因表達下調(diào)有關。李昕琪[25]對茶枝柑果實的研究發(fā)現(xiàn)，類黃酮化合物和揮發(fā)性物質(zhì)的含量隨著果實成熟而減少，特別是多甲氧基黃酮，其含量在成熟果實中最低。轉(zhuǎn)錄組分析揭示了整個果實發(fā)育期內(nèi)基因表達的變化趨勢：下調(diào)基因數(shù)量顯著多于上調(diào)基因，并且大多數(shù)基因的表達隨著發(fā)育期的延長逐漸下調(diào)。

3.2沃柑不同組織中類黃酮化合物組成和含量的差異

沃柑果肉和果皮中類黃酮化合物含量排名前3的組分為橙皮苷、新橙皮苷和蕓香柚皮苷，說明黃烷酮類化合物為沃柑果實的主要類黃酮化合物，本研究結果與朱麗莎等[26在甜橙中的研究結果相似。沃柑果皮中類黃酮化合物含量對比發(fā)現(xiàn)，橙皮苷平均含量最高，這與王海帆等[27]在沃柑果皮中的研究結果一致。果肉中新橙皮苷平均含量最高，橙皮苷次之，這與郭鵬妹等[28]在金柑雜種中的研究結果一致。部分研究結果顯示，新橙皮昔在果肉中的含量很低，與本研究結果存在差異。例如張念等[18]報道了同一成熟期琯溪蜜柚果肉中類黃酮化合物含量表現(xiàn)為柚皮苷 gt; 野漆樹苷gt;新橙皮苷gt;新圣草次苷。李勛蘭等[29]研究結果表明，在11種雜柑和甜橙果肉中，主要類黃酮化合物種類為橙皮苷、蕓香柚皮苷和香風草苷，新橙皮昔的含量很低或未檢出。牛靜琪等[30]測定了60 種常見柑橘屬水果果肉中類黃酮化合物組成及含量，結果表明，橙皮苷、蕓香柚皮苷和香風草苷是寬皮柑橘和橙果肉中主要的類黃酮化合物，新橙皮苷的含量很低或未檢出。這些研究結果的差異可能是由于柑橘種質(zhì)的不同。研究發(fā)現(xiàn)，不同柑橘種質(zhì)中類黃酮化合物的種類和含量存在明顯差異。例如，血橙中通常含有豐富的花青柑，但是柚、橘等種質(zhì)中花青苷含量很低或未檢測到[2。柚類中的柚皮昔含量豐富，但橙皮苷含量很低；橙類中含量較高的物質(zhì)為橙皮苷、蕓香柚皮苷和香風草苷；檸檬中含量較高的物質(zhì)為圣草次苷和橙皮苷；寬皮柑橘類和橙類中橙皮苷、新橙皮苷含量也存在差異[30]。張玉等[31]測定了5種柑橘果皮中6種類黃酮化合物含量，結果顯示，常山胡柚果皮中的主要類黃酮化合物為柚皮昔和新橙皮苷，宮川溫州蜜柑和哈姆林甜橙果皮中以橙皮昔為主，衢州柱柑和蕉柑果皮中主要含有橙皮昔和川皮素。黃勝佳等[3的研究結果表明，沃柑果皮中的新橙皮苷和柚皮昔含量顯著高于其他品種。

柑橘類黃酮化合物組成和含量的差異還表現(xiàn)在不同組織間。研究結果表明，葡萄柚果肉富含橙皮苷、柚皮苷、柚皮素、橙皮素和蘆丁，而果皮中只檢測到柚皮苷、橙皮苷[33]。在本研究中，沃柑果肉和果皮中含有的類黃酮化合物種類相同，但是含量差異較大。沃柑果皮中的橙皮苷、香葉木素、新橙皮苷、橘皮素、甜橙黃酮、川陳皮素、蘆丁、槲皮素等含量遠高于果肉，特別是3種多甲氧基黃酮類化合物（橘皮素、川陳皮素和甜橙黃酮）在果皮中含量豐富，但在果肉中含量較低，與張靜等[34]在晚熟柑橘中的研究結果一致。本研究發(fā)現(xiàn)沃柑果實發(fā)育過程中，果肉中川陳皮素、橘皮素和甜橙黃酮含量急速降低，但在果皮中下降緩慢，這可能是造成成熟期柑橘果皮和果肉中多甲氧基黃酮類化合物差異極大的主要原因。多甲氧基黃酮類化合物可作為柑橘產(chǎn)品質(zhì)量控制、產(chǎn)品溯源和柑橘品種分類的依據(jù)。本研究對多甲氧基黃酮類化合物在沃柑果實中的含量檢測結果顯示，果肉和果皮中均表現(xiàn)為川陳皮素含量最高，橘皮素和甜橙黃酮含量接近，與王彤等[35]研究的多甲氧基黃酮類化合物在不同寬皮柑橘中的積累模式略有不同，其研究結果認為，寬皮柑橘果皮中的多甲氧基黃酮類化合物以川陳皮素為主，而果肉中則以橘皮素為主。

3.3不同砧木沃柑類黃酮化合物綜合評價

3種砧木中，酸橘砧沃柑果皮在整個發(fā)育期的綜合評價高于枳殼砧沃柑和香橙砧沃柑，酸橘砧沃柑果肉在2022年11月和2023年1月、2月和4月的綜合評價高于枳殼砧沃柑和香橙砧沃柑；因此酸橘砧沃柑的類黃酮化合物綜合評價整體最優(yōu)。劉要鑫等[3研究發(fā)現(xiàn)，酸橘砧沃柑相比枳殼砧沃柑呈現(xiàn)出生長勢強、樹冠高大等特點。張丹等[37]研究發(fā)現(xiàn)，酸橘砧沃柑還具有穩(wěn)產(chǎn)性好，潰瘍病發(fā)病率較低，抗凍害能力強等優(yōu)點，但相比積殼砧沃柑和香橙砧沃柑，其果實降酸慢，固酸比較低。陳招芳等[13]對塔羅科血橙的研究結果表明，香橙砧塔羅科血橙和枳殼砧塔羅科血橙果實的總黃酮含量低于紅橘砧塔羅科血橙。韓曉等[6認為雨熱同期的氣候條件下，早熟砧木有助于沃柑果實類黃酮化合物的積累，樹勢旺盛且豐產(chǎn)能力強的砧木不利于沃柑果實中類黃酮化合物的積累。但陳敏等[4]在容器栽培的不同砧木紅江橙果實中發(fā)現(xiàn)，樹勢最強的卡里佐枳橙砧紅江橙果實中總黃酮含量顯著高于資陽香橙砧紅江橙。這些研究結果的差異可能與不同種植區(qū)域的環(huán)境差異以及不同的栽培管理技術有關。不同砧木對接穗果實中類黃酮化合物組成和含量的影響可能與砧木獨特的遺傳特性有關。不同砧木對營養(yǎng)物質(zhì)同化能力的差異和獨特的根系分泌物、微生物群落的差異可能會影響接穗的生長發(fā)育。砧木中的遺傳物質(zhì)如miRNA可以在砧木和接穗之間移動，影響接穗中與類黃酮化合物代謝相關的酶含量和基因表達，進而引起果實中類黃酮化合物代謝的差異[

本研究對3種砧木沃柑果實中類黃酮化合物綜合評價結果表明，在整個果實發(fā)育期，枳殼砧沃柑果肉在7月綜合評價得分最高，果皮在8月綜合評價得分最高。香橙砧沃柑和酸橘砧沃柑果肉和果皮均在7月綜合評價得分最高，類黃酮化合物綜合品質(zhì)最好。每年7-8月正是沃柑第1次疏果期，此時果實中類黃酮化合物綜合評價得分最高，疏下來的果實可用于開發(fā)以類黃酮化合物為主要成分的功能產(chǎn)品。每年1-4月是廣西地區(qū)沃柑果實成熟期，也是沃柑采收期。本研究結果表明，2月份酸橘砧沃柑果肉和果皮的綜合評價得分均高于另外2種砧木沃柑，所以酸橘砧沃柑果實最佳采收期為2月份。積殼砧沃柑果實最佳采收期為1月份；香橙砧沃柑以果肉為目的的果實最佳采收期為2月份，以果皮為目的的最佳采收期為1月份。若以鮮食為主則選擇果肉中類黃酮化合物綜合評價得分最高時為最佳采收期，若以果皮加工為主可選擇果皮中類黃酮化合物綜合評價得分最高時為最佳采收期。采收時間對果實營養(yǎng)品質(zhì)的影響較大，適當早采在一定程度上可保持柑橘果實中較高的類黃酮化合物水平[38]

4結論

沃柑果實中的類黃酮化合物以橙皮苷、新橙皮苷和蕓香柚皮苷等為主，果肉和果皮間類黃酮化合物含量存在差異。各類黃酮化合物含量隨著果實發(fā)育期推進總體呈下降趨勢。3種砧木沃柑果實中類黃酮化合物含量存在差異，類黃酮化合物綜合評價結果以酸橘砧沃柑整體更優(yōu)。在沃柑果實整個發(fā)育周期內(nèi)，枳殼砧沃柑果肉中類黃酮化合物在7月綜合評價得分最高，果皮在8月綜合評價得分最高；香橙砧沃柑和酸橘砧沃柑果肉和果皮中類黃酮化合物均在7月綜合評價得分最高。在果實采收期內(nèi)（1-4月），類黃酮化合物綜合評價得分最高的為2月份酸橘砧沃柑。基于類黃酮化合物綜合評價結果確定沃柑最佳采收期為：積殼砧沃柑的最佳采收期為1月，酸橘砧沃柑的最佳采收期為2月；香橙砧沃柑的最佳采收期為1月或2月。本研究結果適用于以類黃酮化合物為主要成分的功能食品的開發(fā)，若以鮮食為主最佳采收期的確定還需綜合考慮沃柑果實中糖、酸含量以及維生素C含量等其他營養(yǎng)指標。

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（責任編輯：黃克玲）