內關、公孫協同作用的神經解剖學研究

林鋟武 陳以國

(上海醫科大學華山醫院中西醫結合研究所,上海200040;1遼寧中醫學院針灸系)

摘 要 運用CB睭RP神經示蹤法對內關、公孫配伍機理從神經解剖學角度進行探討。結果:內關、公孫配伍運用,其針刺信息可在脊髓內經中間內、外側核的神經元纖維感傳至相應脊髓節段,再分別通過與交感神經、副交感神經形成突觸聯系,形成在脊髓層次的協同增效關系;同時通過兩穴在脊髓內相應神經元向孤束核的投射纖維產生突觸聯系,實現對胃等內臟傳入信息在脊髓和孤束核水平的調節整合作用。

主題詞 穴,內關/解剖組織學 穴,公孫/解剖組織學 神經解剖學內關為手厥陰心包經穴,公孫為足太陰脾經穴,此上下兩肢、經脈不同、距離很遠的兩穴,在針灸臨床上卻常一起配伍運用,自古以來作為"八脈交會穴"的用穴之一,其機理何在?中醫認為此兩穴是通過心包經、脾經、陰維脈及沖脈交匯于胃、心、胸部位,來實現其治療作用上的協同增效關系。歷來對于內關、公孫的研究,多為中醫傳統理論探討、臨床應用觀察及單穴實驗研究,而對于兩穴配伍相關性的研究,一直缺乏實驗佐證。除了其它假說,目前大多認為經絡腧穴實質與神經體液關系較大。所以,設想內關、公孫配伍能有效地治療胃等內臟疾病,是否與兩穴的神經纖維投射在中樞神經內的延伸與聯系有關?兩穴區的神經節段支配關系可能在中樞神經系統中有著一定的聯系。本文應用霍亂毒素B亞單位(choleratoxinsubunitB)耦聯辣根過氧化物酶(CB睭RP)法對大鼠"內關"、"公孫"單穴及兩穴配伍后,在相應運動神經元的分布和樹突構筑進行研究,以期對配穴的理論與臨床實踐提供一些神經解剖學基礎。1 材料和方法本實驗用中國協和醫科大學合成的霍亂毒素B亞單位耦聯辣根過氧化物酶(CB睭RP)作為神經解剖學探針;實驗動物由中國醫學科學院基礎研究所動物繁育場提供的Wistar成年雌性健康大鼠,體重在200～250g之間,每組8只,并根據比較解剖學方法,選取大鼠"內關"、"公孫"穴位。

1.1 實驗分組第1組:"內關"穴區注射CB睭RP;第2組:"內關"穴區注射CB睭RP后電針同側"公孫";第3組:"公孫"穴區注射CB睭RP;第4組:"公孫"穴區注射CB睭RP后電針同側"內關";第5組:胃壁注射CB睭RP;第6組:胃壁注射CB睭RP后電針右側"內關"、"公孫"。

1.2 實驗方法(1)第1組與第2組:先將0.3%CB睭RP5μl用微量注射器注射至右側"內關"穴區(注射CB睭RP前先將動物麻醉),第2組待動物清醒后配伍電針右側"公孫"穴,使用ZYZ1型多功能針灸儀,頻率為2～100c/s,疏密波,強度調在低檔2～4之間,以動物能耐受為限,每次電針20min,每日1次,存活72h后灌注固定,取同側脊髓C3～S2節段。第3組與第4組:將0.3%CB睭RP5μl用微量注射器注射至右側"公孫"穴區,第4組待動物清醒后配伍電針右側"內關"穴20min,每日1次,存活84h后灌注固定,取同側脊髓C3～S3節段。第5組與第6組:將0.3%CB睭RP10μl用微玻管套接微量注射器多點注射于胃的前壁、后壁、幽門和賁門的漿膜下與肌層之間,第6組待動物清醒后再行電針右側"內關"、"公孫"穴20min,每日1次,存活48h后灌注固定,取延髓、腹腔神經節和C4～L3節段背根神經節。(2)固定、取材及CB睭RP酶組化過程[1]:①固定標本:麻醉動物(戊巴比妥鈉30mg/kg腹腔注射)后,將灌注針經由左心室插入至主動脈并固定,剪開右心耳。按順序灌注下列液體(須將氣泡排盡):a.21℃生理鹽水150ml速灌,灌注壓為100cmH2O。b.4℃的固定液500ml,先快速灌注1/3后,再慢速灌注,總灌注時間為60min。②取材及切片:小心剝離需要的神經組織(延髓、脊髓、背根神經節、腹腔神經節),投入30%的蔗糖PB緩沖液過夜。以冠狀或水平切面冰凍切片,片厚40μm,接片于0.1MPB緩沖液中。③CB睭RP酶組化過程:將切片以雙蒸水洗6遍后,以四甲基聯苯胺(TMB)法[2]顯色,光學顯微鏡明、暗視野觀察,觀察后在暗視野下照相。

2 實驗結果第1組:脊髓前角中CB睭RP標記細胞的節段性分布,在C6～8節段Rexed分層屬于第Ⅸ層中發現陽性標記運動神經元和神經終末纖維。每張切片可見1～5個陽性標記細胞,其樹突野可達第Ⅶ層。

第2組:脊髓背角中CB睭RP標記細胞的節段性分布及其特點,a.經配伍電針同側"公孫"穴后,"內關"穴區陽性標記運動神經元分布節段擴大,可在C4～8節段的第Ⅸ層中出現;其樹突野擴大,向第Ⅶ、Ⅵ、Ⅴ層延伸,其中C8節段樹突達第Ⅶ層,并向其中間內側核、中間外側核特異性延伸。b.在縱切面切片中見到其樹突野向縱向、橫向延伸和聯系明顯加強,并可在陽性標記運動神經元周圍見到大量神經終末標記(見圖1,圖2)。

圖1 顯示"內關"穴區配伍電針后在C6節段陽性標記Mn之樹突野延伸至第Ⅶ、Ⅵ、Ⅴ層 10×6.3

圖2 顯示"內關"穴區配伍電針后在縱切面切片中可見陽性標記Mn顯著增多及其樹突野明顯地向縱向橫向聯系和可見周圍的神經終末標記 16×6.3

第3組:脊髓前角中CB睭RP標記細胞的節段分布,在L4～6節段第Ⅸ層中出現陽性標記的運動神經元和神經終末纖維。每張切片可見1～7個陽性標記細胞,其樹突野可達第Ⅶ層。

第4組:脊髓前角中CB睭RP標記細胞節段性分布及其特點,a.經配伍電針同側"內關"穴后,"公孫"穴區陽性標記運動神經元節段分布擴大至L4～S3節段,于其第Ⅸ層出現陽性標記細胞和神經終末纖維,其樹突向第Ⅶ、Ⅵ、Ⅴ層特異性延伸。b.在中間內側核、中間外側核出現陽性神經纖維和終末標記。c.縱切面中可見到陽性標記運動神經元增多和樹突野明顯地向縱向、橫向延伸及相互聯系。d.S2,3節段陽性標記運動神經元樹突特異性延伸至中間外側核(骶副交感核,見圖3～圖5)。

第5組:a.在孤束核內發現陽性標記細胞及大量神經終末纖維,為多角型細胞,兩側基本對稱。b.腹腔神經節出現陽性標記神經元,以大、中型為主,呈梭型、多角型,散在分布;可見到陽性標記神經纖維。c.在C4～L3節段背根神經節中可出現陽性標記細胞,以T5～T9節段最多。第6組:a.相同的存活期內,配伍電針后在孤束核的陽性標記細胞和神經終末纖維均不及第5組,其陽性標記細胞數明顯減少(P<0.01,見表1)。b.配伍電針后,腹腔神經節內陽性標記細胞明顯少于單純注射CB睭RP組(P<0.05,見表1),并可見陽性標記神經纖維減少。c.配伍電針后,僅在4只大鼠T8,T9節段背根神經節出現少許陽性標記細胞。

圖3 顯示"公孫"穴區配伍電針后在L6節段陽性標記Mn樹突野延伸至第Ⅶ、Ⅵ、Ⅴ層 10×6.3

圖4 顯示"公孫"穴區配伍電針后在縱切面切片中可見陽性標記Mn顯著增多及其樹突野明顯地向縱向橫向聯系和可見周圍的神經終末標記 16×6.3

圖5 "公孫"穴區配伍電針后在S2,S3節段陽性標記Mn樹突特異性延伸至中間外側核(骶副交感核) 10×6.3

討論

3.1 內關與交感神經系統的神經解剖學聯系本實驗采用對比的方法設立"內關"穴區注射CB睭RP組和"內關"穴區注射CB睭RP后配合電針"公孫"穴組。結果,第1組與第2組"內關"注射CB睭RP都能在脊髓C6～C8節段發現陽性運動細胞,但第2組配伍電針"公孫"穴后,不但脊髓前角運動神經元陽性標記細胞的節段性分布擴大,運動神經元陽性標記細胞出現在第Ⅸ層,而且,其樹突野特異性延伸至與內臟活動有關的第Ⅶ(中間外側核、中間內側核)、Ⅵ、Ⅴ層。此結果提示針刺可增加CB睭RP陽性細胞標記作用,不但存在于相同的神經節段,也存在著跨節段的增強效應。配伍"公孫"電針后能明顯加強"內關"穴區運動神經元與交感神經系統的聯系,這一效應可能是通過中間內、外側核內神經元間的相互影響來實現的。

3.2 公孫與副交感神經系統的神經解剖學聯系本實驗首次應用CB睭RP對大鼠"公孫"穴區進行神經解剖學角度的探討,結果當配伍電針"內關"穴時,"公孫"穴區逆行陽性標記細胞的節段性分布擴大,其中陽性標記運動神經元的樹突野向第Ⅶ、Ⅵ、Ⅴ層特異性延伸,在中間內側核出現神經纖維,特別是S2,S3節段陽性標記運動神經元樹突特異性延伸至中間外側核(骶副交感核),提示配伍電針"內關"后,對"公孫"穴區相應的運動神經元與副交感神經系統之間的聯系有正向調節作用。

3.3 關于第Ⅸ層陽性標記運動神經元周圍的神經終末纖維本實驗發現第Ⅸ層陽性標記細胞周圍出現神經終末纖維,這與Sterling和Kuypers在貓下位頸節的后根纖維終入全部9層中,其中有相當數量的后根纖維終止于運動神經元的實驗結果相同[3,4]。因此我們可以進一步推測,當針刺內關、公孫穴時,針感可能經由傳入纖維到達第Ⅸ層而與前角中的運動神經元形成單突觸或多突觸聯系,促使運動神經元樹突特異性地延伸,而與相應的神經元纖維產生聯系,其中一部分纖維將沖動向上傳導,形成受針對象(大腦皮層)的得氣感,一部分纖維將沖動向下傳導形成施針者針下的得氣感[5],另有一部分纖維特異性地與第Ⅶ(中間外側核、中間內側核)、Ⅵ、Ⅴ等與內臟支配有關的板層發生突觸聯系,形成兩穴配伍在脊髓層次的整合,從而實現對胃等內臟器官功能的調節作用。

3.4 關于內關、公孫兩穴配伍對胃等內臟的調節作用自Ellison和Clark[6]成功地將HRP示蹤技術應用于內臟神經以來,國內外已有不少有關胃等內臟的神經支配報道,并在包括孤束核在內的不同節段追蹤到HRP陽性標記細胞。孤束核(Sol)是延髓內重要的內臟感覺性核團,為一般內臟感覺傳導通路上的第一級中繼站。隨著神經解剖學和神經生理學研究方法的不斷發展,人們對孤束核的認識日趨深入,近年來HRP法以及還原銀染技術對有關孤束核的大量研究證實了孤束核不但與脊髓、腦干具有傳入、傳出神經聯系,而且與高級中樞(前腦、小腦)也具有復雜的往返聯系[7]。Lowey認為孤束核向脊髓的投射主要起自孤束核的中間內側核、腹外側核、聯合核[8]。而孟氏用HRP法證實了脊髓灰質Ⅲ～Ⅶ、Ⅹ板層向孤束核內側部直接投射[9]。本實驗可見到"內關"、"公孫"兩穴配伍電針后,兩穴的陽性標記運動神經元樹突野延伸至Ⅶ、Ⅵ、Ⅴ板層,并特異性地與中間外側核、中間內側核聯系。因此推測內關、公孫與胃等內臟之間可能存在著內關、公孫→軀體傳入神經→第Ⅸ板層→第Ⅶ、Ⅵ、Ⅴ板層,中間外側核、中間內側核→孤束核→交感神經、副交感神經→胃等內臟的調節關系。

胃壁注射CB睭RP是對胃的病理性刺激,其傳入應比生理狀態下增加,而配伍電針內關、公孫后,可見孤束核內陽性標記細胞顯著減少,正說明了內關、公孫配伍可對病理狀態下胃等內臟的中樞傳入起顯著地抑制性作用;而當胃等內臟功能活動減弱時,內關、公孫配伍針刺又可以興奮孤束核內相應神經元以增加交感和副交感神經對內臟的傳出沖動,從而實現對胃等內臟功能的雙向調節作用。內關和公孫之間通過脊髓的中間內、外側核神經元纖維的相互影響,實現特異的增加效應,這可能是兩穴配伍運用能增強臨床效果的機制所在,而孤束核則起著實現兩穴對胃等內臟調節的中樞整合作用。

4 參考文獻

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6 EllisonJ.P.,ClarkG.M.RetrogradeAxonalTrans瞤ortofHorseradishPeroxidaseinPeripheralAuto瞡omicNerves.J.Comp.Neurol.1975;161:103

7 RicardoJ.A.,KohE.T.AnatomicalevidenceofDi瞨ectProjectionsfromtheNucleusoftheSolitaryTracttotheHypothalamus,Amygdala,andOtherForebrainStructuresintheRat.BrainRes.1978;153:1

8 LoweyA.D.,BurtonH.NucleioftheSolitaryTract:EfferentProfectionstotheLowerBrainStemanelSpinalCordoftheCat.JCompNeurol.1978;181:421

9 孟卓.大鼠脊髓灰質向孤束核的投射HRP法研究.神經解剖學雜志,1986;15(3):227(收稿日期:19981202,成平發稿)