鐵皮石斛ｃＤＮＡ文庫(kù)的構(gòu)建及分析
2005-01-01 00:00:00方花魏小勇
生命科學(xué)研究 2005年3期
摘 要：首次報(bào)道鐵皮石斛cDNA文庫(kù)的構(gòu)建及其分析．以Trizol一步法從4年生的鐵皮石斛葉片中提取總RNA，分離純化mRNA，LD-PCR法反轉(zhuǎn)錄合成雙鏈cDNA，以入TripEX2為載體，構(gòu)建鐵皮石斜cDNA文庫(kù)．原始文庫(kù)的滴度為4．3×105pfu/mL， 總克隆數(shù)為3．1 ×105， 重組率為97．6％，擴(kuò)增后文庫(kù)總滴度為6．8×109pfu/mL，對(duì)隨機(jī)挑取的噬菌斑進(jìn)行PCR鑒定，結(jié)果插入片段多分布在0．5—2，0kb之間，絕大部分在1．2-1.7kb左右，文庫(kù)質(zhì)量鑒定結(jié)果表明，構(gòu)建的鐵皮石斛cDNA文庫(kù)具有較好的庫(kù)容量、較高的重組率以及較大的插入片段．cDNA丈庫(kù)的構(gòu)建為鐵皮石斛藥用成分相關(guān)功能基因的研究奠定了基礎(chǔ)．
關(guān)鍵詞：鐵皮石斛；cDNA；文庫(kù)構(gòu)建
中圖分類號(hào)：R282．5
文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A
文章編號(hào)：1007-7847(2005)03—0263—04
