酵母雙雜交文庫(kù)篩選及hTRIP15與Y盒結(jié)合蛋白-1相互作用的探討

彭永德　宋懷東　曲　建　張　新　韓澤廣　陳家倫

摘要：為探討甲狀腺素受體相互作用蛋白（hTRIP15）是否與其他核蛋白發(fā)生相互作用，以hTRIP15作為“誘餌”，用酵母雙雜交技術(shù)篩選人肝cDNA文庫(kù)，在高嚴(yán)格度選擇培養(yǎng)基（SD-Trp-Leu-Ade-His）上長(zhǎng)出的克隆773個(gè)，再經(jīng)β-gal表達(dá)和PCR等技術(shù)進(jìn)一步縮小范圍，經(jīng)Blastn搜尋最終顯示2個(gè)重復(fù)克隆編碼一種共調(diào)節(jié)輔因子—Y盒結(jié)合蛋白-1（YB-1)。將插入序列與全長(zhǎng)YB-1比較發(fā)現(xiàn)進(jìn)入ORF內(nèi)320bp，插入序列編碼82aa，該蛋白稱(chēng)為YB-1-p，經(jīng)蛋白體外翻譯及GST-pulldown試驗(yàn)證實(shí)YB-1-p與hTRIP15可通過(guò)與YB-1相互作用，參與調(diào)控MHCⅡ及TSH受體等甲狀腺細(xì)胞重要基因表達(dá)。

關(guān)鍵詞：Y盒結(jié)合蛋白-1（YB-1）；hTRIP15；酵母雙雜交文庫(kù)篩選；GST pulldown 試驗(yàn)

中圖分類(lèi)號(hào)：Q758

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

文章編號(hào)：1007-7847(2005)01-0015-04