云南紅豆杉紫杉烯合成酶基因克隆、序列分析與植物表達載體的構建

梁素鈺　和麗崗　鄭學勤

摘要：利用分段RT-PCR法成功地從云南紅豆杉葉片總RNA中分離出兩條長約1.4kb和1.5kb的cDNA片段，克隆到pUCm-T載體中，序列拼接分析表明，該cDNA片段與Wildung M R 等發(fā)表的紫杉三烯合成酶基因編碼區(qū)2568bp有41個核苷酸不同，同源性為98.42％，具有編碼862個氨基酸蛋白質的能力。為了檢測所克隆的基因編碼產(chǎn)物是否具有活性，并進一步制備抗體以便于將來轉基因植物的檢測，構建了一個酵母表達載體GAPA-T14；為了轉化植物構建了兩個具有不同啟動子的植物表達載體，PBI121-T14（含35S啟動子）和pBIH-T14（在pBI121的基礎上以膠乳特異啟動子）。

關鍵詞：云南紅豆杉；紫杉烯合成酶；植物表達載體；cDNA克隆；紫杉酶

中圖分類號：Q78

文獻標識碼：A

文章編號：1007-7847(2005)01-0024-05