復方蒲黃腸康膠囊中五倍子的質量標準研究

摘 要：目的：建立復方蒲黃腸康膠囊中五倍子的質量標準。方法：用TLC法鑒別制劑中的五倍子，用HPLC法測定制劑中沒食子酸的含量。色譜柱為C18柱(200mm×4.6mm，5μm)；流動相為甲醇：0.1%磷酸溶液(10∶90)；檢測波長為273nm。結果：在TLC色譜中能檢出五倍子，沒食子酸在26～56μg/ml范圍內，線性關系良好(r²=0.9999)，平均回收率為98.99%，RSD為1.22%。結論：所建鑒別方法專屬性強，定量方法簡便、準確，可用于復方蒲黃腸康膠囊中五倍子的質量控制。

關鍵詞：薄層色譜法；高效液相色譜法；復方蒲黃腸康膠囊；五倍子；沒食子酸

中圖分類號：R284 文獻標識碼：A 文章編號：1673-2197(2008)04-031-03

復方蒲黃腸康膠囊是遼寧醫學生物技術研究所新開發的復方中藥制劑，以天然藥物蒲黃為主藥，聯合五倍子、苦參等中藥材，經提取后而制成的腸溶膠囊，具有抗菌消炎、止血、澀腸、解痙、止瀉的作用。臨床上主要用于治療潰瘍性結腸炎。

沒食子酸是五倍子中主要成分之一，它能與蛋白質結合，對腸道細菌有直接的殺滅作用^[1]。對其進行定性、定量分析的方法有三氯化鐵法^[2]，薄層掃描法^[3]和高效液相色譜法^[4]。為有效的控制其質量，本實驗以五倍子中的沒食子酸為指標，用薄層色譜法鑒別膠囊中五倍子的存在，用高效液相色譜法測定沒食子酸的含量，并初步制訂了質量標準。

1 儀器與試劑

高效液相色譜儀：島津SCL—10Avp高效液相色譜儀，SPD—10Avp二極管陣列檢測器，LC-10ATVP色譜泵。薄層用硅膠GF254(青島海洋化工廠)；復方蒲黃腸康膠囊由遼寧醫學院新藥研究所提供；沒食子酸對照品，購自中國藥品生物制品檢定所，為含量測定用；甲醇為色譜純；水為重蒸水；其他試劑為分析純。

2 方法與結果

2.1 五倍子的鑒別

2.1.1 供試液的制備

將復方蒲黃腸康膠囊除去囊殼，取0.5g本品粉末，加甲醇5ml，超聲處理15min，濾過，濾液作為供試品溶液。

2.1.2 對照品溶液的制備

取沒食子酸對照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作為對照品溶液。

2.1.3 陰性對照溶液的制備

按處方比例制成缺五倍子的陰性對照藥，按照供試品溶液的制備方法制成陰性對照溶液。

照薄層色譜法(附錄Ⅵ B)試驗^[5]，吸取上述三種溶液各2μl，分別點于同一硅膠GF254薄層板上，以氯仿-甲酸乙脂-甲酸(5∶5∶1)為展開劑，上行展開12cm，取出，晾干，置紫外光燈(254nm)下檢視。供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，分別顯相同顏色的斑點。陰性對照品相應的位置上無干擾。(見圖1)

圖1 五倍子TLC色譜圖

1.供試品溶液；2.對照品溶液；3.陰性對照品溶液

2.2 五倍子的含量測定

2.2.1 色譜條件

用Hypersil 0DS2色譜柱(200mm×4.6mm，5μm)；流動相為甲醇：0.1%磷酸溶液(10：90)；檢測波長為273nm。理論塔板數按沒食子酸計算應不低于3000。

2.2.2 對照品溶液的制備

稱沒食子酸對照品2mg，置50ml容量瓶中，加50%甲醇制成40μg/ml的溶液。

2.2.3 供試品溶液的制備

取本品膠囊內容物，研細，稱約1g，精密稱定，精密加入4mol/L的鹽酸溶液50ml.，在水浴中加熱水解3.5h，放冷，濾過。精密量取續濾液1ml，置100ml容量瓶中，加50%甲醇至刻度，搖勻，即得。

2.2.4 陰性對照溶液的制備

按處方比例制成缺五倍子的陰性對照藥，按照供試品溶液的制備方法制成陰性對照溶液。

2.2.5 系統適用性試驗

分別取對照品溶液、供試品溶液及陰性對照溶液適量，用0.45μm濾膜濾過，各進樣10μl，按上述色譜條件測定，記錄色譜圖(見圖2)，按外標法計算樣品含量。

圖2 陰性對照品(上)，對照品(中)，供試品(下)

2.2.6 標準曲線的繪制

精密稱取沒食子酸對照品置于10mL容量瓶中，以甲醇溶解并定容，制成濃度分別為26μg/ml、32μg/ml、40μg/ml、48μg/ml、56μg/ml的溶液。分別精密量取以上5種濃度溶液10μl注入高效液相色譜儀進行測定，以峰面積與濃度進行線性回歸，得回歸方程為：Y=41218X-49520，r2=0.9999。表明濃度在26～56μg/ml范圍內線性關系良好。

2.2.7 穩定性考察

取同一樣品溶液3批，精密吸取10μl，分別在0，6，12進樣，結果RSD為2.94%(n=3)，表明樣品溶液在12h內穩定。

2.2.8 精密度考察

精密吸取沒食子酸對照品溶液，重復進樣5次，測定峰面積，結果RSD為1.82%(n=5)。

2.2.9 回收率實驗

精密稱取5份已測定沒食子酸含量的樣品(批號060307)，分別準確加入沒食子酸對照品適量，按供試品溶液制備方法操作和色譜條件進行測定，計算回收率，測得平均回收率為98.99%，RSD為1.22%(見表1)。

2.2.10 樣品含量測定

分別取批號060206、060307、060409的三批樣品，照供試品制備方法制備供試液，依法測定沒食子酸的含量，三批樣品測定結果見表2。

3 討論

(1)處方中主藥五倍子的有效成分為沒食子酸，是一種比較復雜的高分子多元酚類化合物，處方中其他藥材不含沒食子酸成分，故以沒食子酸作為鑒別依據。薄層色譜法(TCL)設備簡單，分析速度快，分離效率高，結果直觀，是定性分析的常用方法。本文采用薄層色譜法鑒別復方蒲黃腸康膠囊中的五倍子，方法簡便，分離效果好，斑點清晰，空白無干擾，本鑒別方法專屬性強。實驗中薄層板的制備很關鍵，鋪板要均勻，活化要充分，否則有背景熒光斑點的干擾。

(2)本文樣品的提取曾采用超聲提取和水浴加熱提取兩種方法，經過實驗比較，結果后者明顯優于前者，并對樣品水解條件進行了選擇，結果顯示，3.5個小時提取完全。

(3)含量測定采用高效液相色譜法，考察了多種不同類型和不同比例的流動相系統，實驗結果表明：以甲醇0.1%磷酸溶液(10∶90)為流動相系統時分離效果最佳，保留時間適當，重現性好。

(4)采用HPLC法測定復方蒲黃腸康膠囊中沒食子酸的含量，方法簡便，重復性好，結果可靠，可以作為制劑生產中控制質量的方法。

參考文獻：

[1] 季宇彬.中藥有效成分藥理與應用[M].哈爾濱：黑龍江科學技術出版社，1995：203.

[2] 姚敬明，張李俊，王娟平，等.石榴皮、五倍子中鞣質的提取及測定試驗[J].中獸醫學，2004，118(3)：5.

[3] 郭耀武，楊瑞瑞.五倍子中沒食子酸薄層掃描法測定[J].現代中醫藥，2002(5)：77.

[4] 侯惠嬋，梁前，盧迅聰.五倍子、沒食子中沒食子酸的含量測定[J].中國藥品標準，2005，6(3)：38.

[5] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(一部)[M].北京：化學工業出版社，2005.45.

(責任編輯：陳涌濤)

Studies on Quality Standards of Galla Chinensis for Fufang Puhuang Changkang Capsules

ZHAO Yan，WANG Hongxin

(Scientific Experimental Center of Liaoning Medical College，Jinzhou 121001，China)

Abstract：Objective：To establish the quality standards of Galla Chinensis for Fufang Puhuang Changkang capsules.Methods：The presence of Galla Chinensis was identified by TLC.The content 0f gallic acid was determined by HPLC.The separation of gallic acid was performed on Hypersil 0DS₂ chromatographic column；the mobile phase was composed of methanol-0.1% phosphoric acid solution(10∶90) with a flow rate of 1.0ml/min and detection wavelength of 273nm.Results：TLC can be used to determine the presence of Galla Chinensis.The linear range of gallic acid was 26～56μg/ml(r²= 0.9999).the average recovery rate was 98.99%(RSD=1.22%).Conclusion：These methods are specific and accurate.they can be used to control the quality of Galla Chinensis for Fufang Puhuang Changkang capsules.

Key words：TLC；HPLC；Fufang Puhuang Changkang capsules；Galla Chinensis；Gallic acid