當歸片質量標準的研究

　　摘　要：目的：建立當歸片的質量標準。方法：采用薄層色譜法對當歸片中的當歸進行鑒別；用高效液相色譜法對制荊中的阿魏酸進行定量分析。結果：薄層色譜條件為硅膠G薄層板，展開劑石油醚(30～60℃)-醋酸乙酯(4：1)，樣品、對照品和對照藥材相應的位置上，顯相同顏色的斑點；測定阿魏酸的色譜條件是Agilent ZORBA SB C18色譜柱(4.6×150mm，5μm)，流動相為乙腈-0.1％磷酸水溶液(12：88)；檢測波長為322nm，流速1.0ml／min，柱溫為30℃。阿魏酸在0.12～2.0pg范圍呈良好的線性關系，r=0.9995(n=7)，平均回收率為98.96％，RSD為1.09％。結論：所建立的方法可準確地進行定性和定量檢測，該法準確、可靠、重復性好，可有效控制當歸片的質量。
　　關鍵詞：當歸片；薄層色譜法；高效液相色譜法；阿魏酸；質量標準
　　中圖分類號：R927．11　文獻標識碼：A
　　文章編號：1007-2349(2008)01-0033-02
　　
　　當歸片為當歸的浸膏制劑，具有補血活血，調經止痛的功能。用于血虛引起的面色萎黃，眩暈心悸，月經不調，經閉痛經，虛寒腹痛，腸燥便秘。該制劑質量標準收載于衛生部藥品標準中藥成方制劑中，但標準中無鑒別和含量測定項，檢驗工作中發現不同廠家的生產的產品片心質地不同，質地疏松的片心肉眼及顯微鏡下均能看到較多的植物組織，說明這類藥品非完全是浸膏片，有摻藥材原粉的現象，應增加定量分析來進行控制。本實驗采用薄層色譜法進行鑒別，用高效液相色譜法來控制當歸片中阿魏酸的含量，以達到定量的目的。結果表明，本法操作簡便，準確度高、省時、快速，可用于該藥品的質量控制。
　　
　　1　儀器與試藥
　　
　　1．1　儀器　Agilent 1100高效液相色譜儀，包括G1315A／BDAD檢測器，G1313A ALS自動進樣器，Agilent 1100色譜工作站(美國安捷倫科技有限公司)；梅特勒電子天平AE240(瑞士)；SZ-97自動三重純水蒸餾器(上海亞榮生化儀器廠)；超聲波清洗器(上海科導超聲儀器公司)。
　　
　　1．2　試藥　甲醇、乙腈(色譜純)、水(重蒸餾純凈水)、阿魏酸對照品(中國藥品生物制品檢定所，批號：0856-200532)、當歸對照藥材(市售，由大理學院藥學院生藥學教研室鑒定)、當歸片(四川樂山大干藥業有限公司，批號：060486；江西青風制藥廠，批號：20060428)。
　　
　　2　方法與結果
　　
　　2．1　薄層色譜鑒別　取供試品10片，去除糖衣，研細，加石油醚30ml，超聲處理20min，過濾，濾液置蒸發皿中在水浴上揮干，殘渣用甲醇2ml溶解作為供試品溶液，另取阿魏酸對照品，加甲醇配成每1ml含1mg的溶液，作為對照品溶液；再取當歸對照藥材2g，研細，按供試品溶液的制備方法制成對照藥材溶液，分別吸取上述3種溶液各10μl，點于同一硅膠G薄層板上(10cm×20cm)，以石油醚(30～60℃)～醋酸乙酯(4：1)為展開劑，展開，取出，涼干。置紫外燈(365nm)下檢視，供試品色譜中在與對照品和對照藥材色譜相同的位置上顯相同顏色的斑點，見圖1。
　　2．2　含量測定
　　2．2．1 色譜條件 色譜柱：Agilent ZORBA C18(4.6×150mm，5ptm)，流動相：乙腈-0.1％磷酸水溶液(體積比為12：88)，流速：1.0ml／rain，柱溫：30℃，檢測波長：320nm，進樣量：10μl，理論塔板數大于5000。阿魏酸對照品、當歸對照藥材和當歸片的HPLC色譜圖見圖2。
　　
　　2．2．2　對照品溶液的制備精密稱取干燥至恒重的阿魏酸對照品5.0mg，置50ml的量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，作為儲備液。再將該母液用流動相稀釋配制成不同濃度的對照品溶液，備用。
　　2．2．3　供試品溶液的制備取供試品當歸片10片，去除糖衣，精密稱定，求出平均片重，研細。精密稱取約1.0g，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇25ml，密塞，精密稱定，超聲處理30min，放冷，再稱定重量，并用甲醇補足損失重量，搖勻，濾過，取續濾液10μl進樣。
　　2．2．4　標準曲線和線性范圍　取2．2．2節中制備好的阿魏酸對照品標準溶液，分別用甲醇稀釋成濃度為0.2．0.16，0.12，0.08，0.04，0.02，0.012mg／ml的標準溶液，按2．2．1節選定的色譜條件，每次進樣10μ1，測定阿魏酸的峰面積，以進樣質量為橫坐標，峰面積為縱坐標繪制標準曲線，得回歸方程為Y=3212.1X+16.561，r=0.9995，結果表明進樣量在0.12～2.0gg范圍內線性關系良好。
　　
　　2．2．5　精密度試驗和穩定性試驗 精密吸取阿魏酸對照品溶液(0.02mg／m1)。按選擇的色譜條件連續進樣6次，其峰面積的RSD為0.31％，表明儀器精密度較好。取同一樣品液，每隔1h進樣1次，每次10μl，測定峰面積，結果表明樣品液在6h內穩定(n=6)，阿魏酸峰面積的RSD為1.63％。
　　2．2．6　重現性試驗　精密稱取供試品粉末5份，每份1g。按“供試品溶液的制備”進行平行提取，在選定色譜條件下測定阿魏酸的含量，RSD為1.80％，分析結果表明重現性較好。
　　2．2．7　回收率試驗　精密稱取已知含量的供試品5份，分別精密加入一定量的阿魏酸對照品液，照2.5項下方法操作，進行回收率測定，結果見表1。
　　2．2．8　樣品的測定　取6份樣品溶液(四川樂山大干藥業有限公司．批號：060486)按上述色譜條件進行分析，按標準曲線回歸方程計算阿魏酸的含量，當歸片中阿魏酸含量為4.1612mg／g(n=6)。
　　
　　3　討論
　　
　　從本研究建立的薄層色譜測定方法來看，薄層色譜展開系統分離效果好，斑點清晰，不拖尾，供試品與對照品藥材色譜相應位置上顯相同顏色的斑點，但實驗中發現，有個別廠家生產的當歸片由于當歸浸膏含量不足，斑點不夠清晰。
　　實驗參照有關文獻，流動相中水相采用0.1％的磷酸水溶液，可以減少拖尾，改善峰形，且分離效果好。經試驗，以乙腈一水(0.1％磷酸)12：88為流動相時分離效果最佳。
　　實驗結果表明，該方法具有操作簡便、重現性好、靈敏、準確等特點，可用于當歸片質量的控