奶牛口蹄疫疫苗后海穴注射免疫效果試驗

摘要：通過奶牛口蹄疫疫苗經后海穴注射與其他免疫方式比較研究其免疫效果、應激反應，結果表明：后海穴注射組的抗體合格率均顯著高于肌肉注射組（P<0.05），說明穴位注射免疫方式比常規肌肉注射方式更容易激發動物機體的免疫系統，產生更強的免疫保護力。后海穴注射的安全性高于肌肉注射，沒有發生嚴重應激反應病例，免疫前后每頭奶牛平均損失產奶量僅1.5kg、1.7kg，顯著低于肌肉注射每頭奶牛平均損失奶量5.0kg的水平。由此可見，奶牛口蹄疫疫苗的后海穴注射的免疫效果好，應激反應低，明顯優于肌肉注射方式。通過2次加強免疫的抗體合格率顯著高于1次注射（P<0.05），且2次加強免疫的抗體持續期在3個月以上，而1次注射僅能維持1~2個月的高抗體水平。建議奶?？谔阋呙庖卟捎煤蠛Ｑㄗ⑸湟呙?mL，15d后加強免疫1次的方式進行。

關鍵詞：后海穴；免疫預防；奶牛；口蹄疫

中圖分類號：S858.235.3 文獻標識碼：A 文章編號：1007－273Ｘ（2008）11-0008-03

1材料方法

1.1材料

1.1.1試驗動物宜昌市夷陵區水府廟奶牛小區健康成年荷斯坦產奶牛65頭。

1.1.2試驗疫苗牛口蹄疫O型滅活疫苗100mL/瓶（濃縮苗），中國農業科學院蘭州獸醫研究所生產，批號：5232021。

1.1.3試驗試劑純化滅活口蹄疫診斷抗原，標準陽性、陰性血清，稀釋液（PBS），由中國農業科學院蘭州獸醫研究所生產。

1.2方法

1.2.1試驗分組與疫苗接種①試驗分組：選擇未接種口蹄疫疫苗的健康產奶牛65頭，分成4組：第1組（肌注，單次免疫）：產奶牛17頭，2005年9月22日單獨頸部肌肉注射口蹄疫疫苗3mL/頭。第2組（肌注，加強免疫）：產奶牛19頭，2005年9月22日單獨頸部肌肉注射口蹄疫疫苗3mL/頭，10月7日同樣部位注射口蹄疫疫苗3mL/頭。第3組（后海穴注射，單次免疫）：產奶牛14頭，2005年9月22日后海穴注射口蹄疫疫苗2mL/頭。第4組（后海穴注射，加強免疫）：產奶牛15頭，2005年9月22日后海穴注射口蹄疫疫苗2mL/頭，10月7日同樣部位注射口蹄疫疫苗2mL/頭（見表1）。②接種操作規范與注意事項：a.頸部肌肉注射：牛接種口蹄疫疫苗時使用4cm長16號針頭，頸部三角區深層肌肉注射，用量為成牛每頭3mL。b.后海穴注射：注射時將尾巴拉起，找準后海穴，用碘酊和酒精消毒，將4cm長的16號針頭向前向上緩緩刺入3～5cm后注入疫苗。

注射疫苗注意事項：注射器和針頭應嚴格消毒，盡量保證一畜一針頭；入針深度適中，確實注入肌肉內。

1.2.2免疫反應觀測①試驗期間，安排專業獸醫人員記錄疫苗注射后過敏反應癥狀、治療方案、轉歸、劃分應激反應類型，對嚴重應激反應用腎上腺素及時救治。輕度應激反應：奶牛食欲減退，產奶量下降，逐漸恢復。中度應激反應：注射疫苗后奶牛出現高熱、呼吸困難、流涎甚至突然倒地等癥狀。②稱量、記錄免疫注射前后1周即2005年9月15日至9月28日每日每組的產奶量，并計算出頭均日單產。

1.2.3血清采集將試驗牛分別于9月22日、10月13日（第21天）、10月28日（第36天）、11月28日（第66天）、12月28日（第96天）頸靜脈采血2mL/頭，靜置分離血清0.5mL/頭待用。

1.3試驗牛抗體效價測定

測定方法：本次試驗?？谔阋呖贵w監測均采用正向間接血凝試驗[1]。

2結果與分析

2.1試驗結果

抗體效價測定結果見表2。

從表2可見：①用口蹄疫疫苗1次后海穴注射免疫（3組）與1次肌肉注射（1組）后21d抗體檢測顯示牛群抗體合格率分別為79%、35%，后海穴1次免疫后第36、66、96天抗體分別為93%、64%、36%，而肌肉注射疫苗后第36、66、96天試驗組牛群抗體合格率分別為53%、24%、0。②從第2組、第4組的加強免疫后第21天的抗體檢測結果顯示，后海穴加強免疫注射組（第4組）抗體合格率達到73%，而肌肉2次注射組（第2組）為32%。在加強免疫后第36、66、96天的抗體檢測結果顯示，后海穴加強免疫注射組的抗體合格率分別100%、93%、73%，均高于肌肉2次注射組的63%、84%、58%，后海穴加強注射免疫方式比常規肌肉2次注射免疫方式的抗體合格率高，見圖1。

2.2后海穴免疫與常規肌肉免疫抗體消漲規律

口蹄疫疫苗1次后海穴注射免疫（第3組）與1次肌肉注射（第1組）的抗體合格率和免疫持續期顯著低于后海穴免疫組，經差異顯著性檢驗，差異顯著（P<0.05）。后海穴加強免疫注射組顯著高于肌肉2次注射組的抗體合格率，經差異顯著性檢驗，差異顯著（P<0.05）。奶牛口蹄疫疫苗無論是后海穴注射還是常規肌肉注射，進行2次免疫3個月后仍能維持較高的抗體水平，即使是后海穴1次注射在免疫后3個月內抗體水平高于常規肌肉2次注射，但3個月后，2次注射的抗體水平逐漸高于后海穴1次注射。試驗表明：1次肌肉注射僅能維持1個月左右的高抗體水平，1次后海穴注射能維持3個月左右的高抗體水平，而后海穴和肌肉2次注射均能維持3個月以上的高抗體水平（見圖1）。

2.3后海穴免疫與常規肌肉免疫發生應激反應分析

在疫苗注射過程中，幾乎所有牛在注射口蹄疫疫苗后出現產奶量下降、食欲減退等應激反應，在肌肉注射組（1組、2組）出現的中度應激反應數（3/36=8%），遠遠高于后海穴注射組（0/29=0%），后海穴注射組都只出現了輕微應激反應，從免疫前后1周奶量損失比較，肌肉注射組7d損失奶量頭均5kg（1組）、5.1kg（2組），后海穴注射組注射后7d損失奶量頭均1.7kg（3組）、1.5kg（4組），比肌肉注射組少損失3.3~3.6kg/頭（見表3）。

從圖2可以看出，后海穴注射組的奶量減少在注射疫苗后1～2d，從第3天基本恢復正常，而肌肉注射組產量恢復要緩慢很多，差不多要7d左右才可恢復正常，可見后海穴注射優于肌肉注射，免疫應激反應小。

2.4加強免疫與常規單次免疫抗體免疫效果分析

在初免后15d用相同劑量通過同一途徑加強免疫1次（試驗中2、4組為加強免疫組），與常規單次免疫方式相比，在2免后21d能達到較高的抗體合格率（2組達到63%，4組達到100%），并且維持的時間長，在加強免疫后96d時，2次注射的抗體合格率（2組為58%，4組為73%）明顯高于1次免疫（1組為0，3組僅為36%）的抗體合格率，后海穴1次免疫與常規肌肉2次免疫相比，在免疫后21d到常規肌肉加強免疫第51天這段時間，后海穴1次免疫的抗體合格率高于常規肌肉2次免疫，但在加強免疫51d后，后海穴免疫的抗體合格率迅速下降，到加強免疫96d時，已明顯低于常規肌肉2次免疫，可見2次加強免疫可以有效延長有效抗體時間（1次免疫僅能維持1~2個月的有效抗體），2次免疫可使有效抗體延長到3個月以上。

3小結與討論

3.1口蹄疫疫苗后海穴免疫注射與肌肉注射比較

口蹄疫疫苗后海穴注射免疫的抗體效價合格率顯著高于肌肉注射的抗體效價合格率，穴位注射更夠產生更好的免疫效果。而且后海穴注射后21d就能達到較高的抗體合格率，顯著早于肌肉注射，抗體持續期也較長。驗證了孟憲松的后海穴注苗有免疫增強作用的理論。后海穴注射免疫時，一是疫苗本身啟動了免疫系統，二是穴位刺激亦激活了神經內分泌系統[2]。當神經系統接受到穴位刺激傳來的信息時，通過神經末梢釋放神經遞質直接作用于免疫細胞膜表面的相應受體而直接參與免疫調節作用。由于神經系統參與了免疫調節，縮短了免疫系統對抗原的應答時間，因而縮短穴位免疫時抗體產生堅強免疫的時間，后海穴免疫不僅可降低疫苗的免疫劑量（比常規肌肉少1mL），而且還可使機體提前產生堅強免疫力和增強弱抗原的免疫原性[3]，為奶?？谔阋咭呙缱⑸涮峁┝艘环N新的有效免疫方式，也為奶?？谔阋呙庖呓档土顺杀?。

3.2穴位免疫與常規免疫應激反應比較

后海穴注射能顯著減輕奶牛口蹄疫疫苗免疫的應激反應，主要表現為后海穴免疫注射的安全性好，本試驗中后海穴免疫注射組應激反應臨床癥狀顯著比肌肉注射組輕，沒有發生中度應激反應病例。而且后海穴免疫注射組應激反應引起的奶產量損失顯著比肌肉注射組少。這種應激反應主要是變態反應和炎性反應，反應程度的輕重可能與后海穴注射降低疫苗劑量有關[4]，具體機理還需要進一步深入研究。總之，后海穴免疫比肌肉注射安全性好，經濟實用。

3.3加強免疫與常規單次免疫效果的比較

加強免疫優于常規單次免疫效果。奶牛口蹄疫疫苗無論是后海穴注射還是常規肌肉注射，進行2次免疫3個月后仍能維持較高的抗體水平，即使是后海穴1次注射在免疫后3個月內抗體水平高于常規肌肉2次注射，但3個月后，2次注射的抗體水平逐漸高于后海穴1次注射[5]。試驗表明：1次肌肉注射僅能維持1個月左右的高抗體水平，1次后海穴注射能維持3個月左右的高抗體水平，而后海穴和肌肉2次注射均能維持3個月以上的高抗體水平。

參考文獻：

［１］沈秋站，鄒勇．影響口蹄疫正向間接血凝試驗因素的研究［Ｊ］．江西畜牧獸醫雜志，１９９８（６）：１２－１３．

［２］孟憲松．后海穴的臨床應用與研究進展［Ｃ］．全國獸醫針刺免疫學術研討會論文集，１９９３.１－７．

［３］蔣圣嬌，劉俊，朱亞萍．豬后海穴注射口蹄疫濃縮滅活苗的試驗報告［Ｊ］．當代畜牧，２００２（２）：８－９．

［４］曹?？?，梁利雅．大面積注射口蹄疫滅活疫苗注意事項［Ｊ］．畜牧獸醫雜志，２００２，２１（４）：４５－４６．

［５］張允茂，王紅軍．奶?？谔阋咦⒚缑庖吆蟮陌l病原因淺析［Ｊ］．中國奶牛，1999（6）:41-42.