ＨＰＬＣ法測(cè)定玉葉清火膠囊中穿心蓮內(nèi)酯和脫水穿心蓮內(nèi)酯的含量

陳劍峰　林　昊

（1.岑溪市人民醫(yī)院，廣西 岑溪 543200；2.梧州食品藥品檢驗(yàn)所，廣西 梧州 543002）お

摘 要：目的：建立測(cè)定玉葉清火膠囊中穿心蓮內(nèi)酯和脫水穿心蓮內(nèi)酯含量的高效液相色譜法。方法：采用VP-ODS柱C18（250mm×4.6mm，5μm）柱分離，以甲醇―水（55∶45）為流動(dòng)相，在250nm處檢測(cè)。結(jié)果：穿心蓮內(nèi)酯在0.00676～0.1082g范圍內(nèi)線性關(guān)系良好（r=0.9998），平均回收率為98.82%，RSD=0.8%（n=6）;脫水穿心蓮內(nèi)酯在0.01288～0.2061g范圍內(nèi)線性關(guān)系良好（r=0.9997），平均回收率為98.95%，RSD=1.6%（n=6）。結(jié)論：該法操作簡(jiǎn)便，方法穩(wěn)定，專屬性強(qiáng)，可作為該制劑的質(zhì)量控制方法。

關(guān)鍵詞：玉葉清火膠囊；HPLC；穿心蓮內(nèi)酯；脫水穿心蓮內(nèi)酯

中圖分類號(hào)：R284.1文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A文章編號(hào)：1673-2197（2009）03-0023-02

玉葉清火膠囊是由玉葉清火片^[1]改劑型而來，它包含玉葉金花、穿心蓮、梔子、墨旱蓮、倒扣草等中草藥組方。具有清熱解毒、消腫止痛的功效，用于喉痹、暴喑、急性咽炎以及其它風(fēng)熱癥者。為控制該藥品的質(zhì)量，本研究采用HPLC法測(cè)定穿心蓮中穿心蓮內(nèi)酯和脫水穿心蓮內(nèi)酯的含量。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

島津LC-2010 HPLC；日本AND GR-202電子分析天平。

1.2 試藥

穿心蓮內(nèi)酯對(duì)照品、脫水穿心蓮內(nèi)酯對(duì)照品購于中國(guó)藥品生物制品檢定所；水為高純水；甲醇（色譜純Fisher Scientific）；其它化學(xué)試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱為島津VP-ODS柱（250mm×4.6mm，5μm）;流動(dòng)相：以甲醇―水（50∶50）為流動(dòng)相;流速：1.0mL/min;檢測(cè)波長(zhǎng)：250nm;柱溫為室溫；進(jìn)樣：10μL。

2.2 溶液的配制

2.2.1 對(duì)照品溶液的制備

精密稱取穿心蓮內(nèi)酯、脫水穿心蓮內(nèi)酯對(duì)照品適量，分別加甲醇制成每1mL含穿心蓮內(nèi)酯50μg、脫水穿心蓮內(nèi)酯100μg的溶液，即得。

2.2.2 供試品溶液的制備

取本品內(nèi)容物，研細(xì)，取約1.5g，精密稱定，精密加入甲醇50mL，稱定重量，超聲處理30min，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.2.3 陰性對(duì)照溶液

按處方比例稱取除穿心蓮以外的其余味藥，按玉葉清火膠囊制備工藝制成缺穿心蓮陰性樣品;按2.2.2項(xiàng)下操作，制成缺穿心蓮的陰性對(duì)照溶液。

2.3 系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

在上述色譜條件下，穿心蓮內(nèi)酯、脫水穿心蓮內(nèi)酯的保留時(shí)間分別為8.42min和23.38min，與相鄰色譜峰的分離度均大于1.5，對(duì)稱因子在0.95～1.05之間，理論塔板數(shù)按穿心蓮內(nèi)酯計(jì)算不低于4000，按脫水穿心蓮內(nèi)酯計(jì)算不低于8000。陰性對(duì)照對(duì)樣品測(cè)定無干擾。結(jié)果見圖1、圖2。

2.4 專屬性考察

取缺穿心蓮陰性樣品按供試品溶液制備方法制備，進(jìn)樣，測(cè)定。圖譜表明在該色譜條件下，陰性對(duì)照無干擾，結(jié)果見圖3。

2.5 供試品測(cè)定

按上述色譜條件，取供試品溶液，進(jìn)樣，測(cè)定。圖譜中供試品溶液與對(duì)照品溶液有相同的色譜峰，表明供試品為穿心蓮內(nèi)脂和脫水穿心蓮內(nèi)脂，如圖4。

2.6 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備

精密稱取穿心蓮內(nèi)酯13.52mg，脫水穿心蓮內(nèi)酯對(duì)照品25.76mg置100mL量瓶中，搖勻，作為對(duì)照品儲(chǔ)備溶液（濃度分別為0.1352，0.2576mg/mL）。精密量取對(duì)照品儲(chǔ)備溶液0.5、1、2、4、8mL，分別置10mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，分別精密吸取上述6個(gè)對(duì)照品溶液各10mL，按正文擬定的色譜條件測(cè)定。以穿心蓮內(nèi)酯、脫水穿心蓮內(nèi)酯對(duì)照品進(jìn)樣量（g）為橫坐標(biāo)（X），峰面積積分值為縱坐標(biāo)（Y）繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程為：

穿心蓮內(nèi)酯：Y=823520X+4333.3（r=0.9998）

脫水穿心蓮內(nèi)酯：Y=1762866X-5264（r=0.9997）

結(jié)果表明：當(dāng)穿心蓮內(nèi)酯在0.00676～0.1082g范圍內(nèi)，脫水穿心蓮內(nèi)酯在0.01288～0.2061g時(shí)，進(jìn)樣量與峰面積積分值呈良好的線性關(guān)系。

2.7 精密度實(shí)驗(yàn)

取同一份供試品溶液，按上述色譜條件，連續(xù)進(jìn)樣6次，測(cè)定峰面積積分值，穿心蓮內(nèi)酯的RSD為0.36％，脫水穿心蓮內(nèi)酯的RSD為0.29%。

2.8 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)

取同一份樣品溶液，放置0，1，2，4，8，12h，按上述色譜條件，分別測(cè)定峰面積積分值，RSD為0.82％。

2.9 重復(fù)性實(shí)驗(yàn)

精密稱取同一批的樣品6份，按上述方法試驗(yàn)，結(jié)果穿心蓮內(nèi)酯的平均含量為0.912mg/g，RSD=1.47%，脫水穿心蓮內(nèi)酯平均含量為2.024mg/g，RSD=1.06%。

2.10 加樣回收率實(shí)驗(yàn)

精密量取線性關(guān)系項(xiàng)下穿心蓮內(nèi)酯對(duì)照品儲(chǔ)備溶液（濃度為0.1352mg/mL）50mL，置500mL量瓶中，精密稱取脫水穿心蓮內(nèi)酯對(duì)照品12.46mg置同一量瓶中，加甲醇使溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照品溶液（穿心蓮內(nèi)酯濃度為13.52g/mL，脫水穿心蓮內(nèi)酯濃度為24.92g/mL）。精密稱取重復(fù)性試驗(yàn)項(xiàng)下的玉葉清火膠囊（穿心蓮內(nèi)酯含量0.912mg/g，脫水穿心蓮內(nèi)酯含量2.068mg/g）約0.75g，平行取6份樣，分別精密加入上述對(duì)照品溶液各50mL，按正文擬訂的方法提取、測(cè)定，計(jì)算回收率，結(jié)果詳見表1，表2。

3 討論

嘗試了乙腈－水以及甲醇－水等不同的濃度比，發(fā)現(xiàn)甲醇－水（50∶50）峰形對(duì)稱，無干擾，故選擇為流動(dòng)相。

參考文獻(xiàn)：

［1］ WS-1109（ZD-1093）-2002，國(guó)家藥品中藥標(biāo)準(zhǔn)［S］.2002.

（責(zé)任編輯：陳涌濤）