先秦及秦漢原創性單味鎮痛中藥微米粉末噴灑用于肛腸病術后創面鎮痛的實驗研究

何永恒　劉　麗

摘 要：目的：評價花椒微米粉末、防風微米粉末對肛腸病術后疼痛的鎮痛效果及安全性，并對其鎮痛作用機理進行初探。方法：分別采用小鼠熱板法及小鼠醋酸扭體法實驗來觀察實驗藥物的整體鎮痛效果；建立小鼠肛腸病術后疼痛模型，采取酶聯免疫吸附試驗（ELISA）測定該模型小鼠血清中前列腺素E2（PGE2）和β-內啡肽（β-EP）水平，初探微米粉末的鎮痛機制；以急性皮膚粘膜刺激實驗觀察藥物外用的毒性與不良反應。結果與結論：先秦及秦漢時期原創性單味中藥微米粉末—花椒微米粉末及防風微米粉末對肛腸病術后鎮痛是安全有效的，其鎮痛機制可能與降低血清中PGE2含量，提高β-EP含量有關。

關鍵詞：先秦；秦漢；原創性；單味；鎮痛；微米粉末；肛腸病術后；實驗研究

中圖分類號：R243.2文獻標識碼：A文章編號：1673-2197（2009）02-0029-03

清?孫星衍《神農本草經?卷三?下經?蜀椒》：“蜀菽，味辛，溫，主……痹痛……”。清?孫星衍《神農本草經?卷一?上經?防風》：“防風，味苦，溫，無毒，主大……疼痹（《御覽》作痛）……”。

1 材料與方法

（1）清潔級昆明種小白鼠，雌雄不限，體重為18~22g(由湖南中醫藥大學動物實驗中心提供)，動物合格證：scxk（湘）2004-0005。

（2）實驗器材包括三用恒溫水箱（浙江省余姚市檢測儀表廠生產，浙制02810175），高速離心機（長沙平凡儀器儀表有限公司生產，TG16-Ⅱ），AO-820組織切片機（美國生產，湖南中醫藥大學病理教研室提供），400倍奧林巴斯光學顯微鏡（日本生產，湖南中醫藥大學病理教研室提供），Thermo multiskanink3酶標儀（美國熱電-芬蘭雷勃酶標儀MK3）。

（3）實驗藥物包括花椒微米粉末（D50=16.89μm，D90=57.94μm），防風微米粉末（D50=7.71μm，D90=32.79μm），由湖南中醫藥大學教育部工程技術研究中心提供。

（4）實驗試劑包括阿司匹林原料藥（山東新華制藥股份有限公司生產，國藥準字號：H37020354，批號：07200），鹽酸曲馬多原料藥（中國科學院分裝，標準：EP 5.0，批號：070227），PGE2 ELISA試劑盒 （上海森雄科技實業有限公司進口分裝，批號：0711111），β-內啡肽 ELISA試劑盒（BPB Biomedicals，Inc.USA，湖南晶科生物試劑有限公司原裝進口，批號：70621S），冰醋酸溶液（上海試劑一廠生產，批號：AR500mL 050906），分析純，臨用時以蒸餾水配成0.6％濃度。

（5）實驗用藥計算參照《中華人民共和國藥典》（2005版），花椒臨床常用量為5g，防風臨床常用量為10g，所有實驗藥物劑量均以其臨床常用量為基準，參照文獻［1］方法計算。

（6）小鼠熱板法實驗：按文獻［1］方法取合格小鼠（雌性）180只，隨機分為空白組、花椒低劑量組、花椒中劑量組、花椒高劑量組、防風低劑量組、防風中劑量組、防風高劑量組、阿司匹林組、鹽酸曲馬多組，觀測指標及給藥方法同文獻［2］所述。各組用藥量：空白組：生理鹽水（1mL/只）；花椒低劑量組：0.015g/只；花椒中劑量組：0.03g/只；花椒高劑量組：0.06g/只；防風低劑量組：0.03g/只；防風中劑量組：0.06g/只；防風高劑量組 0.12g/只；阿司匹林組：0.0016g/只；鹽酸曲馬多組：0.0002g/只。

（7）小鼠扭體法實驗：按文獻［1］方法將小鼠162只隨機分為9組，各組分組及用藥量同小鼠熱板法實驗，主要觀察指標為扭體次數、扭體抑制率，給藥方法同文獻［1］所述。

（8）肛腸病術后疼痛模型實驗：參考Milligan-Morgan痔手術操作方法［4］ 造模，在尾底近端皮膚與粘膜交界處，作尖端向外的倒V字形切口，保持創面約0.5cm×0.5cm大小。隨機選取90只造模成功小鼠，分為模型對照組、花椒高劑量組、防風高劑量組、阿司匹林組、鹽酸曲馬多組與未造模的正常對照組，共6組，分別給藥如下：正常對照組：適量面粉；模型對照組：適量面粉；花椒高劑量組：0.06g/只；防風高劑量組：0.12g/只；阿司匹林組：0.0016g/只；鹽酸曲馬多組：0.0002g/只。給藥方式均為用無菌棉簽粘取各藥粉均勻涂于創面，以紗布覆蓋，膠布固定，連續給藥3天，每天兩次。

（9）小鼠血清中PGE2和β-EP測定：分別采集肛腸病術后疼痛模型實驗中各組小鼠眼眶靜脈血，分離血清，測定PGE2和β-EP值（采用ELISA法）。

（10）急性皮膚粘膜刺激性實驗：按文獻［3］方法將昆明種小鼠64只隨機分為花椒高劑量組（0.06g/只）、防風高劑量組（0.12g/只）。每組中隨機選取一半小鼠保持皮膚完好不受損傷，另外一半小鼠實驗時用75%酒精消毒皮膚，無菌16號針頭將完好皮膚劃#號，滲血為度，用藥方法及觀察方法同文獻［5］所述。

（11）統計學分析：計量資料以±S表示，統計分析采用SPSS15.0統計軟件包進行。

2 結果

2.1 小鼠熱板法

從表1可知，花椒、防風各組與空白組比較，痛閾提高率有明顯差異（P<0.05），且花椒在痛閾提高率上具有量效關系；花椒高劑量組與鹽酸曲馬多組比較，痛閾提高率無明顯差異（P＞0.05）；防風中劑量組與阿司匹林組比較，痛閾提高率有明顯差別（P<0.05）。br>

2.2 小鼠扭體法

從表2可知，花椒、防風各組與空白組比較，抑制率有明顯差異（P<0.05）；花椒高劑量組與鹽酸曲馬多組比較，抑制率無明顯差異（P＞0.05）；防風高劑量組與阿司匹林比較，抑制率無明顯差異（P＞0.05）。

2.3 肛腸病術后疼痛模型實驗

從表3可知，花椒、防風與正常對照組比較，PGE₂和β-EP（OD值）有明顯差異（P<0.05）；花椒組與阿司匹林組比較，PGE₂和β-EP（OD值）有明顯差異（P<0.05），與鹽酸曲馬多組比較，PGE₂和β-EP（OD值）無差異（P＞0.05）；防風組與阿司匹林組比較，PGE₂和β-EP（OD值）無差異（P＞0.05）。

2.4 急性皮膚粘膜刺激性實驗

由表4、表5可知，用藥前后小鼠體重相當，前后比較，差異無統計學意義（P>0.05），肉眼觀察小鼠皮膚毛發、眼、粘膜、呼吸狀況、中樞神經系統、四肢活動等動物的全身情況均未見中毒表現，可認為花椒微米粉末與防風微米粉末用于皮膚粘膜外用是安全的。

3 討論

花椒在臨床上多入煎劑使用，但也有通過粘膜吸收的報道，歷史上就有通過口腔粘膜及牙周組織吸收治療牙痛的記載?，F代研究有通過鼻粘膜吸收花椒粉末，治療變態反應性鼻炎的報道［4］，治療時直接經鼻孔吸入少許藥粉或用消毒棉簽蘸取藥粉少許供鼻孔吸入，收到明顯效果。臨床還有通過皮膚、粘膜，甚至組織潰瘍面吸收的報道，如李真、周書平［5］等用花椒、食鹽水熏洗坐浴治療肛管疾患術后，其研究認為，花椒、食鹽熏蒸，能使局部血管擴張而減輕充血，麻木感覺神經而減輕疼痛，取得了良好的臨床效果；周正山［6］用花椒水浸泡治療下肢靜脈曲張潰瘍56例，其中輕度者10天治愈，中度一般7天好轉，重度10天好轉，有效率100％。以上報道均與本次實驗在用藥方式上有類似之處，為本次實驗提供了有力的證據。

臧林泉等［7］試驗分析證實，花椒種籽油由棕櫚酸、棕櫚油酸、硬脂酸、油酸、亞油酸、亞麻酸及在該種籽油中未見報道的十七碳烯酸組成，主要成分油酸、亞油酸、亞麻酸，混合含量高達57.549%~87.907%。王軍、梁穎［8］等研究表明α-亞麻酸能顯著抑制大鼠PGE₂的產生，從而產生鎮痛作用；本次實驗研究表明，花椒能明顯提高小鼠血清中β-EP的含量，從而產生鎮痛作用。

花椒的主要鎮痛成分有花椒酰胺［9］、香豆素類單體化合物香柑內酯［10］、hydroxy-α-，β-，γ-sanshool、hydroxy α- sanshool、hydroxy-γ-sanshool［11］，其主要鎮痛機制與中樞去甲腎上腺素能α-受體有關。王東吉［12］等為了探討花椒的鎮痛作用機制，應用電生理學方法觀察了不同濃度的花椒浸液對蟾蜍離體神經干C類纖維動作電位幅度和傳導速度的影響，結果表明不同濃度的花椒浸液對蟾蜍離體神經干C類纖維動作電位幅度和傳導速度均有明顯的抑制作用，且隨著花椒浸液濃度的增高，動作電位消失增快，兩者之間呈顯著負相關。

防風的主要鎮痛成分有色酮類、香豆素、聚乙炔和1-甘油酯類化合物，divarieatol(8)和(3s)-hydroxydeltoin(12)等，作用最強的是色酮類，其鎮痛機理包括抗炎、中樞神經系統作用和對肝臟代謝酶的抑制作用(延長戊巴比妥誘導的催眠反應)等［13］。升麻甙(prim-o-glucosylcimifugin)和5-O-甲基維斯阿米醇甙(4，-o-β-D-glucosyl-5-O-methylvisamminol)是從防風中提取的2種色原酮甙類成分，兩者的作用與強痛定50mg.kg-1組相似。

應用小鼠甩尾法(溫浴法)研究結果表明，升麻甙50mg.kg-1和100mg?kg-1及52O2甲基維斯阿米醇甙25mg?kg-1給小鼠肌肉注射，均有明顯的鎮痛作用。口服防風水煎液40g/kg-1，亦可降低由醋酸致小鼠扭體反應次數，升高用熱板法測定的痛閾［14］。因此，防風有非常明確的鎮痛作用。

防風揮發油對多種炎癥有顯著的抑制作用，并能減少炎癥介質PGE₂的含量；防風在多個復方中能提高β-EP的含量，在本次實驗研究中亦表明有此作用。

總之，本次實驗研究證明，花椒、防風微米粉末確有明顯的鎮痛作用，且花椒的鎮痛作用強于防風。

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（責任編輯：陳涌濤）