ＨＰＬＣ法測定安樂片中２，３，５，４′－四羥基二苯乙烯２－Ｏ－β－Ｄ－葡萄糖苷的含量

李秋云　張　利　周建平

摘 要：目的：建立安樂片中2，3，5，4′-四羥基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷的含量測定方法。方法：采用高效液相色譜法，色譜條件：PhenomenxC18色譜柱(250 mm×4.6 mm，5μm)；乙腈-水（20∶80）為流動相；流速1.0mL?min-1；檢測波長320nm；進樣量10μL；柱溫25℃。結果：2，3，5，4′-四羥基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷進樣量在0.05475～0.438μg范圍內，其峰面積值與進樣量（μg）有良好的線性關系，r=0.9996，平均加樣回收率為97.1%，RSD為1.3%（n=6）。結論：該測定方法快速簡便，可用于安樂片的質量控制。

關鍵詞：安樂片；2，3，5，4′-四羥基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷；HPLC

中圖分類號：R914文獻標識碼：A文章編號：1673-2197（2009）02-0039-02

安樂片由柴胡、當歸、川芎、首烏藤等八味藥材經提取加工成的中藥制劑，具有舒肝解郁、定驚安神的功效，用于精神抑郁、驚恐失眠、胸悶不適、納少神疲，對神經官能癥、更年期綜合癥及小兒夜啼、磨牙等癥狀者亦可使用［1］。為了有效控制該制劑的質量，筆者采用高效液相色譜法測定其中2，3，5，4′-四羥基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷的含量，結果顯示該方法簡便，精密度好，重復性好，可用于本制劑的質量控制。

1 儀器和試藥

1.1 儀器

KQ-2500超聲清洗儀（昆山檢測儀器廠），BP210D電子分析天平（德國塞多利斯），SSI高效液相色譜儀（美國SSI公司），SSI P4000泵，SSI 500 UV/Vis檢測器，10μL定量環，色譜柱：Phenomenx C18色譜柱(250 mm×4.6 mm，5μm)，HW-2000色譜工作站（千譜軟件有限公司）。

1.2 試藥

2，3，5，4′-四羥基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷對照品（批號：0844-200003，供含量測定用），購自中國藥品生物制品檢定所；乙腈為色譜純，水為二次蒸餾水，其余試劑均為分析純（西安化學試劑廠）；安樂片樣品為自制劑。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

色譜柱Phenomenex C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動相：乙腈-水（21∶79）；流速1.0mL?min-1；檢測波長320nm；柱溫25℃；進樣量10μL。

2.2 對照品溶液的制備

取2，3，5，4′-四羥基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷對照品適量，精密稱定，加甲醇制成25μg?mL-1的溶液，備用。

2.3 供試品溶液的制備

取本品內容物10g，研細，取約0.7g，精密稱定，置50mL具塞錐形瓶中，精密加入甲醇25mL，密塞，稱定重量，超聲處理（功率250W，頻率40KHz）30min，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失重量，搖勻，濾過，精密量取續濾液5mL，置10mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，用微孔濾膜（0.45μm）濾過，即得。

2.4 陰性對照溶液的制備

按處方比例及生產制備方法，自制不含首烏藤藥材的陰性樣品，然后按供試品溶液的制備方法制備，即得。

2.5 系統適用性試驗

分別精密吸取對照品溶液、供試品溶液、陰性對照溶液，在上述色譜條件下進樣，記錄色譜圖，結果2，3，5，4′-四羥基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷色譜峰與其它雜質峰得到較好的分離，分離度均大于1.5，陰性對照無干擾，色譜圖見圖1。

2.6 線性關系考察

取2，3，5，4′-四羥基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷對照品，按對照品溶液制備方法，分別配制成不同濃度的對照品溶液，在上述色譜條件下進樣，記錄色譜圖。以峰面積(Y)對進樣量(X)進行回歸分析，得回歸方程為：y=3958186.2x-38114.7，r=0.9996。結果表明，2，3，5，4′-四羥基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷進樣量在0.05475～0.438μg范圍內，其峰面積值與進樣量有良好的線性關系。

2.7 精密度試驗

取同一份供試品溶液，在上述色譜條件下，重復進樣5次，記錄2，3，5，4′-四羥基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷峰面積，結果RSD為0.46％。

2.8 穩定性試驗

取同一份供試品溶液，在上述色譜條件下，分別在0，1，2，3，6和8h進樣，測定峰面積值，結果表明供試品溶液在8h內穩定。

2.9 重復性試驗

取同一批樣品，按2.3項供試品溶液的制備方法，制備5份供試品溶液，分別測定其中2，3，5，4′-四羥基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷的含量，結果RSD為0.87%，表明本方法重復性良好。

2.10 回收率試驗

取已知含量的樣品適量，研細，取6份，每份約0.35g，分別精密稱定，分別在其中精密加入一定量的2，3，5，4′-四羥基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷對照品溶液，按供試品溶液制備方法處理，即得加樣回收供試品溶液。在上述色譜條件下，測定加樣回收供試品溶液中2，3，5，4′-四羥基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷的含量。計算2，3，5，4′-四羥基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷加樣回收率，結果見表1。結果表明，本品加樣回收率良好。

2.11 樣品含量測定

取三批樣品，按上述方法測定其中2，3，5，4′-四羥基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷的含量，測定結果見表2。

3 討論

3.1 含量測定指標的選擇

安樂片收載于中華人民共和國衛生部藥品標準《中藥成方制劑》第二冊，其質量標準中無含量測定，為了有效控制本品質量，筆者選擇處方中首烏藤中的主要成分2，3，5，4′-四羥基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷進行了研究，參考有關文獻資料［2］，建立高效液相色譜法測定本品中2，3，5，4′-四羥基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷含量的方法，具有分離效果好、靈敏高等優點，故將首烏藤中2，3，5，4′-四羥基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷作為控制本品質量的指標成分。

3.2 提取方法的考察

曾用甲醇、乙醇和稀乙醇提取樣品，結果用甲醇所提取的供試品溶液，雜質較少，峰形較好，分離度高，故采用甲醇為樣品的提取溶劑。

參考文獻：

［1］ 中華人民共和國衛生部.衛生部藥品標準［S］.中藥成方制劑（第二冊）.北京：人民衛生出版社，1990：104.

［2］ 廖海民，胡正海，賀定翔.制首烏中二苯乙烯苷含量的HPLC測定［J］.西北藥學雜志，2006，21(1)：3-4.

（責任編輯：姜付平）