紅細胞冰凍解凍過程中形態體積變化分析

[摘要] 目的 探索紅細胞在冰凍解凍過程中形態體積的動態變化情況，尋求科學的冰凍解凍程序。方法 通過測定觀察紅細胞在冰凍、解凍洗滌過程中的體積和形態，并運用統計學方法，研究紅細胞的變化規律。結果 紅細胞在冰凍解凍過程中體積由大逐漸變小直至恢復正常，形態由大刺毛細胞或大球形細胞逐漸恢復正常紅細胞的圓盤狀。結論 隨著紅細胞冰凍解凍過程的順次進行，紅細胞體積和形態逐漸恢復正常。

[關鍵詞] 紅細胞冰凍; 紅細胞解凍; 細胞體積; 洗滌

[中圖分類號] R197.2 [文獻標識碼] A [文章編號] 1673-9701(2009)23-113-02

紅細胞的冰凍保存解決了特殊血型血液和自體血液長期儲存的問題，加入細胞內冰凍保護劑甘油后，紅細胞在-80℃條件下可保存10年，臨床使用前要做復蘇、洗滌去除冰凍保護劑的處理[1]。本研究著重于觀察分析紅細胞冰凍解凍過程中各步驟細胞形態體積的動態變化情況，為紅細胞解凍過程中關鍵控制點的操作提供事實依據。

1 材料與方法

1.1 標本來源

衡水市中心血站Rh陰性紅細胞冰凍保存、Rh陰性冰凍紅細胞解凍后供應臨床各20例。

1.2 工藝流程

1.2.1 紅細胞的冰凍 加入57.1%的甘油，使甘油在紅細胞中的濃度達40%，于-80℃冰箱冰凍保存。

1.2.2 一洗(第一遍洗滌紅細胞) 于38～40℃水浴解凍紅細胞，然后依次加入濃鹽水、羥乙基淀粉，離心棄去上清液。

1.2.3 二洗(第二遍洗滌紅細胞) 依次加入羥乙基淀粉、生理鹽水洗滌，離心棄去上清液。

1.2.4 三洗(第三遍洗滌紅細胞)加入生理鹽水洗滌，離心棄去上清液。

1.2.5 四洗(第四遍洗滌紅細胞) 加入生理鹽水洗滌，離心棄去上清液。

1.2.6 懸浮 紅細胞用生理鹽水懸浮后供應臨床。

1.3 方法

在工藝過程中紅細胞冰凍前、各洗滌過程離心棄去上清液前、生理鹽水懸浮后分別取樣，用顯微鏡和血細胞計數儀觀察檢測紅細胞形態體積的動態變化，各樣本相互對照研究并與正常紅細胞對照研究。

2 結果

流程各階段取樣，與正常人紅細胞體積(90fL)[2]作對比分析，結果見表1。將各階段紅細胞體積相互對比觀察，分析細胞大小變化的顯著性差異，結果見表2，3。

3 討論

紅細胞的冰凍、解凍過程是一個比較復雜的過程，涉及細胞微細結構的變化、功能的恢復等。通過與正常紅細胞對照分析，紅細胞在加入冰凍保護劑和解凍洗脫甘油過程一洗——三洗后的紅細胞體積都大于正常，四洗和懸浮后的紅細胞體積恢復正常。通過顯微鏡觀察，紅細胞的形態由加入甘油后的大刺毛細胞或大球形細胞逐漸恢復至圓盤狀。形態大小的恢復是決定其輸入人體后發揮正常生理功能的基礎。

紅細胞在加入甘油后體積與解凍第一次洗滌后的體積無明顯變化，顯微鏡下，其形態也無明顯變化。在這個過程中，紅細胞內的滲透壓變化很大，但形態體積基本無變化，說明紅細胞在加入甘油后已處于高度膨脹狀態，所以在甘油的加入過程和解凍時第一次洗滌過程，液體的加入速度一定要慢，并有足夠的平衡時間，促進細胞內外滲透壓的平衡，避免造成紅細胞的破裂。一洗——四洗過程中相互之間細胞體積的變化比較顯著，在此過程中紅細胞體積由大逐漸變小，四洗和懸浮后紅細胞之間，體積無明顯差異，說明四洗后紅細胞體積已恢復正常。

[參考文獻]

[1] 王培華. 輸血技術學[M]. 北京:人民衛生出版社，1998:68-70.

[2] 全國衛生專業資格考試專家委員會. 2008年全國衛生資格考試指導——臨床醫學檢驗與技術(中級)[M]. 北京:人民衛生出版社，2008:20.

(收稿日期:2009-03-14)