三種方法檢測乙肝病毒血清標記物的結果比較分析

[摘要] 目的 比較金標快速檢測板、酶聯免疫法和熒光定量PCR檢測乙肝五項結果的一致性，分析其產生原因及臨床應用價值。方法 對我單位2004年1月～2008年1月511例疑似乙肝患者血清進行金標快速檢測板、酶聯免疫法和熒光定量PCR三種方法檢測，比較三種方法的一致性。結果 HBsAg(+)、HBeAg(+)、HBcAb(+)組(大三陽組)患者287例經酶聯免疫法和熒光定量PCR檢測全部檢出，符合率100%，金標快速檢測板檢測出285例，符合率99.3%;HBsAg(+)、HBeAb(+)、HBcAb(+)組(小三陽組)患者210例經酶聯免疫法檢出208例，符合率99.04%，熒光定量PCR檢測全部檢出，金標快速檢測板檢測出199例，符合診斷率94.76%。結論 傳統酶聯免疫法檢測乙型肝炎病毒檢出率高，結果準確，出現少見模式時易出現檢測錯誤;熒光定量PCR檢測法靈敏度高，可為臨床HBV感染、復制及傳染性的判斷提供可靠的依據;金標快速檢測板方法簡單、快速，但靈敏度不如前兩種方法，較適于急診檢驗。

[關鍵詞] 金標快速檢測板; 酶聯免疫法; 熒光定量PCR檢測; 乙肝五項; HBV

[中圖分類號] R512.62;R446 [文獻標識碼] A [文章編號] 1673-9701(2009)23-112-02

乙型肝炎是常見的傳染病之一，我國是該病的高發區，人群感染率約為10%[1]。隨著臨床檢測技術的不斷發展，乙肝病毒的檢測方法隨之增加。我單位自2004年1月～2008年1月對511例疑似乙肝患者血清進行酶聯免疫(ELISA法)法、金標快速檢測板法和熒光定量PCR檢測法進行比較分析，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

資料來源于2004年1月～2008年1月來我單位就診的511例疑似乙型肝炎患者，其中男298例，女213例，年齡16～73歲。511例疑似病例首先經金標快速檢測板檢測，未檢出HBeAb者，采用酶聯免疫法補充檢測，后經熒光定量PCR檢測法進行檢測和量化判斷。

1.2 方法

1.2.1 儀器和試劑 金標快速檢測板采用艾康生物技術(杭州)有限公司產品，批號為:200405024。ELISA法檢測試劑由北京瑪諾生物制藥有限公司生產，國藥準字S19983029。深圳匹基生物工程股份有限公司生產的HBV-DNA熒光定量檢測試劑盒，批號20050901。德靈BEP2000型全自動酶聯免疫系統分析儀，美國應用生物系統公司Prism?誖 7000型實時熒光定量PCR儀。全部檢測嚴格按照儀器和試劑和說明書操作。

1.2.2 檢測方法 金標快速檢測板采用快速免疫層析法，其中HBsAg、HBeAg采用雙抗體夾心法，HBsAb采用雙抗原夾心法，HBeAb、HBcAb采用競爭抑制法，按說明書要求操作并判斷結果。ELISA法采用全自動酶免系統分析儀，以S/CO值判定結果。熒光定量PCR檢測的定量結果采用求對數平均值的方法計算HBV-DNA的平均拷貝數。

1.3 統計學處理

采用SPSS12.0統計學軟件，組間采用χ2檢驗，P<0.05具有顯著性差異。

2 結果

以目前最靈敏的熒光定量PCR檢測法為參照。511例疑似乙肝患者血清標本中，檢出HBV-DNA陽性497例。大三陽合小三陽組的檢出率三種方法分別為:99.3%和94.76%;100%和99.04%;100%。見表1。

3 討論

本組研究表明，金標快速檢測板、酶聯免疫法和熒光定量PCR檢測乙肝病毒三種方法都比較實用，對于檢測HBV的感染與復制，三種方法都具有一定的HBV-DNA檢出率。金標快速檢測板有11例未能檢出HBeAb，符合率94.76%，由于HBeAb的檢測是采用競爭法，結果的判定是比較檢測線和控制線顏色的深淺，而當這兩條線顏色相近時，肉眼辨色困難而影響判定，因此造成金標快速檢測板HBeAb的假陰性增多[2]。而對于HBcAb的檢測，金標快速檢測板的靈敏度和特異性稍差[3]。酶聯免疫法出現少見模式時，如HBsAb(+)、HBeAb(+)及HBeAb(+)ELISA法檢測為HBeAb陽性，HBcAb陰性，而熒光定量PCR檢測法則HBeAb伴隨HBcAb同時陽性。出現上述原因主要是由于酶聯免疫法測HBcAb標本是1∶30稀釋后檢測，而測HBeAb則用原血清。因此出現很多HBeAb陽性而HBcAb陰性模式，而金標快速檢測板和熒光定量PCR檢測法均用的原血清，所以不存在此問題。另外一個原因可能是酶聯免疫法采集的標本水浴處理時間短，血球沉降不充分，試管壁上有血痂，快速離心導致溶血，因血球中過氧化物酶溶出粘附于酶標板未被洗去，產生過氧化物酶樣作用而顯色致假陽性[4]。熒光定量PCR檢測法采用了完全閉管和熒光探針，通過光電傳導系統直接探測PCR擴增過程中熒光信號的變化以獲得定量結果，從而決定被測物質的濃度不受黃膽溶血及脂血影響，避免了交叉感染，因此其假陽性率較低[5]。此外熒光定量PCR檢測法還可以準確的反應出HBV-DNA的復制水平、病程變化和治療恢復情況[6]。

綜上所述，三種方法檢測乙肝病毒各具優勢。金標快速檢測板法靈敏、簡單、快速，適合于急診應用;傳統的酶聯免疫法設備簡單、收費低廉、易于開展，適用于常規檢查[7];而熒光定量PCR檢測法非常精確，其高靈敏度可為早期診斷HBV感染提供依據，并可提供準確的HBV-DNA感染、復制和傳染性等情況。建議臨床根據實際情況，疑似乙肝患者采用多種方法檢測乙肝病毒[8]。

[參考文獻]

[1] 李立明. 流行病學[M]. 第5版. 北京:人民衛生出版社，2004:481-484.

[2] 欒建敏，杜春煥. 乙肝病毒標志物檢測的項目和意義[J]. 臨床輔助檢查，2006，8(152):86-87.

[3] 龐志釗，宋立志，劉桂芳，等. 濟陽縣15～40歲人群乙型肝炎病毒感染標志調查[J]. 中國計劃免疫，2005，11(2):110-112.

[4] 劉亞濱，王文良，付玉平. 3826名醫學生乙型肝炎病毒血清標志物檢測[J]. 中國公共衛生，2006，22(8):955.

[5] 印淑慧，鄭太英. 沈陽市于洪區1～5歲兒童HBsAg和抗-HBs調查[J]. 中國醫藥導報，2006，3(19):120.

[6] 梁曉峰，陳園軍，王曉軍，等. 中國3歲以上人群乙型肝炎血清流行病學研究[J]. 中華流行病學雜志，2005，26(9):655-658.

[7] 金莞爾. 不同人群乙肝病毒感染狀況分析[J]. 中國衛生檢驗雜志，2004， 14(3):316.

[8] 中華醫學會肝病學分會，中華醫學會感染病學分會. 慢性乙型肝炎防治指南(節選)[J]. 中華預防醫學雜志，2006，40(2):136-140.

(收稿日期:2009-03-04)