日照市亞I-O型口蹄疫疫苗免疫效果檢測與分析報告

張永梅 李 霞 盧兵遠 李 芬 李豐宜

摘要于2008年秋季進行了日照市亞I-O型口蹄疫疫苗免疫效果檢測,結果表明,日照市牛亞I型口蹄疫和O型口蹄疫免疫合格率都達到80%以上;而豬O型口蹄疫免疫合格率偏低,剛達到農業部70%以上的要求。對豬O型口蹄疫免疫合格率偏低的原因進行了分析,建議要針對檢測情況抓緊時間組織補免,確保免疫程度達到1 000%。

關鍵詞豬O型口蹄疫;牛亞I型口蹄疫;牛O型口蹄疫;免疫效果;檢測

中圖分類號S858.28文獻標識碼A文章編號 1007-5739(2009)08-0175-01

2008年11月,日照市秋季重大動物疫病防疫結束后,為及時對免疫效果進行檢測,筆者按照《山東省2008年高致病性禽流感、口蹄疫等主要動物疫病監測方案》要求,對全市的種畜禽場、養殖場、活禽交易市場、豬屠宰場進行集中采樣檢測。隨機抽查了16個場(戶),采集血清樣品232份,其中7個養豬場、6個奶牛場、3個屠宰場。

1檢測方法

采用蘭州獸醫研究所研制的亞州I型口蹄疫液相阻斷ELISA檢測試劑盒(生產批號:2008052802)、O型口蹄疫液相阻斷ELISA檢測試劑盒(生產批號2008052801)進行檢測。

2器材的準備

亞I-O型口蹄疫液相阻斷酶聯免疫吸附試驗檢測試劑盒,5～50μL移液器:多道與單道各數把,37℃溫箱,酶標儀,其他試驗耗材。

3試驗操作步驟

3.1包被固相

用包被緩沖液稀釋兔抗血清至工作濃度,在ELISA板每孔加50μL。室溫振蕩30min,然后置濕盒中室溫過夜。

3.2抗原-抗體(對照和待檢血清)的預告結合(液相阻斷)

各對照和待檢血清在LB-ELISA中的布局,在第1行1～10孔加入不同樣品,按12.5μL樣品+87.5μL PBST工作液,按列倍比稀釋。封板后室溫振蕩30min,然后置濕盒中4℃過夜。

3.3轉移抗原-血清混合液

將包被的ELISA板取出,洗滌5次,扣干。將抗原-血清混合液反應板取出,室溫放置20～30min。將抗原-血清混合液轉移到ELISA板相應各孔中,每孔50μL,置37℃溫箱1h。

3.4加檢測抗體

將裝有抗原—血清混合液的ELISA板取出,洗滌5次,扣干。以豚鼠抗血清稀釋液將豚鼠抗血清稀釋至工作濃度,混勻后每孔加50μL,置37℃溫箱1h。

3.5加酶結合物

取出ELISA板,洗滌5次,扣干。以PBST工作液將酶結合物稀釋至工作濃度,混勻后每孔加50μL,置37℃溫箱1h。

3.6加底物溶液

取出ELISA板,洗滌5次,扣干。加入底物溶液,每孔加50mL,置37℃溫箱15min。

3.7加終止液

如表1所示,每孔加50μL終止液,輕輕振蕩混勻,在酶標儀上讀數。

4檢測結果

如表1所示,本次集中檢測,共抽查了16個場戶,采集血清樣品232份。其中7個種豬場、3個屠宰場,采樣105份,進行O型口蹄疫檢測,合格81份,免疫合格率為77.1%;6個牛場,采樣127份,進行O型口蹄疫檢測,合格118份,免疫合格率為92.9%;進行亞I型檢測,合格107份,免疫合格率為84.3%。

5檢測結果分析

根據本次檢測結果,日照市牛亞I型和O型口蹄疫免疫合格率都能達到80%以上;而豬O型口蹄疫免疫合格率偏低,剛達到農業部70%以上的要求,明顯低于2007年,屠宰場的表現尤其明顯。其主要原因可能有:①在秋防集中免疫過程中,4種強制免疫疫苗,有3種是豬用疫苗,3種疫苗的免疫必須間隔一定的時間;加上近幾年來高致病性豬藍耳病危害性已經引起了養殖場戶的高度重視,豬藍耳、豬瘟疫苗大都優先免疫,而將口蹄疫疫苗免疫拖后,免疫時間距離采樣時間太短。②本次抽查加大了豬屠宰場的比重,而屠宰場豬的來源多是農村的散養戶,其免疫密度低于養殖場。③奶牛場戶的免疫質量較好,但免疫效果不平衡。目前,日照市注射的都是亞I-O型口蹄疫二聯苗,但二者的免疫效果卻不一樣,O型疫苗的免疫效果明顯好于亞I,可能是兩毒株的免疫原性有差異或由于常期使用O型口蹄疫疫苗有關。另外,本次抽查的牛場除1個肉牛場外,其他都是奶牛場戶,說明日照市奶牛場戶的免疫質量比較好。

6建議

根據本次檢測結果,日照市豬O型、牛亞I-O型口蹄疫免疫合格率雖然都能達到農業部70%以上的要求,但有關區縣應針對各養殖場的檢測情況抓緊時間組織補免,確保免疫密度達到100%,以達到重大動物疫病的防控效果。