木瓜籽提取物的鎮咳祛痰活性研究

殷金玲　劉淑霞　潘志剛　殷金龍　鞠鳳霞

【摘要】目的:研究木瓜籽乙醇(95%)提取物的鎮咳及祛痰作用。方法:采用濃氨水誘咳法觀察鎮咳作用,采用酚紅排泌法觀察祛痰作用。結果:木瓜籽提取物能明顯抑制氨水所致小鼠咳嗽潛伏期和咳嗽次數;能顯著增加小鼠氣管的酚紅排泌量,且成明顯量效關系。結論:木瓜籽乙醇提取物有明顯鎮咳及祛痰作用。

【關鍵詞】木瓜籽 鎮咳 祛痰

木瓜籽為薔薇科植物貼梗海棠Chaenomeles Speciosa(Sweet)Nakai的干燥成熟種子,主產安徽、山東、浙江、湖北、云南、貴州、四川等地。木瓜屬植物,全世界約有5種,我國均產。其中產于安徽省宣城地區的道地藥材,稱為宣木瓜。木瓜在中醫藥學中用途廣泛,《中醫大辭典》、《本草綱目》、《本草拾遺》等著名醫著都記載了木瓜具有舒筋活絡, 解渴生津、平肝和胃、祛風除濕等功效,能治療腰膝疼痛,腳氣水腫,痢疾霍亂,心痛腹痛等疾病,另外,還有鎮咳、清暑利尿、解酒祛痰等作用?，F代藥理實驗表明,木瓜具有抗腫瘤、保肝、抑菌、鎮咳祛痰作用,臨床上多用于治療急性病毒性肝炎。同時,木瓜亦為一種可食瓜果,近年來已利用木瓜果實研制成藥品、加工罐頭、果脯、果酒、果醋、果汁等保健食品及美容護膚化妝品,同時作為食品添加劑大量使用。木瓜臨床效果獨特,有重要的經濟價值及應用前景。但在木瓜果實中占很大比重的木瓜籽的研究應用確并不多。本課題組現已從宣木瓜籽中分離并經過波譜學鑒定出包括有機酸類、三萜類、黃酮類等在內的二十多種化合物。本次實驗是通過藥理學方法,首先研究其鎮咳及祛痰作用,篩選木瓜籽中活性部位,為這種可食用性植物深入開發成新藥及新的食品添加劑奠定基礎。

一、實驗材料

1.動物。清潔級昆明種小鼠,體重(22.0±2.0)g,雌雄兼用,由吉林大學動物實驗中心提供。

2.木瓜籽提取液的制備。宣木瓜購自湖北宣城水果批發市場,經吉林大學藥學院張靜敏教授鑒定為宣木瓜。去果肉,取木瓜籽1kg,用75%的乙醇加熱回流提取3次,每次2小時,過濾,合并濾液,除去乙醇以后制成1L的溶液(簡稱原液),取原液100ml,稀釋成500ml(簡稱稀釋液)。

3.儀器和試劑。鹽酸依普拉酮片,上海衡山制藥有限公司,批號:070510;氨水,分析純,國藥集團化學試劑有限公司,批號,070102;氯化銨,分析純,國藥集團化學試劑有限公司,批號,060520;722型光柵分光光度計,山東高密彩虹分析儀器有限公司;梅特勒AB135-S十萬分之一天平,德國;HH-42快速恒溫數顯水箱,常州國華電器有限公司;其它試劑購于北京化工。

4.統計學處理。應用SPSS13.0統計分析軟件進行處理,實驗數據以均數±標準差(x±s)表示,實驗結果進行多變量方差分析及T檢驗。

二、方法

1.鎮咳作用研究。為研究木瓜籽提取物對小鼠鎮咳作用的影響,選取昆明種小鼠雌雄各20只,隨機分成4組,每組10只。用藥組分別灌胃原液和稀釋液20ml/kg,對照組灌胃等量生理鹽水,陽性組直接用鹽酸依普拉酮(20mg/kg)灌胃給藥。連續給藥3d,末次給藥1h后,將每只小鼠分別置于引咳籠中,使小鼠接受飽和氨水的噴霧刺激5s,從噴霧氨水開始計時,以腹肌收縮,張嘴為準,觀察和記錄小鼠的刺激潛伏期及2min內咳嗽次數。

2.祛痰作用研究。為研究木瓜籽提取物的祛痰作用,采用酚紅氣管排泌法。

(1)酚紅標準曲線的繪制。用天平精確城區酚紅0.100g,加5%NaHCO₃溶液至1000ml容量瓶中。分別吸取此酚紅溶液0.25,0.5,0.75,1.00,1.25,1.50,1.75,2.00ml于容量瓶中,加水稀釋至滿刻度,用722分光光度計于546nm波長下測其吸光度,得回歸方程x=0.2257+5.3268y,r=0.9990,并繪制標準曲線。

(2)選取昆明種小鼠雌雄各20只,隨機分成4組,每組10只。用藥組分別灌胃原液和稀釋液20ml/kg,對照組灌胃等量生理鹽水,陽性組氯化銨組(2.0g/kg)灌胃給藥。每只小鼠灌胃給藥30min后,腹腔注射5%酚紅生理鹽水溶液10ml/kg,30min后脫臼處死,剝離氣管周圍組織,剪下自甲狀軟骨至氣管分支處的一段氣管,放入盛有1ml蒸餾水的試管中,再加入1mol/L NaOH溶液0.1ml,以1ml蒸餾水/0.1ml NaOH溶液為空白,546nm處測量溶液的吸光度(A)。

三、結果

1.鎮咳作用

結果見表1。原液組、稀釋組能顯著抑制氨水誘發小鼠的咳嗽潛伏期和咳嗽次數,顯示其具有鎮咳作用,且呈現量效關系。

2.祛痰實驗

結果見表2。由表2可見,原液組及稀釋液組的木瓜籽的乙醇提取物均能增加小鼠氣管的酚紅排泌量,呈現量效關系,原液組效果優于氯化銨陽性對照組,提示木瓜籽具有祛痰作用。

四、討論

采用抑制氨水誘咳的方法,研究了木瓜籽乙醇提取物的鎮咳作用。本實驗首次發現了木瓜籽乙醇提取物的鎮咳作用,這可能與提取物中的酚苷類成分有關;采用酚紅氣管排泌法研究了木瓜籽乙醇提取物的祛痰作用,實驗表明木瓜籽有祛痰作用,但作用不如鎮咳那樣顯著?？赡芘c提取部位有關,需要進一步活性篩選。

本文從鎮咳祛痰兩方面對木瓜籽潤肺化痰的功效進行了初步藥理研究。結果表明,高劑量組效果明顯高于低劑量組,顯示出了鎮咳祛痰活性,但其量效關系及鎮咳祛痰有效成分還需進一步研究。由于木瓜籽多被扔倒,甚為可惜,經過研究可發現,一方面利于變廢為寶,一方面又促進開發其新的藥理活性。本實驗為最終闡明木瓜籽潤肺化痰作用物質基礎提供了藥理實驗依據。

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