納米微球增強免疫比濁法測定α1-微球蛋白研究

【摘要】:α1-微球蛋白(α1-MG)是一種糖蛋白，主要在肝臟和淋巴組織中合成，廣泛分布于體液及淋巴細胞膜表面.在血液中，α1-MG有游離和與IgA結合合兩種形式，在正常情況下，血液中清中游離的α1-MG白可自由通過腎小球濾過，并在近曲小管被重吸收，而尿液中含量極微。因此，尿α1-MG含量升高，主要反映近曲小管的受損及受損程度，是一項早期和靈敏反映腎功能的指標，能早期反映腎功能的下降。因此，尿α1-微球蛋白水平能敏感的反映腎小管間質損害的程度，可作為早期診斷的靈敏指標，而α1-MG也是近曲小管損害的標志蛋蛋白。

【關鍵詞】:納米微球;α1-微球蛋白

【中圖分類號】R917【文獻標識碼】A【文章編號】1007-8517(2010)06-055-1

1材料

1.1原理樣品中α1-MG與試劑中相應的抗體在溶液中相遇，立即形成抗原-抗體復合物，并形成一定濁度。該濁度的高低在一定量抗體存在時與抗原的含量成正比。通過與同樣處理的校準液比較，計算未知樣品中的α1-微球蛋白含量。

1.2試劑Good’S緩沖液、微球藕合α1-MG抗體、穩定劑、表面活性劑以及質控品等。

1.3儀器采用Hitachi 7080全自動生化分析儀。

1.4方法將24mg/L校準品按倍比稀釋為12，6，3，0mg/L作5點定標。基本測定參數:主波長600nm，副波長800nm，試劑1(R1):240μl;試劑2(R2):60μl。加入R1試劑5min后加入R2試劑，反應時間5min。

2結果

2.1精密度評價[1]按NCCLS評價方案，取低、中、高三個不同濃度的血清樣本，α1-MG濃度分別為5.5mg/L、27.4mg/L、105mg/L，連續測定20次，再每天測1次，共測20d，結果見表1

2.2線性范圍評價[2]按NCCLS的評價方案，用α1-MG濃度為110mg/L和10mg/L的高低值樣本2份，然后2份樣本等量混合產生中間值60mg/L，中間值再與高、低值等量混合，產生85mg/L和35mg/L的5個不同梯度值α1-MG樣本，在儀器上以低值到高值和高值到低值分別測定，求得兩次平均值，以X作為理論值，Y作為測定值進行回歸分析，其方程y=0.9857x+1.1714，R2=0.9996。表明α1-MG濃度在110mg/L范圍內，線性良好。

2.3比對實驗取α1-MG濃度從50～110mg/L的新鮮血清標本50份，分別用本試劑與進口試劑同時測定α1-微球蛋白濃度，所得數據均按NCCLS文件統計，經t檢驗得P>0.05，R2=0.9996，表明本試劑與進口試劑高度相關。

2.4回收實驗取低值和高值新鮮血清各1份(6 mg/L、33 mg/L)，以不同比例混合，結果可見本法測定血清α1-MG的平均回收率為99%。

2.5干擾試驗取4份高值α1-MG混合樣品，分別加入干擾物類風濕因子、膽紅素、甘油三酯、Hb，使其終濃度如表3。結果表明RF≤ 1200IU/L、BIL≤ 420μmol/L、TG≤10.0mmol/L、Hb≤4.0 g/L時對本法無干擾。

3討論

α1-MG與β2-微球蛋白(β2-MG)、視黃醇結合蛋白(RBP)均為低分子量蛋白質(LMWP)，是反映糖尿病腎病(DN)腎小管早期損害的良好指標，尿α1-微球蛋白測定較少受尿液pH值變動的影響，在酸性尿中更為穩定，尿中的濃度也遠遠高于其他LWMP，目前已成為LMWP中的首選指標[3]。臨床常用放射免疫方法測定α1-MG含量，存在著放射性輻射和標記物放射衰變以及需時長，操作繁瑣等缺點。本文采用增強免疫比濁法測定尿α1-微球蛋白濃度，并對其產品性能進行了初步方法學評價，旨在為檢測尿α1-MG及早診斷及監控腎病提供一種簡便、快速、準確的方法學依據。通過實驗結果表明，其結果顯示精密度度CV<4%、回收率為99%、線性范圍達110mg/L、類風濕因子≤1200IU/L、三酰甘油≤10mmol/L、Hb≤4g/L、膽紅素≤420μmol/L時對結果無顯著性干擾(P<0.05)，該方法試劑為液體試劑，使用方便、反應快速、結果準確，抗干擾能力強，適用于全自動生化分析，能滿足臨床檢測要求。

參考文獻

[1] 楊昌國等.精密度評價和方法比較中NCCLS評價方案的應用[J].臨床檢驗雜志，1999，17(1):47.

[2] 楊昌國等.線性評價和干擾實驗中NCCLS評價方案的應用[J].臨床檢驗雜志，1999，17(3):184.

[3] 歐陽涓，姜儻.腎臟的損傷性診斷[J].中華檢驗醫學雜志，2005，28(8):

877-879.