反相高效液相色譜法測定防風通圣丸中黃芩苷含量

姚麗佳，冉海琳

（重慶市藥品檢驗所，重慶 401121）

反相高效液相色譜法測定防風通圣丸中黃芩苷含量

姚麗佳，冉海琳

（重慶市藥品檢驗所，重慶 401121）

目的建立防風通圣丸中黃芩苷的含量測定方法。方法采用反相高效液相色譜法，以Kromacil C18不銹鋼柱（250 mm×4.6 mm，5!m）為色譜柱，以甲醇－水－磷酸(45∶55∶0.2)為流動相，流速為1.0 mL/min，檢測波長為315 nm，柱溫為30℃。結果黃芩苷進樣量在0.030 66～0.490 6!g范圍內與峰面積呈良好線性關系，r=0.999 97(n=8)，平均加樣回收率為99.11%，RSD為1.10%（n=6）。結論該方法靈敏、簡便、結果準確、重現(xiàn)性好，適用于防風通圣丸的質量控制。

防風通圣丸；黃芩苷；高效液相色譜法；含量測定

防風通圣丸由防風、梔子、當歸、川芎、白芍等17味藥物組方，具有解表通里、清熱解毒功效，用于治療外寒內熱、表里俱實、惡寒壯熱、頭痛咽干、小便短赤、大便秘結、瘰癘初起、風疹濕瘡等證。筆者采用反相高效液相色譜（RP－HPLC）法對防風通圣丸中黃芩苷的含量進行了測定[1]，報道如下。

1 儀器與試藥

Waters 2695型高效液相色譜儀，2487型紫外檢測器。黃芩苷對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號為0844－200003，供含量測定用）；防風通圣丸（太極集團重慶桐君閣藥廠）；甲醇為色譜純試劑，其余試劑均為分析純，水為去離子水。

2 方法與結果

2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗

色譜柱：Kromacil C18不銹鋼柱（250 mm ×4.6 mm,5!m）；流動相：甲醇 －水 －磷酸(45 ∶55 ∶0.2)；流速：1 mL/min；柱溫：30 ℃；檢測波長：315 nm；進樣量：10!L。理論塔板數(shù)按黃芩苷峰計算不低于2 500。

2.2 溶液制備

精密稱取黃芩苷對照品適量，加甲醇制成每1 mL含15!g的溶液，即得對照品溶液。取重量差異項下的本品，研細，混勻，取約0.2 g，精密稱定，置50 mL量瓶中，精密加入70%乙醇適量，超聲

處理30 min，放冷，用70%乙醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，作為供試品溶液。按處方比例及工藝制備不含黃芩的樣品適量，按供試品溶液制備方法制成陰性對照品溶液。

2.3 方法學考察

專屬性試驗：分別精密吸取2.2項下3種溶液各10!L，注入液相色譜儀，測定。結果陰性對照品溶液色譜圖中在黃芩苷峰相應的保留時間附近無干擾峰出現(xiàn)。色譜圖見圖1。

線性關系考察：精密吸取對照品溶液（質量濃度為0.030 66 mg/mL）1，2，4，6，8，10，12，16!L，注入液相色譜儀，記錄峰面積。以進樣量 C為橫坐標、峰面積 A為縱坐標進行線性回歸，得回歸方程A=3 030.422 C － 12.639，r=0.999 97（n=8）。結果表明黃芩苷進樣量在0.03066～0.4906!g范圍內與峰面積線性關系良好。

圖1 高效液相色譜圖

精密度試驗：精密吸取對照品溶液，重復進樣測定。結果平均峰面積的 RSD=0.39%（n=5），表明儀器精密度良好。

穩(wěn)定性試驗：取同一供試品溶液，分別于常溫條件放置0，1，2，4 h時進樣測定峰面積。結果的 RSD=0.5%（n=4），表明供試品溶液至少在4 h內基本穩(wěn)定。

重現(xiàn)性試驗：取同一批樣品(批號為77050001)，平行制備5份供試品溶液，測定黃芩苷的含量。結果的 RSD為1.0%（n=5），表明方法重現(xiàn)性良好。

加樣回收試驗：取已知含量的樣品(批號為77050001，含量3.45 mg/g)粉末約0.1 g，共6份，分別置50 mL量瓶中，分別精密加入對照品溶液(質量濃度為0.038 9 mg/mL)10 mL，同供試品溶液的制備方法制備，依法測定含量，并計算回收率。結果見表1。

表1 黃芩苷加樣回收試驗結果（n=6）

2.4 樣品含量測定

精密吸取對照品溶液、供試品溶液各10!L，分別注入液相色譜儀，記錄峰面積，按外標法計算。結果3批樣品（批號為77050001，77050002，77050003）含量分別為 3.45，3.62，3.56 mg/g。

3 討論

防風通圣丸收載于2005年版《中國藥典（一部）》，質量標準中僅有防風、荊芥穗、連翹等藥物的顯微鑒別及大黃的薄層色譜鑒別，無含量測定方法。該方中黃芩具有清熱燥濕、瀉火解毒等作用，為方中主藥之一。2005年版《中國藥典（一部）》對黃芩藥材選用了黃芩苷含量作為質量評價的檢測指標，故選擇了測定黃芩苷的含量作為評價防風通圣丸中黃芩的依據(jù)。對樣品提取溶劑種類、提取溶劑用量及提取時間均進行了考察，根據(jù)試驗結果，擬訂了上文所述供試品溶液的制備方法。對多個品牌的色譜柱進行考察，含量測定結果無明顯差異，表明該方法靈敏、簡便、結果準確、重現(xiàn)性好，適用于防風通圣丸的質量控制。

[1]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典（一部）[M].北京：化學工業(yè)出版社，2005：233.

Determination of Baicalin in Fangfeng Tongsheng Pills by RP－HPLC

Yao Lijia,Ran Hailin
(Chongqing Institute for Drug Control,Chongqing,China 401121)

ObjectiveTo establish a RP －HPLC method for the determination of baicalin in Fangfeng Tongsheng Pills.MethodsRP －HPLC method was adopted and the C18column (250 mm ×4.6 mm,5!m)was used.The mobile phase was methanol－water－phosphoric acid(45∶55∶0.2),with the flow rate of 1.0 mL/min.The detection wavelength was at 315 nm and the column temperature was 30℃.ResultsThe calibration curve of baicalin was linear in the range of 0.030 66－0.490 6!g,r=0.999 97(n=8).The average recovery rate was 99.11%,RSD=1.10%(n=6).ConclusionThe method is highly sensitive,quick and accurate with good repeatability,which can be used for the quality control of Fangfeng Tongsheng Pills.

Fangfeng Tongsheng Pill;baicalin;HPLC;content determination

R284.1；R286.0

A

1006－4931(2010)04－0021－02

2009－04－15)