祖師麻注射液中紫丁香苷和祖師麻甲素的含量測定

周 穎，龐興壽

（廣西壯族自治區(qū)玉林食品藥品檢驗(yàn)所，廣西 玉林 537000）

祖師麻注射液中紫丁香苷和祖師麻甲素的含量測定

周 穎，龐興壽

（廣西壯族自治區(qū)玉林食品藥品檢驗(yàn)所，廣西 玉林 537000）

目的建立測定祖師麻注射液中紫丁香苷和祖師麻甲素含量的高效液相色譜（HPLC）法。方法色譜柱為Agilent Zorbax SB－C18柱（250 mm×4.6 mm，5!m），流動(dòng)相為乙腈－0.05%磷酸溶液（梯度洗脫），梯度變化檢測波長為223 nm和327 nm，流速為1.00 mL/min，柱溫為30℃。結(jié)果祖師麻甲素、紫丁香苷進(jìn)樣量分別在0.103 5～6.210 0!g和0.019 79～0.593 76!g范圍內(nèi)與其峰面積線性關(guān)系良好，平均回收率分別為93.14%和92.07%，RSD分別為2.16%和1.70%（n=6）。結(jié)論HPLC法簡便準(zhǔn)確、重現(xiàn)性好，可用于產(chǎn)品的質(zhì)量控制。

祖師麻甲素；紫丁香苷；祖師麻注射液；高效液相色譜法

祖師麻注射液系由瑞香科植物黃瑞香的根皮和莖皮制成的滅菌水溶液，功能祛風(fēng)除濕、活血止痛。為確保臨床用藥安全有效，本試驗(yàn)采用高效液相色譜（HPLC）法測定祖師麻注射液中紫丁香苷、祖師麻甲素的含量，報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

Agilent 1200型高效液相色譜儀，包括DAD檢測器、低壓四元泵、在線脫氣裝置、自動(dòng)進(jìn)樣器，ChemStation工作站（美國Agilent科技有限公司）；Metters電子分析天平（瑞士）；超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）。紫丁香苷對照品、祖師麻甲素對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號分別為 111574－200207，0900－200102）；乙腈（色譜純），水（娃哈哈純凈水），其他試劑（分析純）；祖師麻注射液（市售品）；祖師麻藥材經(jīng)玉林食品藥品檢驗(yàn)所中藥室鑒定為正品。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

色譜柱：Agilent Zorbax SB－C18柱（250 mm×4.6 mm，5!m），流動(dòng)相：乙腈（A）和0.05%磷酸溶液（B）梯度洗脫（見表 1）[1]；流速：1.00 mL/min；柱溫：30 ℃[2]；檢測波長：0 min 為223 nm，40.00 min為 223 nm，45.01min為 327 nm，125.00 min 為 327 nm[3]；進(jìn)樣量：20!L。理論塔板數(shù)按紫丁香苷、祖師麻甲素峰計(jì)為8 000，各主要特征峰分離度均大于1.5。在此條件下，色譜圖見圖1。

表1 流動(dòng)相梯度洗脫表

圖1 祖師麻甲素對照品與供試品高效液相色譜圖

2.2 溶液制備

精密稱取祖師麻甲素對照品0.012 94 g，置25 mL量瓶中，用適量甲醇稀釋至刻度，精密量取2 mL，置10 mL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻得祖師麻甲素對照品溶液；精密稱取紫丁香苷對照品0.012 37 g，置50 mL量瓶中，用適量甲醇溶解并稀釋至刻度，精密量取2 mL，置25 mL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，得紫丁香甘對照品溶液。精密量取樣品5 mL，置10 mL量瓶中，加水適量，超聲處理（功率 160 W，頻率 50 kHz）1 h，放冷，加水至刻度，搖勻，濾過，濾液作為供試品溶液。

2.3 方法學(xué)考察

專屬性考察：精密稱取祖師麻藥材粉末1.03 g，置10 mL量瓶中，加水適量，超聲處理（功率 160 W，頻率 50 kHz）1 h，放冷，加水至刻度，搖勻，濾過，濾液作為祖師麻藥材提取溶液。按上述色譜條件進(jìn)樣，得祖師麻藥材色譜（圖2）。

線性關(guān)系考察：精密吸取紫丁香苷對照品溶液（0.01979mg/mL）1，4，8，16，30!L，祖師麻甲素對照品溶液（0.103 5 mg/mL）1，4，8，16，30!L，注入液相色譜儀，記錄峰面積，以進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)、峰面積為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。紫丁香苷對照品回歸方程為 Y=2 969.5 X －42.259，r=0.999 7（n=5），線性范圍為 0.019 79 ～0.593 76!g；祖師麻甲素對照品回歸方程為 Y=2 910.2 X－861.21，r=0.999 8（n=5），線性范圍為 0.103 5 ～6.210 0!g。

精密度試驗(yàn)：分別吸取紫丁香苷及祖師麻甲素對照品溶液，連續(xù)進(jìn)樣6次。結(jié)果紫丁香苷及祖師麻甲素含量的 RSD為0.31%和0.18%（n=6），表明方法精密度良好。

圖2 祖師麻藥材高效液相色譜圖

重現(xiàn)性試驗(yàn)：取同一批（批號為0701142）樣品，按供試品溶液制備方法制備溶液并依法進(jìn)樣。結(jié)果紫丁香苷及祖師麻甲素含量的 RSD為0.54%和0.31%(n=6)，表明方法重現(xiàn)性良好。

穩(wěn)定性試驗(yàn)：取同一批（批號為0701142）樣品，按供試品溶液制備方法制備溶液，分別于 1，3，6，12，24 h 時(shí)進(jìn)樣測定。結(jié)果紫丁香苷及祖師麻甲素含量的 RSD為0.69%和0.44%（n=5），表明在常溫下溶液24 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

加樣回收試驗(yàn)：精密量取同一批（批號為0701142）樣品2.0，2.5，3.0 mL各2份，分別精密加入質(zhì)量濃度為0.517 6 mg/mL的祖師麻甲素對照品溶液2.0，2.5，3.0 mL，加入質(zhì)量濃度為0.247 4 mg/mL的紫丁香苷對照品溶液0.3，0.4，0.5 mL。按供試品溶液制備方法制備溶液，進(jìn)樣測定。結(jié)果見表2。

表2 加樣回收試驗(yàn)結(jié)果(n=6)

2.4 樣品含量測定

取樣品6批，按供試品溶液制備方法制備溶液并進(jìn)樣測定含量。結(jié)果見表3。

表3 樣品含量測定結(jié)果（n=2）

3 討論

分別考察了不同的提取溶劑、提取時(shí)間、流動(dòng)相和檢測波長對結(jié)果的影響。結(jié)果各溶劑提取結(jié)果相近，50%乙醇毒性比較小，作為溶劑最好；用乙睛－0.05%磷酸水溶液梯度洗脫所得分離度最好；同時(shí)選定329 nm作為檢測波長，在此波長下色譜峰間分離度、穩(wěn)定性較好。比較了不同型號的色譜柱（Hypersil ODS2及Eclipse XDBC18），結(jié)果在不同型號色譜柱上的保留時(shí)間差異比較大，但都相對穩(wěn)定。用Agilent 1100色譜儀試驗(yàn)，結(jié)果重現(xiàn)性良好。

[1]任燕冬,楊武亮,李越峰，等.祖師麻藥材HPLC指紋圖譜的建立[J].中成藥,2007,29(5)：727－730.

[2]陳 博，王 萬,原紅果.高效液相色譜法測定祖師麻膠囊中祖師麻甲素的含量[J].時(shí)珍國醫(yī)國藥,2006,17(3)：366－367.

[3]位海強(qiáng),袁才英,楊金風(fēng)，等.祖師麻質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究[J].廣東藥學(xué),2004,14(3)：1 － 3.

Determination of Daphnetin and Syringin in Zushima Injection by HPLC

Zhou Ying,Pang Xingshou
(Yulin Institute for Food and Drug Control,Yulin,Guangxi,China 537000)

ObjectiveTo study and establish a HPLC method for the content determination of daphnetin and syringin in Zushima Injection.MethodsThe Agilent Zorbax SB－C18column(250 mm×4.6 mm,5!m)was used at the temperature of 30℃.The mobile phase consisted of acetonitile－0.05% phosphoric acid with gradient elution and the detection wavelength at 223 nm and 327 nm,the flow rates was 1.00 mL/min.ResultsThe calibration curve of daphnetin and syringin were in linear over the range of 0.103 5－6.210 0!g and 0.019 79－0.593 76!g,respectively.The average recovery rates were 93.14% and 92.07%,RSD was 2.16% and 1.70%,respectively.ConclusionThe method is simple and accurate with good reproducibility,which can be used for the quality control of Zushima Injection.

daphnetin;syringin;Zushima Injection;HPLC

R284.1；R286.0

A

1006－4931(2010)04－0025－02

周穎（1983－），女，中藥師，從事藥品檢驗(yàn)工作，（電子信箱）yingjoy.zy@163.com。

2008－10－31；二次

2009－07－07)