黑龍江省實驗大鼠遺傳學概貌分析

韓凌霞，劉霄磊，牛成明，周 剛，司昌德，曲連東

（1.中國農業科學院哈爾濱獸醫研究所實驗動物中心，哈爾濱 15001；2.黑龍江省實驗動物質量監督檢驗站，哈爾濱 15001）

2008年，本實驗室根據國家標準《實驗動物近交系小鼠、大鼠生化標記檢測方法》［1］GB/T 14927.1-2001，對黑龍江省5個生產單位的送檢大鼠進行了生化標記位點的檢測，品系包括SD、Wistar、DA和PVG大鼠，對其遺傳概貌進行了描述。

1 材料和方法

1.1 實驗動物

2008年黑龍江省實驗動物質量監督檢驗站承檢的5批送檢大鼠，送檢編號分別為2011、2014、3026、8028和8029，被檢品系分別為SD、Wistar以及新引進的DA和PVG，各5只。

1.2 儀器設備與試劑

DYY-6C型穩壓穩流電泳儀、電泳微量點樣器和醋酸纖維板購于北京六一儀器廠，實驗動物大鼠遺傳檢測試劑盒購自中國藥品生物制品檢定所（批號：0407），檢測所用生化試劑均為分析純。

1.3 樣品的制備

按照參考文獻［1］制備樣品。將大鼠逐一放在通風櫥內干燥器內乙醚麻醉，至站立不穩后取出。摘眼球采血，常規方法制備血清。另取腎臟、部分小腸、部分肺臟、2側睪丸，分別在研缽中加石英砂研磨，轉移在1.5mL的EP管中稱重，加2倍（v/m）蒸餾水混勻，4℃12 000r/min離心10min。保留上清液，立即檢測，或在4℃備存。

1.4 各同工酶的檢測

參照國標，分別對相應組織中的Akp1、Es1、Es3、Es4、Es10和Es6、8、9等8種同工酶的表達情況進行檢測。

2 結果

2.1 堿性磷酸酶-1（Akp1）的檢測結果

利用腎臟組織對Akp1位點進行了檢測，結果所有被檢樣品都出現明顯的2條帶，如箭頭所示為a帶型，帶型清楚。見圖1。各樣品用送檢單位的編號表示，余下圖例略同。

2.2 酯酶-1（Es1）的檢測結果

以血清為檢測組織，結果表明存在a、b兩種帶型。其中送檢單位2011全部個體、2014中3個體（泳道7、9、10）、3026全部個體為a帶型，其余個體為b帶型。如箭頭所示，見圖2。

2.3 酯酶-3（Es3）的檢測結果

利用小腸組織對Es3位點進行了檢測，結果顯示各品系個體都是a帶型，如箭頭所示，見圖3。其中SHR、BN、SD和F344為標樣。

2.4 酯酶-4（Es4）的檢測結果

利用腎臟組織對Es4位點進行了檢測，結果所有被檢組織都出現明顯的3條帶，為b帶型，圖略。

1～5：來自2011；6～10：來自2014；11～15：來自3026；16～20：來自8028；21～25：來自8029圖1 Akp1的檢測結果1-5：from 2011；6-10：from 2014；11-15：from 3026；16-20：from 8028；21-25：from 8029Fig.1 The results ofAkp1 detection in the rats

1～5：2011；6～10：2014；11～15：3026；16～20：8028；21～25：8029圖2 Es1的檢測結果1-5：2011；6-10：2014；11-15：3026；16-21：8028；22-26：8029Fig.2 The results of Es1 detection in the rats

1～5：2011；6～7、11～13：2014；8：SHR；9：BN；10：SD；14～18：3026；19：F344；20～25：8028；26～29：8029圖3 Es3的檢測結果1-5：2011；6-7 and 11-13：2014；8：SHR；9：BN；10：SD；14-18：3026；19：F344；20-25：8028；26-29：8029Fig.3 The results of Es3 detection in the rats

1～5：來自2011；6：WKY；7：SHR；8～12：來自2014；13～17：來自3026圖4 Es10的檢測結果1-5：2011；6：WKY；7：SHR；8-12：2014；13-17：3026Fig.4 The results of Es10 detection in the rats

表1 各被檢單位在8個生化標記位點的檢測結果Tab.1 The results of detection of 8 biochemicalmarkers in rats from different resources

2.5 酯酶-10（Es10）的檢測結果

肺臟樣品在Es10位點出現3條帶，均為b帶型，如箭頭所示。8028和8029未檢測。見圖4。

2.6 酯酶-6，8，9（Es6，8，9）的檢測結果

由于Es6，8，9的被檢組織來自睪丸，所以只對雄性個體進行了檢測。結果表明，2011帶型為Es6-a、Es8-b、Es9-a；8028大鼠帶型為Es6-a、Es8-b、Es-9a；8029大鼠帶型為 Es6-b、Es8-a、Es-9c（圖略）。

3 討論

目前實驗動物遺傳檢測的國家標準方法，除生化標記同工酶之外，還有下頜骨形狀分析法和皮膚移植法，但皮膚移植法，一般需觀察100d左右［2］。對實驗小鼠、大鼠的遺傳質量監測在國內外主要采用皮膚移植法和生化標記基因法［3-5］。所以我們選用生化標記基因法進行對送檢大鼠的遺傳概貌進行了分析。

本研究參照實驗動物生化標記檢測方法的國家標準［1］，分別對5批送檢大鼠的相應組織中Akp1、Es1、Es3、Es4、Es10和Es6，8，9等8種同工酶的表達情況進行了檢測。檢測結果發現，來自送檢單位2011和3026的大鼠在Es3位點中雖都出現3條帶，屬于a帶型，但個體之間仍存在表達量、遷移率等差異；來自2014的大鼠在Es1和Es3位點中個體之間存在帶型差異，體現了封閉群的雜合特點。帶型匯總見表1。

8028和8029分別是新引進的DA大鼠與PVG大鼠，國標中沒有相應位點的描述，且送檢個體較少，本研究的檢測結果與已發表的研究結果一致［6］。

［1］GB/T 14927.1-2008實驗動物近交系小鼠、大鼠生化標記檢測方法［S］.

［2］GB/T 14927.2-2001實驗動物近交系小鼠、大鼠皮膚移植法［S］.

［3］孫賀娟，王冬平，王鉅，等.長爪沙鼠生化基因為點檢測方法的建立［J］.上海實驗動物科學，2004，24（4）：211-213.

［4］李華，王太一，史曉平.生化標記基因法對近交系小鼠擴大生產群的遺傳檢測［J］.中國實驗動物學雜志，1996，6（1）：43-46.

［5］史順娣，王丹，趙宏旭，等.采用電泳法對近交系大鼠進行遺傳監測［J］.中國醫學科學院學報，1988，10（5）：311-316.

［6］林彥，唐小玲，王洪，等.近交系DA大鼠遺傳學質量［J］.中國比較醫學雜志，2009，5（19）：59-61.