中藥抗腫瘤制劑多方位研究進展

顏 露，黃繩武

（浙江中醫藥大學藥學院，浙江杭州 310053）

惡性腫瘤已成為危害人類健康最嚴重的疾病之一。臨床上，對腫瘤采取綜合治療的措施，即手術、放療、化療相結合的治療方法。化療可起到一定的治療作用，但伴隨著免疫抑制、骨髓抑制等嚴重毒副反應，未必能確實提高患者的生存質量、延長壽命。中藥抗腫瘤制劑具有毒副作用小和多靶點抗腫瘤的優勢，在物質基礎及多靶點作用等方面的研究有很大進展，本文對此作一綜述。

1 中藥抗腫瘤制劑物質基礎研究

由于中藥作用的整體性、中藥成分和作用機制的復雜性，使中藥抗腫瘤制劑藥效物質基礎的闡明進展緩慢，成為制約共發展的瓶頸。尋找合理的研究方法，闡明藥效物質基礎及作用的本質，建立科學的質量控制方法，是研究的關鍵問題。

物質基礎的研究主要運用“分離解析”研究思路及植物化學逐步分離、藥理活性示蹤模式。從宏觀到微觀，從整體到局部，從3個化學層次(整體-部位-成分)、4個藥理水平(整體動物-組織器官-細胞-分子基因)進行篩選,確定藥效物質。雖然取得了一定進展，但存在活性成分≠藥效物質≠中藥，制劑整體臨床有效而“活性成分”效果較差甚至無效等諸多問題[1]。由此，提出了許多新的、合理有效的研究方法和技術，主要有：

1.1 計算機輔助藥物設計分析技術

在計算機上建立三維化學分子結構模型，通過計算機模擬探討藥物與靶點的相互作用關系，從分子層面上闡釋中藥的藥效物質基礎。鄭春松等[2]研究槲皮素抑瘤物質基礎使用計算機模擬方法，通過分子對接，得到與靶酶最佳相互作用模式。槲皮素中色原酮結構可與COX-2多個部位作用，發揮抑瘤作用，驗證了其是藥效的物質基礎。

1.2 血清藥理學和血清藥物化學分析方法

結合體外血清藥理活性測定方法，對血清中有效成分分離鑒定，將中藥入血成分進行體外活性篩選，最終確定有效成分和代謝產物。王喜軍等[3]對復方安替威膠囊物質基礎的研究運用血清藥物化學分析方法，分析其入血成分，認為綠原酸、黃芩苷既是入血的主要成分，又是眾多代謝產物的前體化合物，最有可能成為藥效的物質基礎，以其為指標進行工藝及其相關研究，能體現藥物的內在質量。

1.3 譜效關系分析

通過建立各色譜峰表征的化學物質和以藥理指標為表征的藥效之間的關系，運用多元非線性回歸、主成分分析等方法分析數據，找出和藥效正相關的色譜峰，歸屬其代表的化學成分，確定中藥或復方的藥效物質基礎。

盧紅梅等[4]對魚腥草注射液進行譜效分析，發現色譜圖中17～21 min中的色譜峰是藥效的主要相關峰，包含的主要化合物有甲基正壬酮、癸酰乙醛、月桂醛、β-蒎烯、β-芳樟醇、1-壬醇、4-松油醇、α-松油醇，其中3種有效物質的活性與文獻報道相符。

1.4 生物色譜技術

以各種具有生物活性的材料作為固定相，將活性大分子、活性細胞膜、甚至活細胞固著在色譜載體上，作為生物活性填料用于現代色譜技術，形成一種能模仿藥物與生物大分子、靶體或細胞間相互作用的色譜系統。色譜中的各種技術參數可定量表征藥物與生物大分子、靶體間相互作用，研究藥物與各種生物活性材料間的特異性結合情況，模擬生理或病理狀態下藥物在體內生物活性表達的一些關鍵步驟，篩選活性成分，揭示藥物的吸收、分布、生物轉化、代謝等機理，探討藥物間的競爭、協同、拮抗等相互作用，具有一定的藥理學或生理學意義[5]。

H.L.Wang等[6]用人血清白蛋白生物色譜技術研究茵陳蒿甲醇提取物在色譜柱上的結合狀態，發現5個主要的保留峰并鑒定了其中兩個化合物濱蒿內酯和茵陳新酯，表明這兩個化合物具有生理活性。

1.5 系統生物學

將代謝組學、蛋白質組學、基因組學、轉錄組學等整合起來，使用高通量的篩選技術通過本質和表征的變化揭示體內物質的變化[7]。如利用代謝組學評價中藥對病理機體的回調能力及其影響機體的多種途徑；采用基因芯片技術、蛋白質組相關分析技術，將中藥的多組分、多靶點、多途徑作用特點與基因、蛋白表達關聯起來，比較各自不同的表達差異，確定不同有效成分對基因及蛋白表達靶點。對于復方，根據表達量的多少與復方的君、臣、佐、使理論和用藥劑量，分析不同有效成分對應基因及蛋白靶點的相互作用、復方各組成單藥之間的密切關系，闡明復方的組成原理[8]。

王喜軍等[9]將代謝組學用于茵陳蒿湯的研究發現茵陳蒿湯對造模后的標記物回調作用明顯，說明其對肝臟疾病有預防作用，從藥物代謝組學角度對經典方劑防治肝損傷給出了全新解釋。

近期提出了基于熱力學觀和還原整合的研究方法[1]及體內外物質組關聯網絡分析[10-11]。前者通過測定中藥的藥效活性物質對生物體生長代謝的干預作用引起的能量轉移和產熱變化，推斷藥物的生物活性，具有準確、靈敏、高通量、普適性好、實時、動態、在線等優點；后者在全面分析中藥組分及其在生物體內形成的代謝物組的基礎上，確定在生物體內具有適宜藥代動力學特征的成分組作為潛在藥效物質組，并通過化學信息學手段，闡明中藥成分組與其在生物體內的潛在藥效物質組之間的網絡對應關系，針對體內潛在藥效物質組進行多重藥效篩選與確證，在體外、體內兩個層次揭示中藥的復雜藥效物質基礎，是中藥物質基礎研究的一個重要補充。

2 中藥抗腫瘤制劑多靶點作用研究

以往對腫瘤的治療主要應用單靶點的高選擇性配體化學藥物分子，很難達到預期效果或毒性很大，難以治愈腫瘤這種涉及多基因，影響多個組織或細胞的疾病。因此提出了多靶點藥物治療以克服單靶點藥物的局限性，中藥抗腫瘤制劑是一種天然的多靶點制劑，具有多角度攻擊和調節疾病網絡系統中的多個環節、不易產生抗藥性等優點[12]。目前，對其多靶點作用的研究主要有：

2.1 抑制腫瘤血管生成

陳剛等[13]用C57BL小鼠接種Lewis肺癌細胞造模，用川芎嗪注射液 50、100、200 mg/（kg·d）腹腔注射 21 d 后，檢測腫瘤體積、重量、肺轉移灶數及微血管密度，并用Western Blot法和免疫組化法分析腫瘤細胞VEGF表達，結果顯示川芎嗪能減少小鼠Lewis肺癌腫瘤體積、重量和肺轉移灶數，并降低腫瘤微血管密度，抑制腫瘤細胞VEGF表達。

2.2 誘導細胞凋亡

趙益等[14]研究腫節風注射液抗腫瘤作用，發現其可促使早期凋亡和中晚期凋亡的細胞出現凋亡小體，誘導細胞凋亡，對腫瘤具有良好的抑制作用。

2.3 抑制端粒酶活性

Kim等[15]實驗發現腫瘤組織中端粒酶活性表達呈陽性，正常組織中端粒酶活性表達呈陰性。腫瘤細胞由于缺乏調節端粒酶的機制，有無限增殖的能力。因此抑制端粒酶活性成為治療腫瘤的一個靶點。苦參堿是中藥苦參抗腫瘤的主要活性成分之一，將不同濃度的苦參堿加入肝癌細胞株HepG-2細胞，發現苦參堿在750 μg/ml濃度可抑制端粒酶活性，明顯下調人類端粒酶逆轉錄酶（hTERT）啟動子的表達[16]。彭彥輝等[17]研究苦參堿對腸癌HT-29細胞株作用表明苦參堿通過抑制DNA合成和誘導細胞凋亡來抑制腫瘤細胞增殖，抑制端粒酶活性是苦參堿抑制腫瘤細胞增殖的一個重要途徑。

3 中藥抗腫瘤制劑新工藝研究

3.1 中藥抗腫瘤靶向制劑

中藥抗腫瘤靶向制劑可分為被動靶向制劑和主動靶向制劑。被動靶向制劑的研究主要有：脂質體、納米粒和乳劑等。El-Samaligy MS等[18]創造性地把水飛薊素包裹在由卵磷脂、膽固醇、環己胺、吐溫-80組成的脂質體中，并通過頰黏膜給藥提高水飛薊素的生物利用度。吳旭錦[19]等以小麥胚芽油為油相，聚氧乙烯氫化蓖麻油為表面活性劑，制備紫蘇子油納米乳，提高紫蘇子油的溶解度和穩定性，重現性好，有一定的靶向效應。

主動靶向制劑多由被動靶向制劑經修飾而來，可增加對特定組織或器官的靶向性，主要的研究有經修飾的脂質體、微球和微囊、納米粒等。時軍等[20]用聚乙二醇2000-二硬脂酰磷脂乙醇胺修飾足葉乙苷脂質體膜制得足葉乙苷長循環脂質體，提高了脂質體的靶向性、穩定性和包封率。張方宇等[21]采用逆向蒸發-短時超聲法制備苦參堿脂質體，用乳糖酰磷脂酰乙醇胺修飾苦參堿脂質體得到乳糖脂苦參堿脂質體，對肝區有特異性親合力，強化靶向作用，在肝臟中相對于其他臟器的靶向效率有顯著性差異。體外對人肝癌HepG2細胞的殺傷率也大大增加，有望成為一種新型靶向抗肝癌藥物。

3.2 中藥抗腫瘤緩控釋制劑

研究主要集中在：滲透泵片、微球和微丸、納米粒等。劉占軍等[22]以二羥基二過碘酸合鎳鉀為引發劑，在殼聚糖上接枝醋酸乙烯酯，后者水溶液中生成殼聚糖納米粒，再利用超聲震蕩技術將0.5～5.0mg的紫杉醇與上述納米粒混合制備負載紫杉醇的殼聚糖納米粒。制劑粒徑均勻，穩定性好，包封率高，體外釋藥具有明顯的緩釋作用。朱陵君等[23]以mPEGPCL為原料，采用乳化-揮發法，制備負載漢防己甲素的高分子納米微球，制劑具有明顯緩釋特征。何燕等[24]比較了燈盞花素凝膠骨架片和滲透泵片的釋放行為，得出以L-PEO為輔料制備的燈盞花素雙層滲透泵片具有良好的控釋釋放行為，穩定性高，體內外順應性好，有較好的發展前景。

4 結語

我國中藥資源豐富，有著悠久的應用歷史和臨床經驗。近年來，我國學者在中藥抗腫瘤制劑方面做了大量研究，取得了顯著的成績。但仍需在以下方面深入研究:物質基礎方面，加強對中藥抗腫瘤制劑物質基礎和整體作用的研究等；制劑工藝方面，加強對主動靶向制劑、控釋制劑及二者相結合制劑的研究。同時，注意結合中藥藥理學、免疫學、細胞生物學、分子生物學等多學科研究方法和多種技術手段，推動中藥完善發展。為提高腫瘤患者的生命質量、促進人類健康做出更大的貢獻。

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