子宮內膜息肉ras基因p21蛋白和p53的表達及意義

高寶輝 祁旦巳 趙志光 謝麗微

子宮內膜息肉ras基因p21蛋白和p53的表達及意義

高寶輝 祁旦巳 趙志光 謝麗微

子宮內膜息肉；p21ras基因；p53

子宮內膜息肉(EMP)是婦科常見疾病，是引起不規則陰道出血的重要原因，可導致不孕，甚至癌變，其發病機制尚不清楚。現普遍認為EMP是一種不能與正常子宮內膜同步增生、分化和脫落的失調性腫瘤。ras基因是一種促進細胞增殖的原癌基因，其家族三個成員具有相似的結構，其編碼的產物為相對分子量21000的蛋白質，故稱為p21蛋白。p21ras基因蛋白的檢測可以反映腫瘤細胞的生長活性，目前ras已成為卵巢腫瘤發病機制研究的熱點，但有關子宮內膜息肉組織中p21ras的檢測及臨床意義尚未見到報道，為此，我們檢測了35例EMP和31例EMP伴腺體不典型增生的組織中p21ras的表達，同時所有病例檢測p53，以探討EMP形成原因，并探討EMP與子宮內膜息肉腺體不典型增生之間的關系。

1 材料和方法

1.1 材料 收集本院2006年1月～2009年6月經病理確診的存檔EMP石蠟標本35例，平均年齡43.7歲，均為增生期EMP；子宮內膜息肉伴腺體不典型增生的石蠟標本31例，平均年齡45.2歲；對照組30例，取自異常子宮出血行宮腔鏡檢查并診刮者，經病理證實為正常增生期子宮內膜。所有病人就診前3個月均無性激素用藥史。未選絕經后病例。

1.2 方法 標本用10%福爾馬林固定，石蠟包埋后，連續切片，厚度4～5um，貼于涂有多聚賴氨酸的載玻片上，常規烘片脫蠟，梯度酒精到蒸餾水化，切片作免疫組化微波修復S-P法檢測。鼠抗人p53單克隆抗體和p21ras抗體為DaKo公司產品，SP試劑盒購自福州邁新生物技術開發有限公司，設陽性和陰性對照，DAB顯色。

1.3 結果判斷 采用兩人雙盲法觀察切片，用半定量積分方法判斷結果，p21ras陽性標準是在細胞質包括核膜特異性出現片狀或顆粒狀棕黃色著色者為陽性細胞，p53蛋白定位于細胞核，為棕黃色顆粒。陽性細胞≤5%為0分，6%～25%為1分(+)，26%～50%為2分(++)，50%以上為3分(+++)。

1.4 統計學處理 數據采用x2檢驗。

2 結果

p21ras的表達：30例增生期子宮內膜僅一例弱陽性表達(1/30)；35例EMP中陰性24例，弱陽性5例，陽性6例，陽性表達率為31.42%(11/35)；EMP伴腺體不典型增生31例中，陰性15例，弱陽性6例，陽性10例，陽性表達率為51.61%(16/31)。

p53的表達：30例增生期子宮內膜陰性28例，弱陽性2例，表達率為6.66%(2/30)；35例EMP中陰性23例，弱陽性7例，陽性5例，表達率為34.28%(12/35)；EMP伴腺體不典型增生31例中，陰性14例，弱陽性8例，陽性9例，表達率為54.83%(17/31)。

表1 子宮內膜組織中p21ras和p53的表達

3 討論

子宮內膜息肉(EMP)是婦科常見病，在青春期后的任何年齡均可發生，臨床可表現陰道不規則出血，經量增多，不孕，3%的病人可發生癌變[1]。EMP表現為子宮內膜基底層腺體和間質出現局限性增生，息肉中間質纖維化甚至膠原化，間質中含有成熟的厚壁血管，腺體可呈囊性擴張、扭曲，腺上皮可伴有增生、不典型增生、甚至癌變。

關于雌、孕激素受體與EMP的關系已見到較多報道，普遍認為長期持續的雌激素刺激是EMP發病原因之一，但近年來有學者提出細胞的增殖與EMP關系密切，現普遍認為K-ras突變是子宮內膜新生物發生發展的早期階段的事件。本研究結果表明，p21ras染色的陽性率和強度都是隨著子宮內膜病變的嚴重程度的增加而增加，即按照正常增生期內膜、子宮內膜息肉、子宮內膜息肉伴腺體不典型增生這個順序，陽性率逐漸增加，表明在子宮內膜息肉病變中，ras基因已有表達，其作為一種促進細胞增殖的原癌基因，可能提示癌變可能始于內膜息肉，其在子宮內膜癌的早期發現可能有積極意義。

ras基因點突變是人類腫瘤最常見的基因異常，Yaginuma等[2]發現p21ras在良性、交界性、惡性漿液性腫瘤過度表達的比例分別是0%、16%、50%，之后伴隨有p53的出現，p21ras和p53的表達之間呈穩定的正相關關系，說明p21ras的過表達是腫瘤惡變的早期基因改變，這跟我們的結果也比較相近。

p53蛋白是重要的細胞生長負調節因子，p53基因突變導致對細胞周期的調節功能喪失，使細胞異常增殖。p53基因也是重要的抑癌基因，p53蛋白作為轉錄因子，通過阻止細胞復制和發動細胞凋亡保持基因組的穩定性，維持細胞正常生長，抑制細胞惡性增殖，對生長起負調節作用，若該基因由于突變、丟失或重排而失活，細胞可能發生惡性轉變，其突變與失活在腫瘤生長與浸潤過程中具有重要作用。抑癌基因p53的突變是人類多種惡性腫瘤中較為普遍的遺傳現象，它的失活表現為突變型p53的過度表達。突變型p53蛋白不僅失去了正常的抑癌作用，而且具有促進正常細胞惡性轉化的作用。

Long等[3]應用免疫組化方法檢測子宮內膜癌ras基因表達產物p21蛋白的改變，結果增生期內膜、腺囊型增生的子宮內膜均無ras癌基因表達，4例不典型增生者有2例表達，11例Ⅰ級內膜癌中有6例表達，22例Ⅱ～Ⅲ級內膜癌中21例(95%)ras癌基因表達陽性。

我們的研究表明，在子宮內膜息肉中即有ras癌基因p21蛋白的表達，在EMP伴腺體不典型增生的病變中表達更為明顯，提示ras癌基因蛋白可能為子宮內膜癌變的早期事件，提示子宮內膜息肉可能已經為子宮內膜癌變提供了一個有利于癌變的組織微環境，提示癌變可能開始于內膜息肉，其對子宮內膜癌的早期發現可能有積極意義。

[1]Schaumberg D A,Snow K K,Dana M R.The epidemic of aeanthamoeba keratit is where do we sdand[J].Cornea,1998,17(3):169-171.

[2]Yaginuma Y,Yamashita K,Kuzumaki N,et al.Ras oncogene produet p21 expression and prognosis of human ovarian tumors[J].Gyneeol Oncol,1992,46(1):45-50.

[3]long CA,Timothy J,Bnien O,et al.Ras oneogene in expression in adnocarcinoma of endometrium[J].Am J OBSTEL Gyneeol,1988,159:1512.

10.3969/j.issn.1009-4393.2010.13.020

溫州市科技局科研基金資助項目(No Y2007A0075)

325027 溫州醫學院附屬二院病理科 (高寶輝 祁旦巳趙志光 謝麗微)