FXYD-3蛋白在口腔鱗狀細胞癌中的表達及臨床意義

王大維 閆寶勇 劉廣順 朱振龍 孫曉峰

FXYD-3屬于 FXYD家族的一個成員，是 Morrison等[1]在家鼠乳腺癌中發現的一種分子量為 8KD的單跨膜蛋白，簡稱為 Mat-8(mammary tumor，8 kD)，研究發現其在人乳腺癌和癌細胞系中表達上調[2]，但在前列腺癌中的表達下調[3]。關于FXYD-3在口腔鱗狀細胞癌中的表達情況如何，筆者目前尚未見報導。本研究采用免疫組化的方法來檢測 FXYD-3在口腔鱗狀細胞癌中的表達情況，并初步探討其與臨床病理參數間的關系。

1 資料與方法

1.1 一般資料 標本選自河北醫科大學第三醫院病理科 1991至 2007年的存檔蠟塊。其中正常口腔黏膜 20例(來自正頜手術及牙槽嵴修整術)，口腔鱗狀細胞癌 57例(包括舌癌 18例，頰癌 13例，牙齦癌 26例)，男 30例，女 27例;年齡 26～78歲，平均年齡 52歲。有淋巴結轉移者 26例，無淋巴結轉移者 31例;高分化者 41例，低分化者 16例(為統計學方便，將中分化和高分化歸類為高分化，將低分化歸為低分化)。所有標本均經兩位副高以上職稱的病理醫生復查確診。

1.2 試劑與方法 石蠟包埋組織做 5μm厚度連續切片，常規HE染色和免疫組化 SP法染色。所用鼠抗人 FXYD-3單克隆抗體由孫曉峰博士惠贈(瑞典林雪平大學)，二抗、三抗均購自福州邁新生物技術開發有限公司。免疫組織化學主要染色步驟:(1)切片脫蠟水化;(2)3%H2O2甲醇滅活內源性過氧化物酶;(3)依次滴加一抗、二抗和三抗;(4)DAB顯色;(5)蘇木精復染;(6)常規脫水、透明、封片。用已知陽性的乳腺癌組織作為陽性對照，用PBS代替一抗作陰性對照。

1.3 染色結果判斷 以癌細胞的胞膜和(或)胞質出現明顯的棕黃色顆粒為陽性細胞。每例隨機選取 10個不重復、不重疊的高倍視野(10×40)，計數陽性細胞數及所有細胞數，計算陽性細胞率 =Σ陽性細胞數/Σ細胞數 ×100%。根據陽性細胞率進行分級，陰性(-):陽性細胞率≤5%;弱陽性(+):陽性細胞率 6%～25%;中等陽性(++):陽性細胞率 26%～50%;強陽性(+++):陽性細胞率 ＞50%。考慮到相似的臨床病理特征，把陰性和弱陽性染色列為陰性組，而把中等陽性和強陽性染色列為陽性組。

1.4 統計學分析 應用SPSS 11.0統計軟件，計數資料采用χ2檢驗，P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 FXYD-3在正常口腔黏膜與口腔鱗狀細胞癌中的表達FXYD-3蛋白在正常口腔粘膜陽性著色定位于上皮細胞的細胞質和(或)細胞膜上，以細胞質為主，細胞核表達陰性。見圖 1、2。正常口腔黏膜中 FXYD-3陽性表達率為 10%(2/20)，口腔鱗狀細胞癌中陰性表達率為 37%(21/57)，二者差異有統計學意義(P＜0.05)。

圖 1 FXYD-3蛋白在正常口腔黏膜中的表達(+++)(ABC×400)

圖 2 FXYD-3蛋白在口腔鱗狀細胞癌中的表達(+++)(ABC×400)

2.2 FXYD-3蛋白表達與口腔鱗狀細胞癌患者臨床病理特征的關系 FXYD-3蛋白在口腔鱗狀細胞癌組織中的表達與患者的性別、年齡、腫物大小、大體形態、組織學分級及淋巴結轉移情況均無明顯相關性(P＞0.05)。見表 1。

表 1 FXYD-3蛋白表達與口腔鱗狀細胞癌患者臨床病理特征的關系 例(%)

3 討論

FXYD蛋白家族是新近發現的一組小分子轉運通道或通道調節器，與Na-K-ATP酶的結構和功能有密切關系，在生理狀態及多種病理狀態下起著重要作用，成為新近醫學生物學領域研究的熱點之一[4，5]。該蛋白的氨基端包含一個由 35個氨基酸組成的特殊序列，以 PFXYD(脯氨酸-苯丙氨酸-X-酪氨酸-天冬氨酸)開始，包含 7個不變氨基酸和 6個高度保守的氨基酸序列。FXYD蛋白家族現有 7個成員，都屬于小分子蛋白，他們中有 6個與 Na-K-ATP酶有關，并且調節 Na-K-ATP酶的轉運功能[6]。

FXYD-3(也稱 Mat-8)是 Morrison等[1]在 1994年研究鼠類乳腺癌時發現的一個分子量為 8 kD的單跨膜蛋白質，屬于FXYD家族成員，研究表明，它不僅在人體正常組織中(如肝臟、腸道、前列腺、肺臟、胰腺、腦組織和皮膚等)有一定表達[4，7]，而且在越來越多的腫瘤組織及瘤細胞系中發現其表達上調。有人應用 RT-PCR和 RNA blot等方法對人乳腺癌中FXYD-3的表達情況進行研究，結果發現在 16例人乳腺癌組織中均有明顯表達，而且還在 11例人乳腺癌細胞系中有表達[2]。

但在前列腺癌的研究中卻出現了相反的結果，Vaarala等[3]對FXYD-3在前列腺癌細胞系及良性前列腺增生中的表達研究結果發現:FXYD-3在良性增生性病變時表達上調，而在癌細胞系中則表達下調，甚至有的不表達。而Grzm il等[8]的研究則發現在 11例前列腺癌組織和對應的 11例正常前列腺組織中，6例前列腺癌中 FXYD-3的表達比正常組織升高 2～35倍，2例則表達下降至正常的 20%～50%，另外 3例癌的FXYD-3的表達則與正常前列腺組織中的表達相同，而且該研究結果還發現前列腺癌的分期越高，FXYD-3表達越高，且在研究的 6例前列腺癌細胞系中 FXYD-3均明顯表達。

本實驗結果發現，20例正常口腔黏膜組織中，其陽性表達率僅為 10%(2/20)，與 FXYD-3在口腔鱗狀細胞癌組織中的陽性表達率 36%(21/57)比較差異有統計學意義(P＜0.05)，該結果與以上多數研究結果相同，表明 FXYD-3在癌組織中的表達高于相應正常組織，提示 FXYD-3可能與癌的發生有關。本實驗結果還顯示FXYD-3在口腔鱗狀細胞癌組織中的表達與患者性別、年齡、腫物大小、大體形態、組織學分級及淋巴結轉移情況均無關(P＞0.05)，同時通過對 FXYD-3在瘤組織中央區域和邊緣區域以及血管周圍區域的染色強度進行對比觀察，也未見明顯差異，這些結果都似乎提示FXYD-3在口腔鱗狀細胞癌中的表達上調，可能只是口腔鱗狀細胞癌發生階段的一個早期事件，與腫瘤的浸潤轉移的關系可能不大。

在對人非小細胞肺癌的研究中發現 FXYD-3在預后較差的腫瘤中較預后較好的腫瘤中表達增加，提示FXYD-3的表達可能是非小細胞肺癌預后的一個新的生物學指標[9]。本組資料中缺乏隨訪結果，對FXYD-3與口腔鱗狀細胞癌患者的生存期之間的關系無法評估。

總之，從本實驗結果及相關文獻報道來看，FXYD-3在多數腫瘤中表達上調，可能與腫瘤的發生有一定的關系，至于具體關系如何以及為什么在某些腫瘤中的表達結果相反等問題，尚需大樣本進一步探討，推測對 FXYD-3在腫瘤中的表達進行深入的研究，有可能對腫瘤的發生機制有進一步的了解。

1 Morrison BW，Leder P.Neu and ras initiatemurinemammary tumors that share genetic markers generally absent in c-myc and int-α-initiated tumors.Oncogene，1994，9:3417-3426.

2 Morrison BW，Mooman JR，Kowdley GC，et al.Mat-8，a novel phospholemman-like protein expressed in human breast tumors，induces a chloride conductance in Xenopus oocytes.JBiol Chem，1995，270:2176-2182.

3 Vaarala MH，Porvari K，Kyllonen A，et al.Differentially expressed genes in two LNCaP prostate cancer cell lines reflecting changes during prostate cancer progression.Lab Invest，2000，80:1259-1268.

4 Franzin CM，Gong XM，Teriete P，etal.Structuresof the FXYD regulatory proteins in lipid m icelles and membranes.J Bioenerg Biomembr，2007，39:379-383.

5 Geering K，Beguin P，Garty H，et al.FXYD proteins:new tissue and isoform-specific regulators of Na，K-ATPase.Ann N Y Acad Sci，2003，986:388-394.

6 Delprat B，Bibert S，Geering K.FXYD proteins:novel regulators of Na，K-ATPase.Med Sci(paris)，2006，22:633-638.

7 Sweadner KJ，Rael E.The FXYD gene fam ily of small ion transport regulators or channels:CDNA sequence，protein signature sequence，and expression.Genomics，2000，68:41-56.

8 Grzm il M，Voigt S，Thelen P，et al.Up-regulated expression of the MAT-8 gene in prostate cancer and its siRNA-mediated inhibition of expression inducesa decrease in proliferation of human prostate carcinoma cells.Int JOncol，2004，24:97-105.

9 Gordon GJ，Richards WG，Sugarbaker DJ，et al.A prognostic test for adenocarcinoma of the lung from gene expression profiling data.Cancer Epidem ial Biomarkers Prev，2003，12:905-910.