寡克隆帶檢測在小兒中樞神經系統感染疾病的應用價值

肖持堅,李小敏,黎 敏,郭柳微,李穎莉

(梧州市工人醫院,廣西 梧州 543000)

在小兒常見的幾種神經系統疾病中,如中樞系統炎性疾病[尤其是多發性硬化(MS)],檢測腦脊液寡克隆帶(OCBs)是其診斷的一項重要指標。國內外研究表明診斷 MS的 90%-95%患者其 CSF可以檢測到 OCBs[1],而在其他一些神經系統炎性疾病,包括大腦的病毒感染、神經梅毒、狼瘡性腦病等,腦脊液 OCBs的檢測陽性率亦有 24%-50%,故其可能對這些疾病的診斷有幫助[1-4,10]。在病毒性腦炎癥中,常常出現腦脊液蛋白質濃度的升高,其中部分是由于血腦屏障的受損,而另一部分是由于內源性合成增加,而后者,即內源性的合成增加,并伴有免疫球蛋白的異質性,可以在高分辨率的電泳過程中出現單克隆帶,具有特征性。目前中樞神經系統感染疾病的發生機制不明,為此,本研究對 46例患者的 OCBs進行分析,報道如下:

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取 2005-2007年期間在我院兒科住院的總共 46例確診為中樞神經系統感染性腦病的患兒,其中病毒性腦炎 33例,其他顱內感染 13例(結核性腦膜炎 5例,化膿性腦膜炎 5例,新型隱球菌腦膜炎 3例);男性 31例,女性 15例,年齡最大 13歲,最小 6個月,平均 4.5歲。

1.2 方法

1.2.1 基本方法 所有患兒入院后均做腰穿取 3 ml腦脊液,并同日抽外周血血清 2 ml,根據病情需要或腦脊液異常,則重復腰穿留置標本,所有標本都置于 -20℃保存待測。

1.2.2 腦脊液常規檢測 所有腦脊液標本都檢測并記錄白細胞數目、細胞分類、蛋白定量、葡萄糖水平,做病原學篩查。

1.2.3 寡克隆帶檢測 采用瓊脂糖凝膠免疫固定電泳(IFE)的方法對采集的腦脊液和血清標本予以檢測,經瓊脂糖凝膠電泳將蛋白質分離后,再采用免疫固定技術,抗 IgG酶標抗血清加入凝膠片上,利用高度特異抗體標記的酶,在固相酶免疫反應中進行顯色后使樣本呈現寡克隆區帶,并對此寡克隆區帶的免疫球蛋白的性質予以確定。對在腦脊液標本出現異常區帶(OCBs)而血清標本無相應區帶出現,或腦脊液和血清標本均出現異常區帶,而腦脊液出現不同于血清≥2個以上的異常區帶視為陽性。所有 CSF和血清的標本 OCBs檢測都通過法國西比亞全自動電泳分析儀(HYDRASYS.SEBIA.PN1211)完成,并且由兩個通過培訓的實驗室人員分別執行,以同樣的陽性結果為準[5-6]。

1.2.4 記錄 記錄每個患者的臨床表現、腦電活動和影像學異常發現,OCBs陽性患者出院后隨訪1-24個月。對病毒性腦炎組 OCBs陽性、非陽性病人的臨床嚴重程度、腦脊液數據進行比較。

1.3 統計學方法 計數資料比較采用 x2檢驗,定量資料兩樣本均數比較應用 t檢驗。

2 結 果

46例患者中,CSF-OCBs陽性者有 10例,陽性率為 21.7%,其中病毒性腦炎組 7例,非病毒性腦炎組 3例。兩組比較其 OCBs陽性率差異無統計學意義(P＞0.05)。見表 1。

表1 兩組 OCBs陽性與陰性比較(例)

病毒性腦炎組 29人次腦電圖描記異常,占87.8%,主要異常表現為彌漫或局部慢波發放,檢查頭顱 CT,異常率占 17%,頭顱核磁共振檢查 12人次,異常率 41%,OCBs陽性組均檢查頭顱核磁共振,異常 2例,均為局部腦實質炎癥改變。病毒性腦炎組根據 OCBs陽性與否分兩組,比較它們之間臨床輕重程度,腦脊液細胞數、蛋白定量差異無統計學意義 ,見表 2。

10例 OCBs陽性病例中重復腰穿腦脊液持續陽性 2例,1例是腮腺炎和病毒性腦炎,1例是隱球菌腦膜炎,病程時間均 ＞4周,后者多次行腰穿涂片查隱球菌陽性。

9例 OCBs陽性患者經治療好轉,隨訪 24個月,無再次神經系統損傷的臨床表現。另外 1例隱球菌腦膜炎多次腰穿腦脊液 OCBs持續陽性,出現多條異常區帶,該患兒住院 10周,因經濟困難自動出院,失去隨訪。

表2 病毒性腦炎組臨床數據比較結果[例(%),x±s,n=33]

3 討 論

檢測腦脊液和血清寡克隆帶廣泛應用于神經系統炎癥性疾病的臨床診斷上,它證明神經中樞本身參與活躍的免疫應答。OCBs是一項靈敏的定性指標,其陽性存在表明中樞神經系統有其本身合成的免疫球蛋白。在國內外的臨床研究中,OCBs陽性可出現在多發性硬化和中樞神經系統感染疾病,前者大多血清檢測陰性而 CSF陽性,后者可有血清、腦脊液陽性,腦脊液陽性區帶異于血清的表現形式,提示其 OCBs陽性區帶可能與多發性硬化的意義不同[7-8]。

本研究應用瓊脂糖凝膠免疫固定電泳方法檢測中樞神經系統感染疾病 CSF-OCBs,其陽性率為21.7%,與國內、國外相關研究結果接近或偏低,考慮為由于本組研究的患兒在治療上大多應用皮質激素,可能造成 OCBs陽性率偏低。病毒性腦炎組陽性率為 21.2%(7/33),與非病毒性組比較差異無統計學意義,提示 CSF-OCBs與感染病原無關,OCBs可作為腦脊液異質性免疫球蛋白出現的定性指標,但對病因診斷為非特異性指標。

病毒性腦炎組中根據寡克隆帶陽性與否分組,比較其臨床表現的輕重、腦脊液細胞計數、蛋白定量分析,其差異無統計學意義,隨訪的 OCBs陽性病兒臨床無新的神經系統損傷癥狀和體征,顯示在中樞神經系統感染疾病中,OCBs出現的機制不明,往往顯示一過性,常見的一些神經系統疾病臨床特征如腦脊液的白細胞數目、蛋白總量不能反映 OCBs的出現意義;一例腮腺炎和病毒性腦炎、一例隱球菌腦膜炎重復腰穿 OCBs持續陽性,后者多次涂片均找到隱球菌,OCB異常帶顯示多條陽性。2個病例病程均 ＞4周,支持“持續活動的感染、血腦屏障功能受損或病毒誘導顱內免疫紊亂可能與 OCBs陽性有關”的推測[9-11]。

小兒中樞神經系統感染可引起體液和顱內免疫紊亂,應用瓊脂糖凝膠免疫固定電泳方法檢測OCBs,敏感性可達 70%-85%,而檢驗要求和價格比等電聚焦加免疫印跡等技術更簡單、省時和便宜,值得在普通兒科神經內科推廣[6]。

CSF-OCBs檢測陽性可反映顱內自身免疫球蛋白鞘內合成,不單單是應用于某個病人考慮脫髓鞘病變的診斷,如多發性硬化,它具有更多的臨床意義。綜合分析其在神經系統炎性疾病,如對小兒中樞神經系統感染疾病的診斷和發病機制甚至治療上有重要的參考價值。

[1] BN Mc Lean,RWLuxton,EJThomoson.Astudy of immunoglobulin G in the cerebrospinal fluid of 1007 patients with suspected neurological disease using isoelectric focusing and the log IgG-index[J].A comparison and diagnostic applications Brain,1990,113∶1 269-1 289.

[2] 邱 偉,胡學強.腦脊液寡克隆區帶檢測在神經系統疾病診斷中的意義[J].新醫學,2006,37(10)∶638-640.

[3] Reiber H.Cerebrospinal fluid-physiology.analysis and interpretation of protein patterns for diagnosis of neurological diseases[J].Mult Scler,1998,4∶99-107.

[4] Marcel M,Verbeek,Herman PM.Comparison of Methods for the Detection of Oligoclonal IgG Bands in cerebrospinal fluid and serum:Results of the Dutch Quality Control Survey[J].Clinical Chemistry,2002,48(9)∶1 578-1 580.

[5] Cavuoti D,Baskin L,Jialali.Detection of oligoclonal bands in cerebrospinal fluid by immunofixation electrophoresis[J].Am J Clin Pathol,1998,109∶585-588.

[6] Richard S,Miossec V,Moreau JF,et al.Detection of oligoclonal immunoglobulins in cerebrospinal fluid by an immunofixation-peroxidase method[J].Clin Chem,2002,48∶167-173.

[7] Bourahoui A,De Seze J,Grttierezc R,et al.CSF isoelectrofocusing in a large cohort of MS and other neurological diseases[J].Eru J Neurol,2004,11(8)∶525-529.

[8] Luisa M,Villar.Early Differential Diagnosis of Multiple Sclerosis U-sing a New Oligoclonal Band Test[J].Arch Neurol,2005,62∶574-577.

[9] SM Gregoire,V Van Pesch,S Goffette.Polymerase chain reaction analysis and oligoclonal antibody in the cerebrospinal fluid from 34 patients with varicella-zoster virus infection of the nervous system[J].J Neurol Neurosurg Psychiatry,2006,77∶938-942.

[10]BN McLean,D Miller,EJ Thompson.Oligoclonal banding of IgG in CSF,blood-brain barrier function,and MRI findings in patients with sarcoidosis,systemic lupus erythematosus and behcet's disease involving the nervous system[J].J Neurol Neurosurg Psychiatry,1995,58∶548-554.

[11]Michael Clarke,Richard W Newton,paul E Klapper,et al.Childhood encephalopathy:virus,immune response,and outcome[J].Developmental Medicine and Child Neurology,2006,48∶294-300.