基質金屬蛋白酶-9及基質金屬蛋白酶-2與卵巢上皮性癌血管生成的關系

孫麗君 武軍 李長江

新生血管不僅為腫瘤細胞的增殖提供養分，而且是腫瘤細胞進一步侵襲的重要途徑。近年來研究表明基質金屬蛋白酶(matrix metalloprotein，MMPs)在腫瘤血管生成中起重要作用［1］。本文采用免疫組化鏈霉素抗生物素蛋白-過氧化物酶(SP)法檢測卵巢上皮性癌MMP-9及MMP-2的表達，探討其與局部血管生成的關系，為臨床上進一步了解卵巢上皮性癌腫瘤血管生成情況提供幫助。

1 資料與方法

1．1 一般資料 收集河北省唐山市人民醫院1990至2005年卵巢上皮性癌初次手術切除標本存檔蠟塊75例(卵巢上皮性癌組)，年齡36～62歲，平均年齡48歲;術前未做過任何化療和放療。按WHO分類標準組織學分類，漿液性癌27例，粘液性癌19例，子宮內膜樣癌16例，透明細胞癌13例。按照FIGO分期，Ⅰ期19例，Ⅱ期17例，Ⅲ期23例，Ⅳ期16例。隨機選取同期卵巢良性腫瘤樣本15例作為卵巢良性腫瘤組，年齡21～70歲，平均年齡39歲;因其他婦科良性疾病而行手術治療并在術中進行卵巢活檢的樣本12例作為對照組，年齡38～58歲，平均年齡46歲。

1．2 試劑 即用型鼠抗人MMP-9及MMP-2單克隆抗體(克隆號56-2A4)、SP免疫組化超敏染色試劑盒、二氨基聯苯氨(DAB)，均由美國Maxim公司生產，購自福州邁新生物技術有限公司。

1．3 方法 采用免疫組化SP法檢測卵巢上皮性癌MMP-9及MMP-2的表達情況，步驟按說明書操作。MMP-9及MMP-2免去抗原修復步驟。MMP-9及MMP-2用DAB顯色。用已知陽性片作為陽性對照，用磷酸鹽緩沖液(PBS)代替第一抗體作為陰性對照。

1．4 結果判斷標準 MMP-9及MMP-2的判斷標準參照江忠清等［2］的方法。

1．5 統計學分析 應用SPSS 10．0統計軟件，計數資料采用χ2檢驗，計量資料以ˉx±s表示，兩變量間的關系用線性相關分析，P＜0．05為差異有統計學意義。

2 結果

2．1 MMP-9及MMP-2在卵巢上皮性癌、卵巢良性腫瘤和正常卵巢組織的表達 MMP-9在正常組陽性表達2例，陽性率16．67%，良性組陽性表達8例，陽性率54．45%，惡性組陽性表達62例，陽性率82．67%，MMP-2在正常組陽性表達2例，陽性率16．67%，良性組陽性表達6例，陽性率40．00%，惡性組陽性表達67例，陽性率89．33%，從正常卵巢組織到卵巢良性腫瘤組再到卵巢上皮性癌組，MMP-9及MMP-2陽性表達率顯著升高(P ＜0．05)。

2．2 MMP-9及MMP-2在卵巢上皮性癌和卵巢良性腫瘤組的表達與MVD的關系 在卵巢上皮性癌和卵巢良性腫瘤組中當MMP-9呈陰性表達時，MVD良性組中為(29±13)條，惡性組中為(39±18)條，當MMP-9呈陽性表達時，MVD良性組中為(33±6)條，惡性組中為(38±10)條，當MMP-9呈強陽性表達時，MVD良性組中為(51±12)條，惡性組中為(48±11)條。在卵巢上皮性癌和卵巢良性腫瘤組中當MMP-2呈陰性表達時，MVD良性組中為(21±10)條，惡性組中為(32±14)條，當MMP-2呈陽性表達時，MVD良性組中為(32±5)條，惡性組中為(38±11)條，當MMP-2呈強陽性表達時，MVD良性組中為(45±11)條，惡性組中為(47±11)條，由此可見，在卵巢上皮性癌和卵巢良性腫瘤組中當MMP-9及MMP-2呈陽性表達時，MVD顯著升高(前者 P ＜0．01，后者 P ＜0．05)。線性相關分析顯示MMP-9及MMP-2在卵巢上皮性癌組中表達與MVD顯著正相關(r=0．286，P ＜0．05)。

3 討論

MMPs是蛋白水解酶中較為重要的一類，腫瘤細胞能分泌血管生成因子，如血管內皮生長因子(VEGF)等，可誘導內皮細胞產生MMPs［1］，可見腫瘤細胞除能分泌MMPs外，還通過分泌促血管生成因子間接促進血管內皮細胞產生MMPs，降解細胞外基質(ECM)和基底膜(BM)［3，4］，進而促進腫瘤新生血管的生成，MMP-9(92 kDa 4型膠原酶/明膠酶B)是MMPs中分子量最大的酶，以酶原形式分泌，需經活化后才能發揮作用，其主要功能就是降解4、5型膠原和明膠，與腫瘤血管生成和侵襲轉移能力有關［5］。MMP-2是分子量為72 KDa的4型膠原酶，主要作用底物為4、5型膠原，主要由腫瘤細胞、成纖維細胞和炎性細胞分泌，研究表明其在腫瘤介導的細胞外基質降解中起關鍵作用［6］。而基底膜和基質的降解對血管生成所必須的內皮細胞遷移極為重要，MMP-2被認為是腫瘤血管生成關鍵因素之一［7］。MMP-9及MMP-2在卵巢上皮性癌的表達與局部腫瘤血管生成的關系，國內少見報道。本文資料顯示，從正常卵巢組織到卵巢良性腫瘤組再到卵巢上皮性癌組，MMP-9及MMP-2陽性表達率顯著升高(P ＜0．05)。王喜梅等［8］報道，在卵巢上皮性癌中MMP-9陽性表達率顯著升高(P＜0．05)。本文結果與王喜梅等［8］及國外研究［7］的相符，進一步證實了MMP-9及MMP-2在卵巢上皮性癌中過度表達，促進腫瘤性血管生成。故作者認為，卵巢上皮性癌中MMP-9及MMP-2表達高者，其腫瘤血管生成能力顯著增強。由此可見，卵巢上皮性癌MMP-9及MMP-2表達增強，可能與卵巢上皮性癌的發生發展密切相關。因此，檢測卵巢上皮性癌中MMP-9及MMP-2的表達有助于進一步了解其腫瘤血管生成情況，有一定的應用價值。

綜上所述，血管生成與婦科腫瘤發生發展及治療關系密切。明確卵巢上皮性癌中VEGF調節機制，特別是針對MMP-9及MMP-2與VEGF及其受體的研究，為臨床上進一步了解卵巢上皮性癌腫瘤血管生成情況提供幫助，為通過抑制血管生成過程從而達到抑制癌瘤生長和轉移提供理論依據。

1 Folkman J．Tumor angiogenesis:therapeutic implication．N Engl J Med，1971，285:1182-1186．

2 江忠清．宮頸癌MMP-9表達與腫瘤血管生成，癌細胞增殖及侵襲轉移的關系．癌癥，2003，22:178-184．

3 Chambers AF，Matrisian LM．Changing views of the role of Matrix metalloproteinases in metastasis．J Natl Cancer Inst，1997，89:1260-1270．

4 Ray JM，Stetle-Stevenson WG．The role of matrix metalloproteinases and their inhibitors in tumer invasion，metastasis and angiogenesis．Eur Respir J，1994，7:2062-2072．

5 Aznavoorian S，Murph AN，Stetler-Stevenson WG，et al．Molecular aspects of tumer cell invasion and metastasis．Cancer，1993，71:1368-1383．

6 封國生，譚毓銓．基質金屬蛋白酶及4型膠原酶在胃癌中表達及其意義．中華外科雜志，2000，38:775-777．

7 Rothenberg ML，Nelson AR，Hande KR．New drugs on the horizon:matrix metallop roteinase inhibitors．Stem Cells，1999，17:237-240．

8 王喜梅，孫雷，鄭仁恕，等．應用組織微陣技術研究MMP-9與TIMP-1在卵巢上皮性腫瘤中的表達及臨床意義．腫瘤防治研究，2005，32:484-486．