清熱養心顆粒提取工藝研究

陳春鶯，劉志輝，錢 芳，陸 超

（江蘇省中醫院，江蘇 南京 210029）

清熱養心顆粒由金銀花、黃連、酒黃精、百合等組成，具有清熱解毒、養心安神之功效，臨床用于治療熱毒侵心、氣陰兩傷、心神失寧的病毒性心肌炎急性期以及合并心律失常、心悸胸悶者。本研究通過正交試驗確定其最佳提取工藝，報道如下。

1 儀器與試藥

Waters515型高效液相色譜儀，Waters2487型紫外檢測器；ZW色譜柱恒溫箱（中科院大連化學物理研究所）；Empower色譜工作站；手動進樣器，20!L定量環；BP-211D型1/10萬電子分析天平（德國Sartorius）；KQ-1000E型醫用超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）；101-1A型電熱鼓風干燥箱（南通滬通制藥機械設備廠）；HH-4數顯型恒溫水浴鍋（江蘇省金壇市榮華儀器制造有限公司）。綠原酸對照品（含量測定用，批號為0753-9910，購自中國藥品生物制品檢定所）；高效液相色譜所用試劑為色譜純，水為超純水，其他試劑為分析純；所用中藥材均購自江蘇省藥材公司，并由本室專家鑒定。

2 方法與結果

2.1 正交試驗因素水平選擇

取處方量藥材，選用正交試驗表L9（34），3因素分別為加水量（因素A）、提取時間（因素B）、提取次數（因素C），因素水平表見表1。

表1 因素水平表

2.2 水提取得率

精密吸取各樣品溶液3 mL，水浴蒸干，置105℃烘箱中干燥3h，取出，置干燥器中冷卻30min，取出，迅速稱重。

2.3 正丁醇萃取得率

精密吸取各樣品溶液30mL，加水飽和的正丁醇萃取3次，每次20mL，合并萃取液，水浴蒸干，置105℃烘箱中干燥3h，取出，置干燥器中冷卻30min，取出，迅速稱重。

2.4 綠原酸含量測定

2.4.1 色譜條件

色譜柱：SupelcoODS柱（250mm×4.6mm，5!m）；流動相[1]：乙腈-0.2％磷酸溶液（10∶90）；檢測波長：327 nm；柱溫：30℃；流速：1.0mL/min；進樣量：20!L。

2.4.2 溶液制備

精密稱取綠原酸對照品15.05mg，置棕色量瓶中，加50％甲醇溶解制成每mL含綠原酸301!g的對照品貯備液，用50％甲醇稀釋至30.1，15.05，7.525，3.762 5，1.881 3，0.940 6!g/mL質量濃度的對照品溶液。分別吸取相當于金銀花藥材0.05 g的正交試驗提取液，置50mL容量瓶中加50％甲醇至刻度，用微孔濾膜（0.45!m）濾過，濾液作為供試品溶液。

2.4.3 方法學考察

標準曲線繪制：分別精密吸取不同質量濃度的對照品溶液各20!L，注入高效液相色譜儀中測定。經線性回歸，得綠原酸回歸方程Y=67 848X-29 318，r=0.999 7。結果表明綠原酸質量濃度在0.940 6～30.1!g/mL范圍內與峰面積積分值呈良好的線性關系。

精密度試驗：精密吸取同一對照品溶液20!L，注入高效液相色譜儀，重復測定5次，以峰面積計算，RSD為1.99％。

重現性試驗：取同一批次6份樣品，進行平行試驗。結果的RSD為1.85％。

穩定性試驗：取同一供試品溶液，按上述色譜條件，于0，2，4，6，8，12h分別進樣，測定色譜峰面積。結果 RSD為2.15％（n=6），表明供試品溶液在12h內穩定。

加樣回收試驗：取已知含量的同一批次6個樣品，分別加入綠原酸對照品，測得平均回收率為97.83％，RSD為1.04％（n=6）。

2.5 正交試驗結果

根據L9（34）正交試驗表進行試驗，分別測定提取液中綠原酸量、正丁醇萃取得率和水提浸膏得率。綠原酸量為水煎提取正交試驗的主要考核指標，同時將正丁醇萃取得率和水提浸膏得率作為水煎提取正交試驗的考核指標，權重系數分別定為0.7，0.2，0.1。把綠原酸量 Y1（g）、正丁醇萃取得率 Y2（％）、水提浸膏得率Y3（％）最高者定為100，其余按公式Y′1= Y1i/Y1max×100，Y′2=Y2i/Y2max×100，Y′3=Y3i/Y3max×100，計算相應得分，再按公式Y=0.7Y′1+0.2Y′2+0.1Y′3計算綜合評分作為篩選指標。結果見表2。

表2 水煎提取正交試驗結果表

2.6 方差分析

方差分析表見表3。由方差分析表和正交試驗結果可以看出，因素A對試驗結果有顯著影響，因素B、因素C對試驗結果沒有顯著影響。因素A相對其他因素影響較大，各因素影響大小次序為A＞B＞C；各因素不同水平的影響大小次序為A3＞A2＞A1，B3＞B2＞B1，C3＞C2＞C1。因此最佳提取工藝為A3B3C3，即每次加水10倍，每次煎煮60min，煎煮3次。考慮到工業生產的實際和節能，優選工藝為A2B3C3，即每次加水10倍，每次煎煮60min，煎煮2次。

2.7 驗證試驗

稱取與正交試驗等量藥材3份，按優選的提取工藝提取，測定各指標成分含量。結果平均浸膏得率為33.12％，平均正丁醇萃取得率為3.77％，綠原酸平均含量為114.29mg，所測得平均綠原酸含量、平均浸膏得率和正丁醇萃取得率接近正交最高量，故優選的工藝可行。

表3 方差分析表

3 討論

參考2005年版《中國藥典（一部）》金銀花藥材項下方法[1]，分別以不同比例的乙腈-0.2％磷酸溶液為流動相，結果乙腈-0.2％磷酸溶液（10∶90）能獲得滿意的分離。

由正交試驗結果可知，因素A對試驗結果有顯著影響，因素B、C對試驗結果沒有顯著影響。因素A中A1、A2差異較大，A2、A3差異較小，故優選A2為最佳提取工藝。驗證試驗結果表明，優選工藝合理可行。

[1]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典（一部）[M].北京：化學工業出版社，2005：153.