快速微乳電動毛細管色譜法同時測定忍冬藤中11種有效成分

1 引 言

忍冬藤為忍冬科植物忍冬（Lonicera japonica Thunb.）的干燥莖枝，產于我國大部分地區。忍冬藤具有抗炎、預防和治療肝纖維化、止血、抗病毒等功效。目前，分析評價忍冬藤質量的方法主要有分光光度法、高效液相色譜法。本研究采用快速的微乳電動毛細管色譜法同時分離并測定了忍冬藤藥材中的馬錢子苷、當藥苷、綠原酸等11種有效成分。

2 實驗部分

2.1 儀器與試劑 G1600A 毛細管電泳儀（美國Agilent公司）；未涂層石英毛細管(60 cm ×50 μm i.d.， 有效長度為51.5 cm， 河北永年銳豐色譜器件公司); pHS-4A 型pH計(上海雷磁儀器廠); HS3120 型超聲波提取器（淮陰漢邦公司）。

對照品：馬錢子苷(1)、當藥苷(2)、Secologamin(3)、木犀草苷 (4)、Dimethy-secologamoside (5)、蘆丁(6)、異槲皮苷(7)、金絲桃苷(8)、綠原酸(9)、異綠原酸(10)、木犀草素(11)、毛蕊異黃酮苷(內標)，上述對照品除金絲桃苷和綠原酸購自中國生物制品檢定所外，其余均為本實驗室從忍冬藤樣品中分離（經UV、MS和NMR鑒定，純度＞98.0％），內標選用毛蕊異黃酮苷，忍冬藤樣品分別采自長沙、亳州、杭州、香港、鄭州、深圳、封丘等地，經本實驗室李萍教授鑒定為忍冬科植物忍冬的藤，甲醇(色譜純，Merck公司)。 其它試劑均為分析純（南京化學試劑廠）。超純水由Milli-Q系統制備。

2.2 對照品貯備液與內標溶液的配制 準確稱取各對照品：馬錢子苷0.94 mg、當藥苷1.03 mg、Secoxyloganin 1.32 mg、木犀草苷0.69 mg、Dimethy-secologamoside 0.86 mg、蘆丁0.96 mg、異槲皮苷1.01 mg、金絲桃苷0.90 mg、綠原酸1.72 mg、異綠原酸1.31 mg、木犀草素1.01 mg，分別置于1 mL容量瓶中，加入1.0 mL 50%甲醇溶解，搖勻，即得對照品貯備液。準確稱取毛蕊異黃酮苷2.07 mg，加入1 mL 50%甲醇溶解，搖勻，配制成含毛蕊異黃酮苷2.07 g/L的內標溶液。

2.3 供試品溶液的配制 準確稱取忍冬藤藥材粉末（過250 μm篩）約0.5 g，至具塞錐形瓶中，加入10 mL 50%甲醇，稱定重量。超聲45 min，冷卻，再稱定重量，用50%甲醇補足重量，搖勻，過濾。濾液再經0.22 μm濾膜過濾， 吸取0.5 mL，加入2.07 g/L 20 μL內標溶液，作為供試品溶液。

2.4 實驗方法和檢測條件 運行緩沖液由3%SDS-0.6%正庚烷-6%正丁醇-90.4%硼酸（10 mmol/L，pH 9.0）緩沖溶液組成， 超聲30 min。所有溶液使用前均用0.22 μm濾膜過濾。兩次進樣間用0.1 mol/L NaOH、BGE清洗2 min。進分析樣兩次更換一次BGE溶液。采用壓力進樣：5 kPa×3 s；運行電壓30 kV；柱溫 25 ℃; 檢測波長: 254 nm （經過DAD全波長掃描，3類化合物在254 nm波長下均有最大吸收，故檢測波長選擇為254 nm）。所有實驗均在室溫下進行。

3 結果與討論

3.1 校準曲線和測量精密度 吸取適量上述對照品貯備液， 分別加入20 μL 2.07 g/L內標溶液，配制成不同濃度的標準品溶液進樣分析，以相對峰面積值為縱坐標，進樣濃度為橫坐標繪制校準曲線，大部分目標物的線性范圍為6.0～200 ng/L。取適量對照品溶液，加入20 μL 2.07 g/L內標溶液，搖勻，重復進樣6次，記錄各色譜峰相對校正峰面積，測得各個化合物的日內精密度為0.66%~1.84%。上述溶液每天進樣2次，連續進樣3 d，記錄各色譜峰相對校正峰面積，測得各個化合物的日間精密度為1.38%~2.83%。

3.2 回收率和樣品測定 準確稱取已知含量的藥材粉末0.25 g， 共3份， 定量加入11種標準品（50 mg/L），按2.3節制備樣品液進樣分析。各化合物的標準加入的平均回收率為70.4%～107.1%。

10個產地的忍冬藤樣品的分析結果表明，忍冬藤中Dimethy-secologamoside、綠原酸及異綠原酸的含量較高，異槲皮苷和金絲桃苷的含量最低。實驗結果表明，不同產地的樣品由于生長環境的差異， 其成分有較明顯的差別（全文詳見http://www.analchem.cn/fujian/080654.pdf）。