HPLC法測定戊四硝酯粉及戊四硝酯片的有關物質

戊四硝酯粉及戊四硝酯片收載于《中國藥典》2005年版二部，但現(xiàn)行國家藥典標準中沒有有關物質檢查項。《英國藥典》2007年版中也有收載，但在采用英國藥典的方法進行試驗時，有一雜質峰并不能完全與主峰分開，在對流動相的pH值進行調節(jié)后才能完全分離。因此，本方法主要是在英國藥典的基礎上進行了改進。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 日本島津LC-20AT高效液相色譜儀，SPD-M20A二極管陣列檢測器，LC-20AT泵，SIL-20AC自動進樣器以及CBM-20A系統(tǒng)控制器，CTO-20A控溫箱。

1.2 試藥 戊四硝酯粉及戊四硝酯片由北京益民藥業(yè)有限公司提供，戊四硝酯粉的批號為0803080，戊四硝酯片的批號為0 805060；輔料也由北京益民藥業(yè)有限公司提供；甲醇為色譜純，水為純化水。

1.3 溶液配制

1.3.1 系統(tǒng)適用性試驗溶液 稱取硝酸甘油對照品溶液適量（相當于硝酸甘油20mg），置25ml量瓶中，加甲醇20ml超聲15分鐘，加流動相稀釋至25ml，作為硝酸甘油對照品貯備液，精密量取硝酸甘油對照品貯備液1ml，以及供試品溶液1ml，置100ml量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，濾過，作為系統(tǒng)適用性試驗溶液。

1.3.2 供試品溶液及對照溶液 精密稱取戊四硝酯粉或戊四硝酯片適量（約相當于戊四硝酯25mg），加甲醇20ml超聲15分鐘，加流動相稀釋至25ml，搖勻，濾過，作為供試品溶液；精密量取供試品溶液適量，加流動相稀釋至每1ml含6ηg的溶液，作為對照溶液。用二極管陣列檢測器對供試品溶液的色譜峰純度測定，主峰色譜峰純度均為0.9999。

2 方法與結果

2.1 色譜條件 色譜柱為Phenomenix C18柱（5μm,150 mm×4.6 mm），用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇-水（54：46）（用磷酸調節(jié)pH值至3.0）為流動相；檢測波長為230 nm，進樣體積10ηl。

2.2 系統(tǒng)適用性試驗 取“1.3.1”項下的系統(tǒng)適用性試驗溶液注入液相色譜儀。

2.3 輔料干擾試驗 取輔料適量，照“2.1.2”項下配制，結果表明，輔料不干擾供試品溶液的測定。

2.4 專屬性考察 取樣品分別置紫外燈（254nm、365nm）放置4小時、60℃恒溫烘箱以及RH92.5%的條件下放置，分別于10天取樣，精密稱取適量，照有關物質檢查方法試驗。在這些條件下，降解產物個數(shù)和含量略有增加，與主峰分離度均能符合要求，峰純度均能達到0.9990，說明系統(tǒng)具有良好的專屬性。①酸破壞試驗。取本品適量（約相當于戊四硝酯50mg），置50ml量瓶中，加入1mol/L的鹽酸溶液2ml，在60℃水浴中加熱5分鐘，放冷，加入1mol/L氫氧化鈉溶液2ml，再加入甲醇30ml超聲，加流動相稀釋至刻度，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液。②堿破壞試驗。取本品適量（約相當于戊四硝酯50mg），置50ml量瓶中，加入1mol/L氫氧化鈉溶液2ml，在60℃水浴中加熱5分鐘，放冷，加入1mol/L 鹽酸溶液2ml，再加入甲醇30ml超聲，加流動相稀釋至刻度，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液。③氧化破壞試驗。取本品適量（約相當于戊四硝酯50mg），置50ml量瓶中，加入過氧化氫溶液濕潤樣品后，在60℃水浴中加熱5分鐘，放冷，再加入甲醇40ml超聲，加流動相稀釋至刻度，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液。在這些條件下，降解產物個數(shù)和含量略有增加，與主峰分離度均能符合要求，峰純度均能達到0.9990。

2.5 穩(wěn)定性考察 取“1.3.2”項下配制的對照溶液和供試品溶液，供試品溶液分別放置2、4、6、8小時，測定主成分與雜質的峰面積。主成分的峰面積的變化為0.44%，雜質總量在0.1%以內，沒有單個雜質明顯增加。說明供試品溶液穩(wěn)定。

2.6 定量限 將供試品溶液，依次稀釋，供試品最終濃度為1.2ηg/ml，進樣2μl，信噪比大于3，按主成分計檢測限為2.4ng。

2.7 樣品測定 照“1.3.2”項下配制供試品溶液，戊四硝酯粉中單個雜質含量為0.10%，雜質總量為0.12%；戊四硝酯片中單個雜質含量為0.03%，雜質總量為0.10%。

3 討論

3.1 流動相系統(tǒng) 使用常規(guī)的色譜柱由于流速過大導致色譜柱柱壓過高，本文中方法采用了1.0mlηmin-1流速，同時能將相鄰主峰的色譜峰完全分離。

3.2 由于戊四硝酯在堿中易水解，在進行酸堿等破壞時樣品極易被降解，隨著主峰峰面積的減小，并未發(fā)現(xiàn)有更多的雜質色譜峰，很可能有部分雜質是以小分子或無機物存在，在液相色譜系統(tǒng)中無法出峰。因此，應考慮建立一種其他方法檢測戊四硝酯的無機雜質，以保證產品的質量。

3.3 文中對本法進行了系統(tǒng)驗證，并考察了耐用性，為測定戊四硝酯粉及戊四硝酯片的質量控制提供了保證。