HPLC法測定大豆異黃酮膠囊中金雀異黃素的含量

廣西桂林食品藥品檢驗所（541002）黃海燕 鐘建理

參照保健食品檢驗與評價技術規范（2003年版）保健食品中金雀異黃素的測定，筆者采用HPLC法測定大豆異黃酮膠囊中金雀異黃素的含量，并進行方法學考察，根據考察結果制定了本品的檢驗操作規程，結果較滿意，現報告如下：

1 試藥與儀器

金雀異黃素標準品（Genistein）（Lot:90213）購于上海安譜科學儀器有限公司；甲醇為色譜純，醋酸銨和冰醋酸均為分析純，水為高純水。大豆異黃酮膠囊：天津凱鏞藥業有限公司產品。WATERS高效液相色譜儀及EASY3000色譜工作站；超聲波清洗器，離心機。

2 方法與結果

2.1 色譜條件與系統適用性試驗 色譜柱：phenomenexRC18（250mm×4.6mm，5μm）；流動相：甲醇-0.05mol.L-1醋酸銨緩沖液（pH4.6）（46:54）；檢測波長：260nm[1]；柱溫：35℃；流速：1ml·min-1。

2.2 溶液的配制 精密稱取金雀異黃素對照品適量，加甲醇溶解制成每1ml約含10μg的溶液，作為對照品溶液。精密稱取本品內容物1g，置100ml量瓶中，加甲醇-水（80:20）50ml，超聲處理30min，放冷，加甲醇-水（80:20）至刻度，搖勻，以0.45μm微孔濾膜濾過，取續濾液，即得（供試品溶液）。

2.3 測試方法與結果

2.3.1 線性關系考察 精密稱取金雀異黃素對照品（含量99.5%）10.21mg，置50ml量瓶中，加甲醇使溶解并稀釋至刻度，搖勻。精密量取0.1ml，0.5ml，1.0ml，3.0 ml，5.0ml，10.0ml，置20.0ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻。按上述色譜條件，進樣20μl。以峰面積為縱坐標，進樣量為橫坐標，進行線性回歸，回歸方程：Y=8.569×106X+7.986×104;γ=0.9999。表明金雀異黃素在0.02032～2.032 mg范圍內線性關系良好。

2.3.2 重復性試驗 取同一樣品（1號樣品）6份，按供試品溶液的制備方法制得供試品溶液，按色譜條件測定。結果平均含量為0.8649mg.g-1。RSD為0.3%（n=6）。檢出限（LOD）按信噪比（S/N）為3計算，對照品溶液稀釋至0.01μg . ml-1，進樣20μl，本法檢出限為0.01μg.ml-1。定量限（LOQ）按信噪比（S/N）為10計算，對照品溶液稀釋至0.027μg.ml-1，進樣20μl，本法定量限為0.03μg.ml-1。

2.3.3 回收率試驗 取已知含量的樣品（1號樣品）0.5g置100ml量瓶中，加入0.2032mg.ml-1的金雀異黃素對照品溶液2ml，加甲醇-水（80:20）50ml，超聲處理30min，放冷，加甲醇-水（80:20）至刻度，搖勻，以0.45μm微孔濾膜濾過，取續濾液。以上述色譜條件測定，按外標法計算。測得平均回收率99.33%，RSD為0.4%（n＝6）。

2.3.4 穩定性試驗 取同一份供試品溶液，自配制后分別在0，1，2，4，8，12，24h測定峰面積值，結果峰面積平均值為1548771，RSD為0.6%（n=7），說明供試品溶液在配制后24h內穩定。

2.3.5 樣品測定 取樣品，分別按供試品溶液的制備方法制得供試品溶液，測定。按外標法計算，批號20090803、20090918含量分別為0.086 g.100g-1、0.107g.100g-1；RSD分別為1.91%、1.80%。

3 討論

3.1 金雀異黃素（Genistein，又稱染料木素）是來源于豆類植物和齒狀植物的異黃酮類化合物，其化學名為4，5，7-三羥異黃酮，是大豆異黃酮的主要活性成分，為一種天然的植物雌激素，具有防止早期動脈粥樣硬化及慢性血管疾病等多種藥理作用及生物活性。體內外實驗及流行病學均顯示，其對多種腫瘤均有抑制作用[2]。故有必要對制劑中金雀異黃素行質量控制。

3.2實驗考察結果表明，應用“保健食品中金雀異黃素的測定”是可行的，樣品提取方法簡化使其更快速、簡便、準確可靠。